人T细胞生长因子-Ⅲ(TCGF-Ⅲ)ELISA试剂盒操作步骤

产品名称：人T细胞生长因子-Ⅲ（TCGF-Ⅲ）Elisa试剂盒

英文名称：Human T cell growth factor Ⅲ,TCGF-Ⅲ ELISA Kit

规格：96T/48T

检测方法：酶联免疫法/酶免法（ELISA）

待测样本：血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等
用 途：用于定量检测人血清、血浆及相关液体样本中人T细胞生长因子-Ⅲ（TCGF-Ⅲ）Elisa试剂盒的含量。

保存条件：2-8℃低温保存

保质期：六个月

工作原理：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被T细胞生长因子-ⅢTCGF-Ⅲ抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的T细胞生长因子-ⅢTCGF-Ⅲ呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。


工作原理：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被T细胞生长因子-ⅢTCGF-Ⅲ抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的T细胞生长因子-ⅢTCGF-Ⅲ呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

使用方法
1、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样 50μl， 待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品*终稀释度为 5 倍） 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
2、配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
3、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
4、加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
5、温育：操作同 3。
6、 洗涤：操作同 5。
7、 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.
8、 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。
9、测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。