试剂盒常用方法的优劣势对比

试剂盒常用方法的优劣势对比

一、直接法

将抗原直接固定在固相载体上，加入酶标记的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。

1.优势：操作手续简短，因无须使用二抗可避免交互反应。

2.劣势：试验中的一抗都得用酶标记，但不是每种抗体都适合做标记，费用相对提高。

二、间接法

此测定方法与直接法类似，差别在于一级抗体没有酶标记，改用酶标记的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。

1.优势：二抗可以加强信号，而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它最多的免疫反应性。

2.劣势：交互反应发生的机率较高。

三、ELISA试剂盒双抗体夹心法

被检测的抗原包被在两个抗体之间，其中一个抗体将抗原固定于固相载体上，即捕捉抗体。另一个则是检测抗体，此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量；或不标记，再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体必须小心选取，才可避免交互反应或竞争相同的抗原结合部位。

1.优势：高灵敏、高专一性，抗原无须事先纯化。

2.劣势：抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。

四、竞争法

样本里的抗原(自由抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一起竞争相同的抗体，当样品里的自由抗原越多，就可以结合越多的抗体，而固定抗原就只能结合到较少的抗体，反之亦然。经清洗步骤，洗去自由抗原和抗体的复合物，只留下固定抗原和抗体的复合物，拿来与只有固定抗原的对照组结果相比较，根据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量。

1.优势：可适用比较不纯的样本，而且数据再现性很高。

2.劣势：整体的敏感性和专一性都较差。

五、最新ELISA试剂盒技术：基于细胞法

是一种新的定性蛋白检测技术，将细胞直接在微孔板里培养，待检测时，不需抽提蛋白和裂解细胞，便可直接测量微孔板里蛋白经刺激或抑制作用后的变化。

1.优势：无需裂解细胞，所以目标蛋白损失最少，可测定完整细胞、黏附细胞、还有非粘附细胞。

2.劣势：不能测定抗原量。