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大肠杆菌表达体系出现无或低蛋白表达结果因素
2024/07/11 10:37
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方案摘要：
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方案详情：
大肠杆菌（E.coli）重组蛋白表达技术经过多年的发展，相对于其他表达体系，算是非常成熟的一个体系。大肠杆菌蛋白表达系统主要有以下特点：遗传背景清楚；易于培养和控制；转化操作简单；表达水平高；成本低；周期短。本篇将对大肠杆菌重组蛋白表达系统技术问题进行解答。
大肠杆菌表达体系为什么会出现无或低蛋白表达的结果？诱导前后蛋白存在毒性或者表达过程中密码子有偏向性，都可能造成蛋白不表达或低表达的结果。
建议从以下几个方面来解决问题：
1）控制本底表达水平：基于lac-based启动子表达，加入葡萄糖；选择以葡萄糖为碳源培养基；基于T7-based启动子表达，使用含有T7溶酶体质粒；使用严谨控制型质粒，降低拷贝数。
2）控制诱导表达水平：采用可调节启动子；采用可控制诱导菌株；降低拷贝数；采用适用毒性蛋白表达菌株；采取分泌性表达策略。
3）优化质粒DNA密码子，以适应宿主密码子体系使用密码子调整菌株。
4）增加生物质：尝试新培养基；改善通气条件，避免泡沐。
下载本篇解决方案：
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