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抗坏血酸含量的测定
2020/01/14 16:57
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方案摘要：
产品配置单：
苏木素无水乙醇溶液(10%)
型号： 100ml
产地：
品牌： 远慕
¥1
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方案详情：
实验原理
还原型抗坏血酸（AsA）可以把铁离子还原成亚铁离子，亚铁离子与红菲咯啉（4,7-二苯基-1,10-菲咯啉，BP）反应，形成红色螯合物，对534nm波长的吸收值与AsA含量正相关，故可用比色法测定。脱氢抗坏血酸（DAsA）可由二硫苏糖醇（DTT）还原成AsA；测定AsA总量，从中减去还原型AsA即为DAsA含量。
实验试剂
5%三氯乙酸（TCA）；20%TCA；无水乙醇溶液；0.4%磷酸－乙醇溶液；0.5%BP－乙醇溶液；0.03%FeCl3－乙醇溶液；0.6g/L DTT；Na2HPO4－NaOH溶液：以0.2mol/L Na2HPO4和1.2mol/L NaOH等量混合；60mmol/L DTT－乙醇。
实验设备
离心机；分光光度计；研钵；试管。
实验材料
受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官。
实验步骤
1. 制作标准曲线 配制浓度为2，4，6，8，10，12，14mg/L的AsA系列标准液。各取1.0ml于试管中，加入1.0ml 5%TCA，1.0ml乙醇，摇匀。再依次加入0.5ml 0.4%H3PO4－乙醇，1.0ml 0.5%BP－乙醇，0.5ml 0.03% FeCl3－乙醇，总体积5.0ml。将溶液置于30℃下反应90min，然后测定A534。以AsA浓度为横坐标，以A534为纵坐标绘制标准曲线，求出线性方程。
2. 提取 取植物叶片1.0g，按1︰5（W/V）加入5%TCA研磨，离心（4000×g）10min，上清液供测定。
3. 测定 AsA测定 取1.0ml样品提取液于试管中，按上述测标准液相同的方法进行测定，并根据标准曲线计算AsA含量。
DAsA测定 向1.0ml样品液中加入0.5ml 60mmol/L DTT－乙醇溶液，用Na2HPO4－NaOH混合液，将溶液pH调至7~8。置于室温下10min，使DAsA还原。然后加入0.5ml 20%TCA，把pH调至1～2。按AsA相同方法进行测定，计算出总AsA含量，从中减去AsA即得DAsA含量。
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