人巨噬细胞活化因子(MAF)ELISA试剂盒操作步骤

产品名称：人巨噬细胞活化因子(MAF)ELISA试剂盒

英文名称：Human macrophageactivatingfactor,MAF ELISA kit

规格：96T/48T

检测方法：酶联免疫法/酶免法（ELISA）

待测样本：血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等

用 途：用于定量检测人血清、血浆及相关液体样本中人T细胞生长因子-Ⅲ（TCGF-Ⅲ）Elisa试剂盒的含量。

保存条件：2-8℃低温保存

保质期：六个月

使用目的：
本试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中的指标含量。

实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中指标水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算浓度。

试剂盒组成
1    30倍浓缩洗涤液    20ml×1瓶    7    终止液    6ml×1瓶
2    酶标试剂    6ml×1瓶    8    标准品    0.5ml×1瓶
3    酶标包被板    12孔×8条    9    标准品稀释液    1.5ml×1瓶
4    样品稀释液    6ml×1瓶    10    说明书    1份
5    显色剂A液    6ml×1瓶    11    封板膜    2张  
6    显色剂B液    6ml×1/瓶    12    密封袋    1个

操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可在小试管中进行稀释。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。