洋葱假单胞菌操作前打开紫外灯30-60分钟,这个大家都知道。不过你别忘了还要在操作前至少10分钟打开抽滤装置来保证效果,但紫外消毒期间建议不要进去一次特意打开抽滤装置,可以与紫外灯一起打开,洋葱假单胞菌此时不需要抽滤开的过大就可以。(所谓的抽滤装置就是就是那个风机,就是吹风超净工作台,不是过滤培养液的)!
细胞传代培养(消化法)具体操作:
一:传代前准备;
1.预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。
2.用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。
3.正确摆放使用的器械:保证足够的*作空间,不仅便于*作而且可减少污染。
4.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。
5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶,放入微波炉内高火,8分钟再次消毒。
6.取出预热好的培养用液:洋葱假单胞菌取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。
7.从培养箱内取出细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。
8.打开瓶口:将各瓶口一一打开,同时要在酒精灯上烧口消毒。
二:胰蛋白酶消化;
1.加入消化液:小心吸出旧培养液,用PBS清洗(冲洗),加入适量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以盖住细胞最好,最佳消化温度是37℃。
2. 洋葱假单胞菌 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度。
3.吸弃消化液加入培养液:弃去胰蛋白酶液,注意更换吸管,加入新鲜的培养液。
三:吹打分散细胞;
1.吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。
2.吸细胞悬液入离心管:将细胞悬液吸入10ml离心管中。
3.平衡离心:平衡后将离心管放入台式离心机中,以1000转/分钟离心6-8分钟。
4.弃上清液,加入新培养液:弃去上清液,加入2ml培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。
四:分装稀释细胞;
1.分装:将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。
2.显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。
五:继续培养;
用酒精棉球擦拭培养瓶,适当旋松瓶盖,放入CO2培养箱中继续培养。洋葱假单胞菌传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25%时为一个+,占50%为++,占75%时为+++。
XY1052 人肝癌细胞,Bel-7405细胞
XY1053 人肝癌细胞,BEL-7402细胞
XY1054 人肝癌细胞,97H-EGFP-puro细胞
XY1055 人肝癌细胞,9204细胞
XY1056 人肝癌 QGY-Q3*细胞,
XY1057 人干细胞因子单克隆抗体细胞株 AMS2细胞
XY1058 人分泌A2抗体B淋巴细胞,BB7.2细胞
XY1059 人肺支气管癌细胞,NCI-H1650细胞
XY1060 人肺小细胞肺癌 NCI-H2227细胞
XY1061 人肺腺鳞癌细胞,NCI-H596细胞
XY1062 人肺腺鳞癌细胞,L78细胞
XY1063 人肺腺癌细胞系 PG49细胞
XY1064 人肺腺癌细胞(转染TK基因的GLC-82细胞) GLC-82-TK细胞
XY1065 人肺腺癌细胞(胸膜渗出液)Calu-3细胞
XY1066 人肺腺癌细胞,SPC-A-1细胞
XY1067 人肺腺癌细胞,PC-9细胞
XY1068 人肺腺癌细胞,PAa细胞
XY1069 人肺腺癌细胞,NCI-H441 [H441]细胞
XY1070 人肺腺癌细胞,NCI-H292细胞
XY1071 人肺腺癌细胞,NCI-H1975细胞
XY1072 人肺腺癌细胞,NCI-H1395细胞,
XY1073 人肺腺癌细胞,LTPEP-a-2细胞
XY1074 人肺腺癌细胞,Human H1299细胞
XY1075 人肺腺癌细胞,H1299细胞
XY1076 人肺腺癌细胞,GLC-82细胞
XY1077 人肺腺癌细胞,Calu-3细胞
XY1078 人肺腺癌细胞,Calu-1细胞
XY1079 人肺腺癌细胞,A549细胞
XY1080 人肺腺癌细胞,A2细胞
XY1081 人肺腺癌耐顺铂株 A549/DDP细胞
XY1082 人肺腺癌 D6细胞,
XY1083 人肺腺癌 (胸水) Calu-3细胞
XY1084 人肺泡上皮细胞,HPAEpiC细胞
XY1085 人肺鳞癌细胞,SK-MES细胞