Prospec现货促销     Prospec专注于蛋白（重组及合成）成产研发，其独有的细菌和哺乳动物表达和蛋白折叠技术使其能在13年内成长为世界一流的科研级蛋白供应商，目前Prospec可以提供细胞因子，生长因子，激素，信号蛋白，病毒抗原等近800种重组蛋白和100多种抗体，是世界上提供蛋白品种最多的公司之一。绝大部分产品是天然成熟型蛋白，而不含有标签蛋白，同时，Prospec绝大部分产品为冻干粉，因此易于运输和保存。前景是一个不断发展的生物科技公司提供全球服务的高度纯化的蛋白质与癌症、凋亡、内分泌学、免疫学、神经科学的发展，细胞因子，蛋白酶相关产品研究界，与干细胞研究。 在我们的蛋白干扰素，白细胞介素，骨形态发生蛋白、肿瘤坏死因子、瘦素、干细胞因子、趋化因子、抗体、prolactins，多肽、酶、病毒抗原、各种生长因子如血小板源、Epidermal、胰岛素、神经、结缔组织、血管内皮细胞、成纤维细胞和更多的..... 我们的研究团队和科学家已经能够为你的研究需要组装6000多种重组蛋白、多肽和抗体。这些蛋白质经过严格的测试，以满足研究和开发的需求，以优异的质量，不妥协的生物活性，具有竞争力的价格。 展望了在科学界声誉，声誉建立在产品创新、客户服务和对细节的关注。我们的质量信誉是在市场上取得有利地位的关键因素，也是制造最优质产品的好处。www.prospecbio.com

Alomone现货促销Alomone 公司是一家位于耶路撒冷的以色列著名的生物科技公司，专著于提供生命科学细胞生物学试剂和服务。ASIC通道属于ENaC / degenerin家族和质子门控离子通道而不是电压依赖性。ASIC1a，ASIC1b，ASIC2a和ASIC3 asic4 ASIC2b，，，和asic5。ASIC通道拓扑结构对ENaCs基础预测。然而，不同的计算程序描绘了不同的通道结构。Alomone实验室抗体是高度特异性的。精心挑选和计划表位，以确保跨物种的最大反应性和与其他蛋白质的最小交叉反应性。新的品种经过严格的质量控制，并与以前的地段比较前释放。每个抗体运用于免疫动物免费对照抗原。识别细胞外结构域的抗体是活体细胞成像和活细胞流式细胞仪的重要工具，均采用活的完整细胞。不需要打孔固定。寻找产品名称中的外部。我们提供豚鼠不断产生的抗体数量。豚鼠提高抗体可以用于任何其他非豚鼠二种抗体在免疫共定位研究，如免疫组化（IH）或免疫细胞化学（IC）。关于Alomone LabsAlomone实验室是一个离子通道的领先供应商，G蛋白偶联受体和神经信号的工具。我们专门设计和生产高品质的初级抗体，小分子，肽毒素和蛋白质。1989成立Alomone实验室已成为研究离子通道的工具，世界各地的科学家使用最全面的来源。加入成千上万的研究人员使用我们的产品！离子通道Elisa KITG蛋白偶联受体运输、换热器和泵神经营养因子和受体神经信号神经干细胞成像工具免疫共定位产品活细胞成像产品Alomone 公司作为世界上最著名的离子通道专业供应商，它的离子通道抗体是世界上最全的、质量也非常好！目前被世界各地的科学家广泛的使用。详情见官方网站：www.alomone.com

康朗生物2018年春节放假通知敬爱的客户及各位同事：　　根据《国务院关于修改全国年节放假办法>的决定》，现将企业有关春节放假时间安排通知如下：春节：2018年02月25日至2018年02月25日（初十），共15天。2月26正常上班，放假期间，请各部门务必做好安全防范工作。为保证过节和业务两不误,本公司真诚提醒您注意以下事项;: 1.放假期间我司将不安排出货和业务事宜,若贵司有订货需要,请配合在放假前后加理! 2.如贵司在年前有订单需求,请及时下达采购订单或交货排程式,以便于我司备货 ! 谢谢! 新的一年,我们将以最优质的服务为您提供更全面的合作.再次感谢尊敬的客户，同事们对本公司一直以来的关注与支持! 在此向各位新老客户和广大朋友们拜个早年!预祝大家新春愉快!财源广进!事业红火!                                                                                                 特此通知。 　　                                  上海康朗生物科技有限公司　　                                                          2018年2月6日

血浆中C5a的ELISA测定实验原理将抗C5a单克隆抗体包被固相聚苯乙烯板，加入经聚乙二醇(PEG)处理的待测样本，然后依次加入兔抗人C5a-IgC多克隆抗体和过氧化物酶标记的猪抗兔IsC，再加入底物2，2’-连氮-双(3-乙基苯骈唑啉-6-磺酸盐)(ABTS)和H2O2显色，于酶标仪405mn处测定每分钟光密度增加量(OD/min)，以OD/min为纵坐标，C5a标准晶浓度为横坐标绘制标准曲线图，求出待测样本中C5a的含量。实验试剂1. PBSPH7.2，9mmol/L磷酸盐缓冲液含140mmol/L NaCl。2. PBS-Tween pH7.2 PBS含0.05％Tween20，简称PBS-T。3. 底物溶液：100mL 2mmol/L ABTS溶液中含100mmol/L醋酸钠，50mmol/L磷酸钠，2.5mmol/L H2O2。4. 沉淀剂：①：100mL pH8.0，20mmoL/L Tris-甘氨酸-HCl缓冲液中含20g PEG 4 000，0.8g Rivanol；沉淀剂②：100mLpH2.0.100mmol／L甘氨酸-HCl缓冲液中含20g PEG4000。实验步骤1. 用盐和/或PEG沉淀血浆中C5：在微量反应板中加入EDTA抗凝血浆100gL，然后加人100/uL沉淀剂，用下述三种方法中任何一种沉淀血浆中C5。   1) 在微量反应板中加入100uL 2mol/L HCl与100uL EDTA抗凝血浆混合，室温5h。加入HCl后血浆pH值在1.0-1.5之间。上清用4倍体积的0.29mol/L Tris调节至pH7.1-7.4。   2) 在微量反应板中加入100uL沉淀剂①，室温30min。   3) 在微量反应板中加入100uL沉淀剂②(血浆pH值在4.0-4.5之间)。室温30min。用方法2)和方法3)沉淀C5后，上清加入4倍体积的含0.05％Tween 20 pH7，10.21mol/L Tris-HCl缓冲液，血浆被稀释10倍。2. 用抗C5a单克隆抗体(McAb)包被酶标反应板：用pHl0.6，50mmol/L碳酸钠溶液将抗C5aMcAb稀释成10ug/mL，每孔加100uL，4℃ 16h。次日取出每孔加含1％(W/V)明胶的PBSl50gL，室温lmin；然后用PBS-Tween 20洗涤一次。3. 样本中CSa的检测：洗涤后的酶标板，每孔加入方法1)、2)或3)处理的血浆样本zoot&，4℃16h，用PBS-Tween20洗涤1次，每孔加入用含0．1％明胶的PBS-T稀释的兔抗人CSa-IgC．多克隆抗体(46ug/mL)100t&，室温2h，用PBS-Tween20洗涤3次；每孔加入用含0.1％明胶PBS-T稀释的过氧化物酶标记的猪抗兔IgClOOt&(稀释前lmL过氧化物酶偶联物内加100ul无关鼠McAb、10ul人血浆或10ul激活的人血清处理)，室温2min，每孔用PBS-Tween20洗涤4次；每孔加入底物溶液100ul，lmin后以PBS-T调零，每3min于酶标仪405nm处读取OD值。以OD/min增加量计算过氧化物酶活性。其活性与血浆中C5a含量呈正相关。本法最低检测极限为1ng/mL，此法未检测出正常人新鲜血浆中的C5a。4. 标准曲线的绘制：取已知浓度纯化的C5a，对倍稀释成一系列不同的浓度(0.039-5.000ng/mL)，分别加入包被有抗C5aMcAb的酶标板中，然后按上述方法依次加入兔抗人C5a-IgC和过氧化物酶偶联的猪抗兔IgC及过氧化物酶的底物，以PBS-Tween调零点，读取OD40s/min增加量，以C5a(desarg)浓度为横坐标，OD40s/minx 200为纵坐标绘制标准曲线。每次绘制标准曲线应取6个已知浓度的纯化C5a。

果蔬维生素C含量的测定及分析实验原理维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有化学致癌物的阻断作用。维生素C主要存在于新鲜水果及蔬菜中。水果中以猕猴桃含量最多，在柠檬、桔子和橙子中含量也非常丰富；蔬菜以辣椒中的含量最丰富，在番茄、甘蓝、萝卜、青菜中含量也十分丰富，野生植物以刺梨中的含量最丰富，每100克中含2800毫克，有“维生素C王”之称。维生素C为无色晶体，味酸，溶于水及乙醇，不耐热，在碱性溶液中极不稳定，日光照射后易被氧化破坏，有微量铜、铁等重金属离子存在时更易氧化分解，干燥条件下较为稳定。故维生素C制剂应放在干燥、低温和避光处保存；在烹调蔬菜时，不宜烧煮过度并应避免接触碱和铜器。维生素C具有很强的还原性。它可分为还原性和脱氢型。还原型抗坏血酸能还原染料 2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。因此，当用此染料滴定含有维生素C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化前，则滴下的染料立即被还原成无色。一旦溶液中的维生素C已全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以，当溶液从无色变成微红色时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。如无其它杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含还原型抗坏血酸量成正比。实验试剂1. 2%草酸溶液: 草酸2g溶于100mL蒸馏水中。2. 1%草酸溶液: 草酸1g溶于100mL蒸馏水中。3. 标准抗坏血酸溶液（1mg/mL）: 准确称取100mg纯抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于1%草酸溶液中，并稀释至100mL，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用前配制。4. 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液: 250mg 2,6-二氯酚靛酚溶于150mL含有52mg NaHCO3的热水中，冷却后加水稀释至250mL，贮于棕色瓶中冷藏（4℃）约可保存一周。每次临用时，以标准抗坏血酸溶液标定。实验设备1. 锥形瓶100mL(′2)2. 吸量管10mL(′1)3. 容量瓶100mL(′1)，250mL(′1)4. 微量滴定管5mL(′1)5. 研钵6. 漏斗7. 纱布实验材料自选材料实验步骤1. 提取水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后称取 20g，加入20mL 2%草酸，用研钵研磨，四层纱布过滤，滤液备用。纱布可用少量2%草酸洗几次，合并滤液，滤液总体积定容至50mL。2. 标准液滴定准确吸取标准抗坏血酸溶液1mL置100mL锥形瓶中，加9mL 1%草酸，用微量滴定管以0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并保持15s不褪色，即达终点。由所用染料的体积计算出1mL染料相当于多少毫克抗坏血酸（取10mL 1%草酸作空白对照，按以上方法滴定）。3. 样品滴定准确吸取滤液两份，每份10mL, 分别放入2个锥形瓶内，滴定方法同前。另取10mL 1%草酸作空白对照滴定。4. 计算式中：VA为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数；VB为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数；C为样品提取液的总毫升数；D为滴定时所取的样品提取液毫升数；T为1mL染料能氧化抗坏血酸毫克数（由操作二计算出）；W为待测样品的重量（g）。注意事项1. 某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。2. 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应小于1mL或多于4mL，如果样品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。3. 提取的浆状物如不易过滤，亦可离心，留取上清液进行滴定。

ELISA经验总结之牛奶样本的处理方法牛奶的营养价值很高，所以牛奶经常作为科研实验的样本，怎么处理牛奶的样本呢？小编给您介绍两个处理牛奶样本的方法。方法11取牛奶10ml入离心管，加入10ml乙酸乙酯，超声震荡30min。2然后4000g离心10min（如两相之间出现乳化层，则将样品瓶放在80℃的水浴中约5min，再离心）移取1ml乙酸乙酯层至另外试管中，60℃氮气流下蒸干，残留物用缓冲液2ml缓冲后备用，前处理过程约需2小时。END方法2取10ml牛奶10℃3500G离心10MIN，祛除上层脂肪，上海劲马生物ELISA试剂盒牛奶样本处理时，取5ml脱脂奶粉加入150微升17.2%，出现沉淀，漩涡混合。2然后加入150微升53.5%硫酸锌。3再次漩涡混合。415摄氏度3500g离心10分钟，取上层清液用缓冲液1：2稀释待用，前处理过程所需1小时。

双抗体夹心法实验报告为什么要设计空白组和阴性对照组是为了保证通过双抗夹心法检测到的信号确实是来自于目标目标蛋白。空白组，只加缓冲液，看板子或者是液体有没有引入背景，如果有一些，可以用样品信号值减去空白组的值，算出具体的信号值。阴性对照，则是不加样品，其他都和样品组一样，这样的话，如果有信号，肯定是非特异反应引起的。有了这些对照就可以看出来样品的检测是否正确了。空白对照组、阴性对照组、阳性对照组怎么设置空白对照组：不加任何物质，反应显色为试剂本身。 阴性对照组：加入阴性血清（物质）反应显色为阴性颜色。 阳性对照组：加入阳性血清（物质）反应显色为阳性颜色。 试验中加入这三组对照。一是用于判断检测结果，而是用于质量控制！

ELISA试剂盒实验清洁方面应注意什么1. 洗板   ① 保证洗液注满各孔，洗板针疏通，洗完板后最好在吸水纸（选择洁净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干；   ② 合理安排，或多用几台洗板机。2. 读板    应保证酶标板清洁，在整个操作过程中保证酶标板不触摸次氯酸；尽可能完结ELISA检测标准自动化，有用前进检测质量。3. 加样   ① 标本为血清：最好将血液先天然寄存1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：有必要运用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后有必要当即倒置采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。   ② 加样后及时放入孵箱。   ③ 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。   ④ 如果选用AT或其他全自动加样，最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。   ⑤ 标本较多时，请分批操作。

想象ELISA实验的功效可能超出您的底线样本要求1. 样本不能含叠氮钠，因为叠氮钠是辣根过氧化物酶的抑制剂。2. 标本搜集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行试验。若不能当即试验，可将标本 兔子基质金属蛋白酶9试剂盒本试剂盒运用双抗体夹心法测定标本中样本水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次参与，再与HRP符号的抗体结合，构成抗体-抗原-酶标抗体复合物，ELISA试剂盒通过彻底洗刷后加底物TMB显。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝，并在酸的效果下转化成终究的黄。彩的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过规范曲线核算样品中样本浓度。试剂盒平衡试剂盒中悉数试剂和板条均应在试验前平衡至室温，ELISA试剂盒一般需在室温放置20～30分钟以上。平衡时间太短会构成试剂混匀不可，样品孵育时间相对缩短，ELISA反应不可充沛。冬季室温低，可将试剂盒置37℃温箱20分钟。

                           试剂盒洗涤次数以及法则1.第二个影响洗刷作用的主要参数是洗刷循环的量。当然，洗刷次数越多，布景越低。可是，太多次的洗刷会下降信号强度，使其难以测定。一般的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗刷三次。不过，ELISA板的制造商会对洗刷次数提出主张。一般来说，制造商包被平板需求的洗刷次数比用户包被的平板要少。关于用户包被的ELISA试剂盒板，有必要优化洗刷次数。2.控制洗刷量和洗刷次数的另一种方法是参加过量的洗刷液。一般来说，96孔板的每个孔能容纳330至460 μl。不过，有些自动化洗板机可设置程序，分配远远超出这个量的洗刷液，比如1 ml。它是怎么做到的呢？其实很简单，就是在分液的一起翻开吸液功用。换句话说，跟着分液器分配更多的液体，抽吸器也将液体吸出。这种技能能增加洗刷量，但不会溢出到其他孔中。

                                 试剂盒的正常保温1.成需要有必定的温度和时刻，这一保温进程称为温育(incubation)，有人称之为孵育，在ELISA中似不恰当。2.ELISA试剂盒属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，参加板孔中的标本，其中的抗原并不是都有平等的和固相抗结合的时机，只要最靠近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体触摸。这是一个逐步平衡的进程，因而需经分散才干达到反响的结尾。在这以后参加的酶符号抗体与固相抗原的结合也相同如此。这就是为什么ELISA反响总是需要必定时刻的温育。3.温育常选用的温度有43℃、37℃、室温文4℃（冰箱温度）等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在树立ELISA办法作反响动力学研讨时，实验标明，两次抗原抗体反响一般在37℃经1-2小时，产品的生成可达顶峰。为加快反响，可进步反响的温度，有些实验在43℃进行，但不宜选用更高的温度。抗原抗体反响4℃更为完全，在放射免疫测定中多使反响在冰箱中过夜，以构成最多的沉积。但因所需时刻太长，在ELISA中一般不予选用。4.保温的方式除有的ELISA试剂盒仪器附有特制的电热块外，一般均选用水浴，可将ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度敏捷平衡。为防止蒸腾，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此刻可让反响板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性良好的材料如金属等，在盒底垫湿的纱布，最终将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规则的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴还是湿盒温育，反响板均不宜叠放，以确保各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反响，操作时的室温应严厉约束在规则的范围内，规范室温温度是指20-25℃，但具作时可根据说明书的要求操控温育。室温温育时，ELISA板只要平置于操作台上即可。应留意温育的温度和时刻应按规则力求精确。为确保这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。

胎牛血清的定义及成份胎牛血清定义：采自胎牛的血清。含有多种生长因子，常用于体外细胞培养。胎牛血清成份：1、性状、外观 浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。 　　2、蛋白质含量 3.5%～5.0%（ w/v） 　　3、血红蛋白含量 ≤ 0.02%（ w/v） 　　4、无菌检验　阴性 　　5、支原体检验　阴性 　　6、细菌内毒素 ≤5（EU/ml） 　　7、牛腹泻病毒 阴性 　　8、大肠杆菌噬菌体 阴性 　　9、支持细胞增殖（Sp2/0-Ag14）　生长曲线（接种浓度）增殖浓度≥2.5×106 个/ml 　　细胞倍增时间 ≤15h 　　克隆率 ≥85%胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。 　　显然，胎牛血清是品质的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分*少。胎牛血清功能：牛血清是细胞培养中用量的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。 　　1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。 　2. 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。 　　3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。 　　4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。 　　5.起酸碱度缓冲液作用。 　　6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

Elisa试剂盒标准曲线绘制及制作步骤解析做标准曲线样品检测时有几个问题需要注意1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度*陡段，即曲线几乎成直线的范围内。3、采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。4、检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。5、标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。6、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.999.

实验室化学试剂的管理化学试剂是实验室里品种最多、消耗购置最频繁、危险性也最大的物质，因此，化学试剂的管理无疑是实验室管理人员的首要工作。下面就实验室化学试剂的购置、保管、使用、安全注意事项等方面谈一谈对实验室化学试剂的管理。实验室试剂管理的首要工作是购置，所以实验室首先应该有一套完整的请购、审批、采购、验收、入库、领用制度。要特别注意采购时要到有正规进货渠道的正规试剂店购买按照国家标准和化工部行业标准生产的试剂。试剂标签上应注有名称（包括俗名）、类别、产品标准、含量、规格、生产厂家、出厂批号（或生产日期）；有的试剂还应标明保质期。对有 经验的实验人员来说，观察试剂标签是判断试剂真伪的重要手段，可以避免买到伪劣试剂而影响试验。验收、入库工作也是一个认真、细致的工作，由于化学试剂种类繁多，同一种化学试剂还有优级纯、分析纯、光谱纯、化学纯等不同的规格，使得它们的含量、价格、用途都不相同，因而要注意验收、登记和分类存放。 化学试剂的保管是实验室人员的日常工作，需要管理人员有较高的化学试剂知识。一般的化学试剂按照单质、无机物、有机物、指示剂等分别存放。无机物和有机物要按照试剂的种类、规格而分别保管，由于种类和规格繁多，在这里就不一一赘述了。对于一些不常用的试剂，管理人员要定时检查，以保证试剂包装完好、标签完整、字迹清楚。固体试剂应无吸 湿、潮解现象；液体试剂应无沉淀物，否则，就应检查试剂的密封情况。某些试剂要进行特别认真的检查，如钾、钠表面的油封，白磷、水银表面的水封是否符合要求，以免发生危险。化学试剂的质量是直接影响实验质量的因素之一，管理人员应有一定的试剂质量判断知识。一般开封后的剩余试剂较易变质，包括： 1．试剂形状、状态的改变，如氢氧化钠由晶体变粉末状。 2．试剂体积的改变，含挥发与升华，如装碘的瓶子试剂变少，并且瓶子变色不透明。 3．颜色的改变，如长期存放的试纸变色，二氯化汞（HgCl2）、硝酸银（AgNO3）溶液出现沉淀；二氯化锡（SnCl2） 溶液出现白色沉淀和硫酸亚铁（FeSO4）溶液变棕色等。 试剂出现以上现象，都可以判断试剂已有挥发或已变质。 试剂变质的原因有很多，不同的试剂有不同的变质原因，不能一概而论。试剂的密封、光照、受潮、升温等都可能使试剂变质。有些试剂尽管密封较好，也容易挥发和变质（如乙醚、二硫化碳、四氢呋喃、异丙醚等），这些试剂的标签上都应标有生产日期和保质期，管理人员要定期检查。 化学试剂中所用的指示剂种类繁多，一般固体指示剂（除了试纸外）长期存放也不易变质。另外，有的配合物指示剂所配成的溶液长期存放会发生聚合反应或氧化反应，一般现象是产生混浊或絮状沉淀，难以敏锐地指示滴定终点。指示剂使用次数多，但每次的用量都极少，总用量也少，应尽量少购、少贮、少配制。 二、危险试剂的分类及管理 化学试验室在工作中，要接触各种化学试剂、试样及化学反应过程所产生的气体、挥发物、烟雾等，这些物质中有的对人体有毒害作用，有的有强腐蚀性，有的具有易燃易爆性。实验过程中除了对学生加强安全教育外，实验管理人员本身应具有扎实的安全管理知识和试剂管理知识无疑是必备的条件之一。 化学实验室用到的危险试剂主要包括剧毒品、强腐蚀品和易燃易爆品三大类，下面就危险试剂的分类和管理进行分别阐述： 1．剧毒品 按照国标GB6944—86 的规定，实验室用到的毒品有：汞盐、铬盐、铅盐、砷化合物、亚硝酸盐化合物、多环芳香烃及其衍生物、含氯含磷有机物等。由于种类繁多，中毒类型极为复杂，在此就不一一叙述。毒品（特别是剧毒品）按照规定应该分柜存放、严格管理、定期清查盘点、严禁外流。其中某些剧毒品物质，如配位滴定中使用的氰化物，应按规定严格执行“五双制度”，即双人保管、双人收发、双人领用、双本帐、双锁管理。放毒品的试剂室应通风良好，防止挥发和分解出的毒气在室内积聚；盛放毒品的试剂瓶要密封良好，移动时轻拿轻放，以杜绝人与毒品的接触。 2．强腐蚀品 实验室用到的强腐蚀品主要有浓硫酸、氢氟酸、液氯、液溴等物质。这类物质搬运时应轻取轻放，严禁撞击、摔碰和强烈振动，严禁肩扛背负。强腐蚀品一定要放置在牢固的试剂柜内，不要放在顶层或内层等取用困难的位置。和其它危险品一样，强腐蚀品也要确保安全管理、安全取用、杜绝外流。 3．易燃易爆品 实验室用到的易燃易爆品种类繁多。气态的有氢气、煤气、液化气、氧气等。许多易燃液体闪点低、易着火、挥发性大、粘度小、密度低、易扩散，它们作为有机溶剂使用时，其蒸气与空气混合到一定比例时可形成气态爆炸物，这种混合气遇到明火，静电或电火花时，可导致爆炸，因此实验室常把易燃液体作为防火防爆的防范重点。实验室用到的石油醚、汽油等是最易燃液体，这些物质与一些强氧化剂（如硝酸盐、高锰酸钾、氯酸钾等）接触，遇有摩擦、碰撞等就能爆炸，一定要注意防范。固体易燃物包括白磷、金属钾、钠、镁、铝粉、硫磺以及众多的无机、有机类化合物，其中有些物质有自燃性，许多物质对热、摩擦、碰撞极为敏感，大多数易燃物的燃烧释放气体有毒。实验室管理人员要熟悉这类试剂的性质和购置、使用、保管知识，做好安全消防准备工作，常抓不懈，提高警惕，杜绝重大事故的发生隐患。 实验室的危险品还包括放射性试剂和某些生化类试剂，由于一般实验室不多使用，在此不一一叙述了。 化学试剂管理是一门专业且复杂的学科，其购置、搬运、保存、领用等环节都应由有专业知识的人员管理或现场指导，保存危险品的试剂室应有明确的警示牌且严禁无关人员进入，以确保实验室的安全。

生化试剂的相关概念定义：生化试剂（Biochemical reagent）是指有关生命科学研究的生物材料或有机化合物，以及临床诊断、医学研究用的试剂。分类：主要有电泳试剂、色谱试剂、离心分离试剂、免疫试剂、标记试剂、组织化学试剂、透变剂和致癌物质、杀虫剂、培养基、缓冲剂、电镜试剂、蛋白质和核酸沉淀剂、缩合剂、超滤膜、临床诊断试剂、染色剂、抗氧化剂、防霉剂、去垢剂和表面活性剂、生化标准品试剂、生化质控品试剂、分离材料等等。前沿应用：从生物体中提取的或由化学合成的生物体的基本成分，用于生物成分的分析鉴定及生物制品的制造。随着生命科学的发展，生化试剂已发展成为化学试剂的一大类,有商品10000多种。中国销售的生化试剂品种有2500种。生化试剂受热、受潮、受光后易丧失活力，保存期短，因此贮运条件比较苛刻。例如，绝大多数酶试剂怕热，需在0～6℃下保存，有些作为遗传工程用的酶试剂则需在－20℃下保存。生化试剂按生物体组织中所含有的或是在代谢过程中所产生的物质可分为氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸、酶、辅酶、糖类、酯类、激素等；按生物学研究的需要可分为电泳试剂、色谱试剂、免疫试剂、标记试剂、组织化学试剂等。生化试剂根据用途不同对其纯度及技术均有一定的要求。例如酶试剂，有粗制酶、结晶酶、多次结晶酶以及不含某些杂酶的酶制剂等多种。生化试剂有三种生产方法：①从生物体中分离、提纯；②化学合成；③发酵。对生化试剂产品的技术要求有：含量、熔点、冰点、旋光度、含水量、光谱特征、折光、密度和生物活性等。

培养基灭菌秘籍培养基的类型可以按照成分、物理状态分、用途、微生物种类这四个方面来规划分类。培养基的灭菌是一个常见步骤，并且，不同的培养基需根据其性能采用不同的灭菌方法，在这里，上海恒远生物公司为您一一指出：（一）、化学物质灭菌    原理：药物与微生物细胞中的成分反应，使蛋白质变性酶失活。使用范围：器皿、双手和实验室、无菌室的环境灭菌，不能用于培养基灭菌。（二）、辐射灭菌    辐射灭菌的原理是利用高能量的电磁辐射与菌体核酸的光化学反应造成菌体死亡。常用的有紫外线、X射线和γ射线。用于室内空气及器皿表面灭菌。（三）、干热灭菌    灭菌原理是利用高温对微生物有氧化、蛋白质变性和电解质浓缩作用而杀灭微生物。常用灼烧 和电热箱加热，140-180℃ 1-2小时 。适于对玻璃及金属用具及沙土管灭菌。（四）、湿热灭菌    灭菌原理是直接用蒸汽灭菌，蒸汽在冷凝时能释放出大量潜热，蒸汽具有强大的穿透力，破坏菌体蛋白和核酸的化学键，使酶失活，微生物因代谢障碍而死亡。水煮常压灭菌：100℃。或饱和蒸汽灭菌：一般121℃，30分钟。适合培养基和发酵设备灭菌。（五）、过滤除菌    除菌原理是利用微生物不能透过滤膜除菌。方法是使用0.01~0.45 mm孔径滤膜，用于压缩空气、酶溶液及其他不耐热化合物溶液除菌。   ● 器具和设备消毒处理方法：1.湿热灭菌：采用高压灭菌器， 121 ℃灭菌20分钟，适用于玻璃器皿、移液器吸头、塑料瓶等。按照GB 15981 的规定，评价高压灭菌器的杀菌效果。2.干热灭菌：采用干燥箱灭菌，160 ℃灭菌2h，180 ℃灭菌2h，适用于玻璃器皿，不锈钢器具等。● 灭菌方法：1.金属器具先用酒精擦拭，之后干热灭菌，使用时需烧灼；2.塑料可用高温灭菌；有机溶剂需用过滤灭菌；3.双手及操作台面可用酒精擦拭，台面及操作室还需紫外灭菌；4.培养基需用湿热高温灭菌，至于对待不同的培养基灭菌条件都有所不同，如植物组培使用的培养基与微生物中使用的就不同。

血清的常见问题及质量标准血清常见问题：1、血清的成份可能有几百种之多，目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚，尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识，这给研究工作带来许多困难。2、血清都是批量生产，各批量之间差异很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保证每批血清的相似性极为困难，从而使实验的标准化和连续性受到限制。3、对大多数细胞，在体内状态，血清不是它们接触的生理学液体，只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态，血清可能促进某些细胞的生长（成纤维细胞）同时抑制另一类细胞生长（表皮细胞）。4、血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应（如精胺、亚精胺）形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死亡。5、动物个体不同，血清产地、批号不同，每批质量差异甚大，其成分不能保持一致。 6、取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响，可能导致实验失败或实验结果不可靠性。7、大规模生产中，血清来源越来越困难，价格昂贵，是构成动物细胞培养对生产成本的主要部分之一。血清的质量标准：1. 牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家。并应具备适当的监测系统。2. 证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。3. 有些国家还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。4. 无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染，有些国家要求无细菌噬菌体污染。5. 对细胞有良好的支持繁殖作用。6. 血清要通过滤膜过滤除菌，保证无菌。

ELISA试剂盒间接法简单操作步骤（1）将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原；（2）加稀释的受检血清，保温反应，血清中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗-体复合物；（3）加酶标抗抗体；（4）加入酶促反应底物，发生显色反应，显色的深浅与待测抗体的量成正比。ELISA试剂盒有以下操作技巧A、加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。B、合理安排检测量，以免反应板过多造成洗板等待时间长。C、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。D、要尽量做双孔实验，这样才既能保证数据的准确性，又能反映出试剂盒的精密度。E、样品稀释液应用加液器加注，并经常校对其准确性。

ELISA试剂盒想要满意的实验结果？ELISA试剂盒关于各标本处理事宜讲解：组织匀浆：将组织加入适量盐水捣碎，1000×g离心10分钟，取上清液。细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。血清：操作过程中避免任何细胞刺激，使用不含热原和内毒素的试管，血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测，1000×g离心30分钟去除颗粒。保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。ELISA试剂盒实验洗板产生气泡时处理方法：A、可以用tip吸走，但实验中费事、效果还不是很理想。B、采用更好材质的板、或采用专门的96孔板振荡器，需要花费更多的钱。C、使用注射器针头扎破，费事（同方法1）。D、我们觉得最简单，方便的一种就是使用吹风机（理发店吹头发带加热的那种），将吹风机打开，并调节到最高温度，对96孔板吹1-2秒就可以了。

2017中秋节国庆节连休放假通知各位同事，各们老师：上海康朗生物科技有限公司2017年国庆节中秋节放假通知如下：10月1日至8日放假调休，共8天。10月9日(星期一)上班。请将此消息转达给我们所有的同事、客户、供应商和任何有需要通知的伙伴。各个部门如有需要请安排好假期值班人员。祝全体员工和所有的客户度过一个欢乐祥和的国庆节假日。   上海康朗生物科技有限公司                                 2017年9月30日

植物病毒病检测方法植物病毒病是农业生产上一种重要病害，严重影响农作物的产量和质量, 目前还没有1种治疗效果较理想的药剂，对发病植株做到早期诊断及提前检测就显得尤为重要。植物病毒学历经近百年的发展，植物病毒的检测方法与手段也在不断发展与改进。常用的方法有侵染力测定法、血清学方法、电子显微镜计数和分子生物学法等。1.4.1侵染力测定法侵染力测定法是将病毒样本接种在植物上，根据侵染力的大小定量。它的灵敏度在所有定量法中是比较高的，而且是其他定量法的基础。设计一种新的定量法，如果不经过侵染力的验证，将无法判断测定的是病毒或者是具有侵染力的病毒。侵染力测定法包括局部枯斑法、淀粉－碘斑法、系统感染率的测定法等。侵染力测定多用粗汁液来接种，为了避免抑制物质的作用和使半叶枯斑数目控制在一定范围，须用缓冲液稀释接种物。局部枯斑法 1929年F.O.Holmes发现TMV在心叶烟（Nicotiana glutinosa）接种叶片上引起局部坏死斑点，在一定的病毒浓度范围内，所产生的斑点数目与病毒浓度成正比例。这一发现成为病毒侵染性定量测定的基础（田波，1987）。所有机械传染的病毒都有可能应用局部斑点法，但实际上只有少数病毒具有可用于定量测定的局部斑寄主。一个待测样品所形成的斑点数目除取决于接种物中病毒浓度外，还受试验植物种类、环境条件和接种物中是否含有病毒抑制物质的影响。淀粉－碘斑法 当所研究的病毒没有过敏性枯斑寄主时，采用此法。Holmes（1931）发现TMV接种的烟叶上有时形成明显的黄化斑块，但不能用于计数。将这种接种叶用95％乙醇加热到80℃固定，然后用I2和KI混合液（10克I2，30克KI，1500毫升H2O）染色时，则侵染点处出现淀粉－碘的蓝色反应。当下午采摘叶片，褪色过夜，然后用碘液染色，则侵染点较周围组织着色浅；当采摘叶片前，植株先在黑暗中放几个小时，再用碘液染色，则侵染点组织着色深。这是由于病毒侵染既降低光合组织中碳水化合物的形成，也降低碳水化合物从光合组织中的运出。淀粉－碘染色的强弱受环境条件的影响较大，不如局部枯斑法可靠，但在标准化条件下仍可用于侵染性的定量测定。侵染性滴度法 当上述方法都不适用时，可采用侵染性滴度法。即把欲测定样品用缓冲液稀释，可用十倍稀释、成倍稀释、半倍稀释或更低稀释。这种方法的缺点是需用大量实验植物，但可得到较好的结果。此方法可用于介体传染的病毒。1.4.2血清学方法血清学方法原理是利用抗原抗体的体外特异性结合检测植物病毒。主要包括沉淀反应、凝聚反应、酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫电镜（IEM）、放射免疫测定（RIA）、PCR（聚合酶莲式反应）法等。沉淀反应 将可溶性抗原与相应的抗体混合，当两者的比例合适，并有盐类存在时，即有沉淀物出现，叫做沉淀反应。由于沉淀物主要是由抗体球蛋白所组成，为了保证有足够的抗体，因此试验时通常要稀释抗原，不稀释抗体。凝聚反应 在微生物细胞悬液中，加入含有特异性抗体的血清，有一定浓度的电解质，微生物细胞凝聚成团，叫做凝聚反应。分为直接凝聚反应与间接凝聚反应。由于病毒是可溶性抗原，必须把病毒的抗体先吸附于一种与免疫无关的颗粒表面，然后与相应的抗原结合反应。用于吸附抗体的颗粒有皂土、乳胶、炭末、红细胞等。酶联免疫吸附试验（Enzyme linked Immunosorbent assay，简称ELISA）将酶标记物同抗原抗体复合物的免疫反应与酶的催化放大作用相结合,既保持了酶催化反应的敏感性,又保持了抗原抗体反应的特异性,因而极大的提高了灵敏度；同时它又是一种非均相分析过程,即在反应中的每一步之后都有洗涤过程,从而排除了未反应物质的干扰。自1976年 Voller和Clark等首次将ELISA应用于植物病毒检测,已形成多种测试方法。常用的方法有有细胞直接法、细胞间接法、竞争法、酶抗酶法、双夹心法（Double sandwich method）、双抗体夹心法（Double antibody sandwich method）测定方式（侯义龙,2000）。这种方法的灵敏度高（可测出1－10纳克/毫升的浓度），特异性强，操作简便，已广泛应用于病毒测定和诊断（盛树力，1978；马德芳等,1981）。免疫电镜（IEM）是用电镜检测抗体特异性结合于抗原的技术。Anderson等（1961）和Lafferty与Oertelis（1961）发展了这一方法。其灵敏度高于ELISA。放射免疫测定（RIA）在抗原抗体反应体系中，当同位素标记抗原（Ag*）与有限量的抗体相互作用时，形成有标记抗原的复合物（Ag*Ab）。如下式所示：Ag*＋Ab Ag*AbAg AgAb1.4.3 电子显微镜计数本世纪三十年代初电子显微镜的发明，使我们能够观察到病毒的分子及其细微结构。1940年Kausche和Melcher首次在电子显微镜下观察到烟草花叶病毒的颗粒。电镜技术的建立对病毒学的发展起了巨大的推动作用。在实际生产过程中，根据病毒的种类与特点的不同，往往需要把几种方法结合起来，就可望建立一套快速、灵敏、准确、高效的水体植物病毒的检测方法。1.4.4.分子生物学法分子生物学检测法能够检测病毒的侵染能力。此方法灵敏度最高，能检测到pg级甚至fg级[1ｆｇ（飞克）=1×10-15ｇ]的病毒,特异性强，检测速度快，操作简便，可用于大量样品的检测（侯义龙,2000）。目前,常用的分子生物学方法有核酸分子杂交技术、dsRNA电泳技术、多聚酶链式反应技术等。侯义龙.果树主要病毒RT-PCR检测体系的建立、优化及病毒特异DNA片段克隆测序研究.[博士学位论文].沈阳:沈阳农业大学,2000.6核酸分子杂交技术 具有一定同源性的2条核酸单链在一定的条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则退火形成双链。此杂交过程是高度特异性的。杂交的双方是使用的探针和要检测—的核酸。待测核酸可以是克隆的基因片段,也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。根据使用的方法,被检测核酸可以是提纯的（膜上印迹杂交或液相杂交）,也可以在细胞内杂交（细胞原位杂交） （卢圣栋，1999）。双链RNA（dsDNA）电泳技术 ssRNA病毒在植物体内增殖,通过核酸互补而形成一种健康植物没有的碱基配对dsRNA。DsRNA经提纯、电泳、染色后,在凝胶上所显示的谱带可以反映每种病毒组群的特异性,并且有些单个病毒的dsRNA在电泳图谱上也显示一定的特征。因此,利用病毒dsRNA的电泳图谱可以检测出病毒的类型和种类（董颖苹,2001；李鹏翔，2000）。此法已用于一些病毒组（如黄化病毒组、马铃薯Y病毒组、番石竹潜病毒组、烟草坏死病毒组、黄瓜花叶病毒组、绒毛烟斑驳病毒组）的分类研究。多聚酶链式反应（polymerasechainreaction,PCR）技术 是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，是近10年来发展和普及最迅速的分子生物学新技术之一（吴乃虎，2000；）。由于它具有强大的扩增能力,并且可与其它分子生物学方法（如核酸杂交）和免疫学方法（如ELISA）相结合应用,使其敏感性和特异性都大大增强；因而广泛地应用于生物医学领域的各个学科（梁国栋，2001）。灵敏度最高, 仪器价格昂贵，试验技术要求高。

ELISA (EIA) 酶结合物的制备免疫酶技术(immunoenzymatic technique)又称酶免疫测定法(enzyme immunoassay,EIA),是继免疫荧光技术和放射免疫技术之后发展起来的又一种免疫标记技术。它是把抗原抗体的特异性反应和酶的高效催化作用相结合而建立的。该技术通过化学方法将酶与抗体或抗抗体结合，形成酶标记物，这些酶标记物仍保持免疫学活性和酶的活性，然后将它与相应的抗体或抗原起反应，形成酶标记复合物，结合在免疫复合物上的酶，在遇到相应的底物时，则催化底物产生水解、氧化或还原等反应，而生成可溶性或不溶性有色物质。然后根据显色的深浅来反映待测样品中抗原或抗体的含量，如生成的有色物质为可溶性，则可用肉眼比色或酶标测定仪测定光密度值(OD)定性或定量；如生成的有色物质为不溶性沉淀物，同时又是电子致密物质，则可用光学显微镜或电子显微镜识别和定位。因此，免疫酶技术是一项定位、定性和定量(敏感度可达每毫升ng~pg水平)的综合技术。常用的酶是辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)。酶标抗体或抗抗体(抗免疫球蛋白)结合物可采用戊二醛法或过碘酸盐氧化法制备。郭春祥建立的辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体的改良过碘酸钠法简单易行，标记效果好，特别适用于实验室的小批量制备。现将操作方法介绍如下：(一) 结合物的标记将5mg HRP溶于05ml蒸馏水中，加入新配制的006mol/L NaIO4水溶液05ml，混匀，置冰箱30min，取出加入016mol/L乙醇水溶液05ml，室温放置30min后，加入含5mg纯化抗体的水溶液(或PBS)1ml，混匀并装透析袋，以005mol/L、pH值95碳酸盐缓冲液缓慢搅拌透析6h(或过夜)使之结合，然后吸出加NaBH4溶液(5mg/ml)02ml，置冰箱2h。将上述结合物混合液加入等体积饱和 酸铵，冰箱放置30min，离心，将所得沉淀物溶于少许002mol/L、pH值74 PBS中，并对之透析过夜。次日再离心除去不溶物，即得酶抗体结合物。用002mol/L、pH值74 PBS加至5ml，进行测定后，冷冻干燥或低温保存。(二) 结合物中HRP与抗体量的测定酶标结合物于751型分光光度计上分别用280及403nm波长测定其光密度(OD)，并计算出OD403与OD280之比值以及HRP与抗体的mol/L比。结合物中HRP浓度(mg/ml)=OD403×04 结合物中IgG浓度(mg/ml)=(OD280-OD403×03)×062 酶/抗体mol/L比=HRP浓度IgG浓度×4(三) 结合物稀释度的测定用酶结合物中抗体相应的抗原直接包被聚苯乙烯反应板，采用ELISA直接法测定酶结合物效价。通常本法制备的酶结合物作1∶10 000稀释时，其OD403仍在01以上。

水质试剂应用常见问题预装管法(Test’N Tube)● 精确制备的试剂-以比色瓶或密封袋分装成一次实验的用量。 ● 最小的处理量和最短的准备时间。 ● 更少依靠个人技术，减少人工配制试剂的误差，以提供精确和重现性好的结果。 ● 减少和避免使用危险化学试剂，例如 酸盐测定不需镉，氨氮测定不需汞等。 ● 在加盖的试剂瓶中对反应后的样品进行处理，更加简单、易行。 ● 减少实验室产生的废液及由此带来的废液处理费用问题。 Test’N Tube使用方法 只需简单地将水样和加入预置试剂的Test’N Tube比色管中，并拧紧瓶盖，经过一段时间的反应(部分水样需要预处理)，在HACH的分光光度计上就可直接读出结果。安培瓶法(Amplus，AccuVer)● 高质量的玻璃质安培瓶。25毫升的玻璃质安培瓶包含了精确计量的试剂，为了单参数测试，而且可被当作小量瓶使用。 ● 真空包装使内含试剂的保质期延长。安培瓶在真空条件下，密封保证了试剂的稳定性，并且最大限度的使试剂与湿气、空气和其他污染物隔绝。 ● 被认证的预处理方法。在安培瓶中的试剂，迅速溶解有很高的稳定性。 ● 单独使用的试剂适配器。安培瓶法避免了样品瓶的清洗和交叉污染。 安培瓶的使用方法 1．把安培瓶放入安培瓶起瓶器中，然后一同放入水样中，用拇指按下安培瓶底，折断安培瓶的瓶颈，由于安培瓶中为真空包装，水样虹吸进入瓶体，然后混匀水样与试剂，等待反应完成或试剂显色。 2．真空包装的安培瓶与HACH的分光光度计和比色计匹配使用，能在显色后放入仪器中直接读数。安培瓶本身就可是HACH分光光度计的比色皿。放入仪器后．直接读出以mg /L计的测定数值。 (注：AccuVer表明该参数可使用安培瓶结合仪器法测定。)基本试剂法(Reagent Set)● 易得到的精确结果。HACH通过严格的质量管理和先进的生产工艺，保证每个批次的试剂都具有良好的重现性。 ● 最小的残液处理。由于预制试剂为每种特定反应提供确切数量的试剂，所以没有过量的试剂需要处理，您可以降低这方面的费用，减少与有毒化学品接触的机会。 ● 一次性包装技术延长了试剂的使用寿命，避免环境和操作过程对试剂的影响；每次测量只需一个包装，特定的反应试剂代替过去纷繁复杂过程配制出的反应液，简化了试验的操作过程。 试剂的一般使用方法： 只需按照随机附送的操作手册，选取正确的操作程序，按步骤进行。 1．分别向样品瓶中加入水样(有时要进行预处理)和去离子水，贴上水样和空白的标签。 2．分别向样品瓶中加入铝箔袋装试剂或粉枕，反应一段时间后，即可在分光光度计或比色计读数。(有些参数需加入二次粉枕或试剂，进行反应。) 3．将标记空白的样品瓶放入仪器进行零点的校正，再放入标记水样的样品瓶放入仪器测出结果。

在不同样品中ELISA试剂盒呈现各异阳性的ELISA试剂盒样品的百分比在本研讨中由NAT或RIBA反应抉择的。在本研讨中，观察到的反应试剂盒中，显现16（30.19％）的53个样品呈阳性，NAT的6例（16.22％）呈阴性。但RIBA是活泼的。在这一组检验中，53例（63.1％）呈阳性的NAT和NAT阴性的23 RIBA体现为活泼。经过NAT和RIBA样品呈阳性的比例（53.8％）来抉择其性质。其间一个要素可能是在一个和两个ELISA试剂盒中体现，该研讨小组由同一实验者的研讨样本作为参看。为阳性的样品反应概率很可能高于样品在两个试剂盒中的反应。在匈牙利，由Hejjas等人所做的一项研讨，献血中的11个样品的32的（34.37％），这是谐和地反应在5个ELISA试剂盒中，丙型肝炎病毒RNA德阳性表达为PCR。这些结果与本研讨（30.19％阳性NAT）不谋而合。从上述研讨中，可以得出结论：单一的ELISA试剂盒反应的样品有很高的概率是由负NAT或RIBA显现。样本是由两个不一样的ELISA查看抗-HCV体现，别的概率是由NAT或RIBA多次反应数据的证明。其要素可能是两个次第选用高阳性猜想值，由于这两种查看方法的样品反应有较高的概率是实在的。而不是那些只在一个反应里。即使WHO原则中提到，假设验证性检验不可用，可以运用一个备用的测定，这是作为首要的测定，用于供认样品的情况。献血者抗-HCV酶联免疫吸附反应，但ELISA试剂盒负面的NAT和RIBA纷歧定是持久递延。他们可能会从头接纳这些捐助者作出了无量的贡献，作为它答应守时贵重的动机捐助者，其血液中已被证明是安全的。收件人的血液制品从以前的抗-HCV ELISA呈阳性，基因- PCR呈阴性，RIBA不确定的或负的捐助者的捐赠，没有丙型肝炎病毒感染。这些捐助者没有被感染，笔者曾建议，这些捐助者可以从头输入，供给捐助，将来的捐赠抗-HCV ELISA呈阴性。

对于怎么操控ELISA试剂盒实验质量问题的探求一、ELISA试剂盒质量操控（Quaility Control,Q.C）质量操控是监督全进程，扫除差错，防止改变，保持规范化现状的一个办理进程。这一进程是经过一个反应环路进行的。（1）断定操控的目标；（2）规则操控目标的规范（预期值）；（3）拟定或选择操控办法和手法；（4）测量实践数据；（5）对比或较对实践数据与预期值之间的区别，并说明产生这一区别的因素。超出预订差错规模，报警系宣布信号，反应通道中止。（6）采纳举动，处理区别。恢复原状（原规范状态）的手法发挥作用。质量操控主要选用质控图进行。质控图是把某一查验的功能数据与所计算出来的预期的"操控限"进行对比的图。这种功能数据是在按规程正常进行时，按时刻次序而抽选出来的，其意图是检查查验进程中变异的"可清查"性因素。"可追逆"性的差错因素，是指除掉随机差错以外的其他因素。"操控限"是经过计算计算出来的。 二、差错实验差错分为三种：系统差错、随机差错和过错差错。系统差错是指一系列测定成果与真值或靶值存在有同一倾向的差错，有显着的规则性，可在必定条件下重复呈现，是能够经过质控防止和校对的。随机差错又称偶尔差错，是一种偶尔的、未能预料到的差错，是难以防止和校对的差错。查验作业中随机差错的散布契合正态散布规则。过错差错是人为的职责差错。经过加强实验室办理和展开质量操控作业是能够防止的。三、正态散布及规范差ELISA试剂盒实验中，查验同一样本达20次以上时，就会发现这组数据（指测定成果的吸光值）散布在均值两边，大部分集中在均值附近。假如以测定值为横坐标，以呈现的频率为纵坐标作图，就可绘出一个呈钟形的曲线图。钟顶处为均值，其他值以均值为中心对称散布，这即是正态散布。正态曲线以下的面积称概率，常用样本的均数（X）和规范差（SD）来表明，其计算办法如下：均值、规范差和概率的联系如下：X±1SD，概率0.68 X±2SD，概率0.95 X±3SD，概率0.99换言之，当ELSIA检查同一样本达必定次数后所得的一组数据，其中接近均值（X）的±1SD规模内的数据，占该组数据的68%，在X±2SD规模内散布的数据占整体的95%，在X±3SD规模内散布的数据占整体的99%。当咱们请求查验成果在X±2SD规模内为合格时，将有95%的数据也许合格。

ELISA试剂盒制备方法有哪些诀窍ELISA试剂盒免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应，所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料，如抗原抗体，酶等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原，而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体，而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。 ELISA试剂盒近年来，随着分子生物学的发展，使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂，各种新型使用的测定方法也不断出现。制备方法包括以下步骤：1 抗原表位的计算机筛选2 抗原的制备3 血清的采集4 间接ELISA方法的建立5 间接ELISA方法的敏感性和特异性验证6 试剂盒的稳定性验证；7 对屠宰场进行临床检测。 ELISA试剂盒方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好。应用本发明制得的试剂盒能有效检出感染猪的戊型肝炎病毒，适用于大批量发病样本的检测，可用于猪戊肝的快速诊断，并预防、控制猪戊肝的流行和阻断戊肝由猪向人传播。

                细胞培养技术的基本原理细胞培养是用酶消化法将组织碎块分离成单个细胞，用培养基制成细胞悬液，在体外适宜条件下，使细胞生长繁殖，并保留其一定的结构和功能特性。细胞培养与组织培养、器官培养主要不同点在于原始培养的对象不同。细胞培养使用的是单个细胞悬液，组织培养使用的是组织块（0.5~1立方毫米）或薄片（厚0.2毫米），而器官培养使用的是器官原基或器官的一部分或整个器官。 在组织培养中，细胞自组织块周围移出并生长，细胞在生长过程中总有移动（运动）或其它变动，这样就使被培养的组织难以长期维持其原有的结构和功能。培养时间越长，发生变化的可能性越大，结果常使单一类型的细胞保存下来，最终成了细胞培养。在细胞培养中，细胞生命活动和体内细胞一样，仍然是相互依存的，呈现一定的组织特异性，所以组织培养和细胞培养实际上无严格区别。 细胞培养技术是生命科学中常用的研究手段，该方法能排除神经体液因素的影响及肝、肾解毒功能的干扰，观察某些因素或药物对培养细胞的直接作用。通过实验可获得某一类型细胞的纯培养。如心肌组织中心肌细胞约占50%,非心肌细胞占50%;而经纯化分离的心肌细胞悬液中，心肌细胞可达95%以上，这样，心肌细胞原代培养实验基本不受其它细胞的干扰。 在细胞培养实验中能直接观察到培养细胞生命活动的动态过程；用定时显微摄影记录可发现一些肉眼观察不到的生命现象；还可利用电镜手段、同位素标记、放免法和免疫组化法等来研究细胞形态结构及细胞内化学物质的分布。此外，还能节约研究费用。如在某些研究中，用100只动物做实验所获得结论与用100张盖玻片或几十个培养瓶而获得结论具有相同的统计学意义，而细胞培养较之大批量的动物饲养花费要小。 细胞培养方法也存在不足之处：培养细胞失去体内细胞的制约和整体的调节作用，细胞形态和功能会发生一定程度的改变。培养方法、实验试剂对细胞形态和功能有一定的影响，如胰蛋白酶可破坏细胞表面受体、酶、抗原等。长期体外培养的细胞，由于反复传代、冻存和操作等因素的影响，可能发生染色体非整倍体改变，呈永生化或癌变的特征。

试剂盒常用方法的优劣势对比一、直接法将抗原直接固定在固相载体上，加入酶标记的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。1.优势：操作手续简短，因无须使用二抗可避免交互反应。2.劣势：试验中的一抗都得用酶标记，但不是每种抗体都适合做标记，费用相对提高。二、间接法此测定方法与直接法类似，差别在于一级抗体没有酶标记，改用酶标记的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。1.优势：二抗可以加强信号，而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它最多的免疫反应性。2.劣势：交互反应发生的机率较高。三、ELISA试剂盒双抗体夹心法被检测的抗原包被在两个抗体之间，其中一个抗体将抗原固定于固相载体上，即捕捉抗体。另一个则是检测抗体，此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量；或不标记，再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体必须小心选取，才可避免交互反应或竞争相同的抗原结合部位。1.优势：高灵敏、高专一性，抗原无须事先纯化。2.劣势：抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。四、竞争法样本里的抗原(自由抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一起竞争相同的抗体，当样品里的自由抗原越多，就可以结合越多的抗体，而固定抗原就只能结合到较少的抗体，反之亦然。经清洗步骤，洗去自由抗原和抗体的复合物，只留下固定抗原和抗体的复合物，拿来与只有固定抗原的对照组结果相比较，根据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量。1.优势：可适用比较不纯的样本，而且数据再现性很高。2.劣势：整体的敏感性和专一性都较差。五、最新ELISA试剂盒技术：基于细胞法是一种新的定性蛋白检测技术，将细胞直接在微孔板里培养，待检测时，不需抽提蛋白和裂解细胞，便可直接测量微孔板里蛋白经刺激或抑制作用后的变化。1.优势：无需裂解细胞，所以目标蛋白损失最少，可测定完整细胞、黏附细胞、还有非粘附细胞。2.劣势：不能测定抗原量。

ELISA试剂盒不可忽略的细节问题试剂盒不可忽略的细节问题：一、抗原或抗体能吸附于固相载体表面，并保持其免疫学活性。二、抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性。三、酶结合物与相应抗原或抗体结合后，ELISA试剂盒可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，四、可根据已知浓度的抗原或抗体的颜色反应的深浅绘制标准曲线并依此计算出未知样品中抗体或抗原的浓度。ELISA试剂盒包含以下各组分：（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；（3）酶的底物；（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；（5）结合物及标本的稀释液；（6）洗涤液；（7）酶反应终止液。

ELISA测定试剂盒手工操作方法ELISA测定试剂盒手工操作有浸泡式和流水冲刷式两种，浸泡式进程如下：A、吸干或甩干孔内反响液；B、用洗刷液过洗一遍（将洗刷液注满板孔后，即甩去）；C、浸泡，行将洗刷液注满板孔，放置1-2分钟，间歇摇晃，浸泡时间不行随意缩短；D、吸干孔内液体，吸干应完全，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干；E、重复操作c和d，洗刷3-4次（或按阐明规则）。削减ELISA测定试剂盒差错的办法1.做试验时少说话，避免唾液掉进酶标条中。2.参加一抗二抗需求放入37°。3.假如一同做多个板子，多个板子别罗一同；尽量少用排枪。4.加样时，由低浓度向高浓度加，这么削减跳孔的概率。5.勤换枪头。ELISA测定试剂盒操作技能的影响：1）应保证清洁，全部操作过程中保证酶标板不触摸次氯酸，以上的办法可以使“花板”降至最低极限，然后进步检查的特异性，并得到更精确。 2）合理安排检查量，ELISA试剂盒避免反响板过多形成洗板等待时间长。3）加酶试剂后用吸水纸在酶标板外表轻拭吸干。4）用洗板机洗板时，保证洗液注满各孔，洗板针疏通，洗完板后最好在吸水纸（挑选干净、无或少尘的吸水资料）上轻轻拍干，避免针口有纤维蛋白或异物，这些异物在洗板的过程中易发生拖带景象而导致“花板”的呈现。5）严峻溶血：以HRP为符号的ELISA试剂盒测定中，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性，催化底物显色形成假阳性。一、移液器的运用，加样（抗体）等需求精确定量的试剂时不运用排枪，经历证实排枪很不精确，很容易跳孔，不要图廉价买低档的tips 由于ELISA不但会扩大被检查的意图蛋白，也会扩大非特异联系的杂质蛋白。二、倍比稀释样品时，稀释倍数最好要小于10。三、一切的装跟ELISA测定试剂盒有关试剂的容器，玻璃制品的要干烤过或许运用一次性的树脂容器。