【知识分享】治疗性蛋白药物SEC分析方法知多少？（三）

前文跟大家分享了SEC分析方法优化的关键要点及其对分离效果的影响，包括流动相、流速、柱外体积、固定相粒径、分析通量和色谱柱耐受性等6个要点。

本文是“治疗性蛋白药物体积排阻分析若干要点”系列第三篇推文，分享SEC分析关键要点：批次间一致性和可放大性。

色谱柱和批次重现性是治疗性蛋白药物SEC分析的另一个关键考虑因素：受填料粒径、孔道结构、表面改性和装柱质量等影响。

图11展示使用3个不同批次BioCore SEC-300 3µm, 7.8×150mm色谱柱分析单抗聚集体和单体的谱图。测试结果如表3所示，3个批次单体峰洗脱时间RSD值为1.35%；3个批次聚集体和单体峰面积RSD值分别为3.39%和0.04%。良好的批次间一致性，得益于精准控制粒径和孔道结构，成熟的表面改性工艺和色谱柱装填技术。

△表3 BioCore SEC-300批次间一致性数据

在开发新的生物药物时，需要分离收集相关杂质进行详细研究以评估其对药物安全性和有效性的影响，此时通常需要使用相关制备柱来缩短分离收集工作时间，加快项目进度。

对于BioCore SEC色谱柱，使用分析柱开发的分离方法可以直接放大至制备柱，同时不损失分离性能。

例如，使用BioCore SEC-300 5µm, 7.8×300mm分析柱开发融合蛋白分析方法，如图12所示。填充相同填料的BioCore SEC-300 5µm, 20×300mm制备柱上，使用更大的样品上样量，在根据横截面积等比例放大的流速下，可以得到与分析柱相似的分离效果。

治疗性蛋白药物液相色谱分析是一个具有相当挑战性的任务，需要一整套不同分离模式的液相色谱柱，包括体积排阻（SEC）、离子交换（IEX）、疏水作用（HIC）、亲水作用（HILIC）、反相（RP）和亲和（Affinity）等。其中SEC是聚集体分析的优选。

使用SEC分析治疗性蛋白药物，需要关注流动相组成、流速和柱外体积，确保良好分离度。此外，填料粒径、分析通量、耐受性、批次间一致性和可放大性在分析实验中意义重大，需要关注相关细节。

纳谱分析BioCore SEC色谱柱采用创新的单分散硅胶颗粒技术和先进的色谱柱化学，提供聚集体分析所需的选择性、高柱效、次级作用最小化、长色谱柱寿命和良好批次重现性等特点，这些特点已经由实际工作中的大量治疗性蛋白药物证明，如单抗（mAb）、双特异性抗体（BsAb）、抗体偶联药物（ADC）和融合蛋白（Fusion Protein）。