【应用分享】食品中低聚半乳糖的测定（GB 5009.289-2023）

低聚半乳糖 (GOS) 是一种具有天然属性的功能性低聚糖，其分子结构一般是在半乳糖或葡萄糖分子上连接1~7个半乳糖基，即Gal- (Gal) n-Glc/Gal (n为0-6) 。在自然界中，动物的乳汁中存在微量的GOS，而人母乳中含量较多，婴儿体内的双歧杆菌菌群的建立很大程度上依赖母乳中的GOS成分。因此，GOS是婴幼儿配方食品及乳品等中常用的添加剂之一。中华人民共和国卫生部2008年第20号公告批准低聚半乳糖为新资源食品，并规定了相应的使用标准。

2023年09月06日，GB 5009.289-2023《食品中低聚半乳糖的测定》正式发布，并于2024年03月06日实施。本文根据该国家标准中的检测方法，采用ChromCore HILIC-Amide色谱柱对食品中低聚半乳糖进行分析。

标准储备液 (10.00 mg/mL) ：分别准确称取100 mg (精确至0.1 mg) 的乳糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖标准品，用水溶解并定容至10 mL，混匀。将各标准储备液转移至储液瓶中，于4 ℃保存，保存期1个月。

混合标准中间液 (1.000 mg/mL) ：吸取各标准储备液 (10.00 mg/mL) 1.00 mL于10 mL 容量瓶中，加水定容至刻度，混匀。临用现配。

混合标准使用液 (10.0 μg/mL) ：吸取混合标准中间液 (1.000 mg/mL) 0.1 mL于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀。临用现配。

试样制备：取有代表性的样品至少200 g，液态样品摇匀；基质均匀的半固态和粉状样品混匀；其他样品需匀浆或粉碎均匀。如特殊需要，制备好的试样冷藏保存，备用。

试样处理：称取1.000 g试样于50 mL烧杯中，用水溶解，转移至50 mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀，作为试样液，待用。吸取20 μL试样液于2 mL具旋盖离心管中，加入200 μL 2-氨基苯甲酰胺衍生溶液，涡旋混合30 s，在60 ℃水浴中保温120 min，取出放至室温，加入1 mL乙酸铵溶液 (0.2 mol/L, pH 4.5±0.1) 涡旋混合30 s。再移取0.50 mL混合溶液于2 mL离心管中，加入200 μL,淀粉葡糖苷酶溶液 (约180 U/mL) ，在50 ℃水浴中保温30 min，取出放至室温，加入0.70 mL乙腈，混匀后6000 r/min离心5 min，上清液用0.22 μm有机微孔滤膜过滤后，供高效液相色谱测定。

混合标准使用液衍生：移取20 μL混合标准使用液于2 mL具旋盖离心管中，加入200 μL 2-氨基苯甲酰胺衍生溶液，涡旋混合30 s，在60 ℃水浴中保温120 min，取出放至室温，加入1 mL乙酸铵溶液 (0.2 mol/L,  pH 4.5±0.1) 涡旋混合30 s。再移取0.50 mL混合溶液于2 mL离心管中，加入200 μL乙酸铵溶液 (0.2 mol/L, pH 4.5±0.1) ，在50 ℃水浴中保温30 min，取出放至室温，加入0.70 mL乙腈，混匀后6000 r/min离心5 min，上清液用0.22 μm有机微孔滤膜过滤后，供高效液相色谱测定。

本文参考GB 5009.289-2023《食品中低聚半乳糖的测定》，使用纳谱分析的ChromCore HILIC-Amide色谱柱对食品中低聚半乳糖进行分析，混标中所有物质均能实现有效分离，样品中基质无干扰，满足标准检测要求。