人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件,直接影响细胞的体外培养。所以今天详细给大家分享一下有关原代细胞的取材,想了解的小伙伴往下看哟~
一、取材的基本要求
1.取材要注意新鲜和保鲜
2.应严格无菌
3.防止机械损伤
4.去除无用组织和避免干燥
5.应注意组织类型、分化程度、年龄等
6.作好记录
二、各类组织的取材技术
皮肤和粘膜的取材
内脏和实体瘤的取材
血液细胞的取材
骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材
动物组织取材
人胚体组织取材
鸡(鸭)鸟类胚胎组织取材
皮肤和粘膜的取材
主要取自于手术过程中的皮片,方法似外科取断层皮片手术操作,但面积一般2~4c㎡。
内脏和实体瘤的取材
内脏除消化道外基本是无菌的,但取材时要明确和熟悉所需组织的类型和部位,实体瘤取材时要取肿瘤细胞丰富的区域,要避开破溃、坏死液化部分,以防污染,尽量去除混杂的结缔组织。
血液细胞的取材
血细胞、淋巴细胞的取材,一般多抽取静脉外周血,或从淋巴组织中(如脾、扁桃体、胸腺、淋巴结等)分离细胞,取材时应注意抗凝。
骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材
严格无菌,注意抗凝,还要尽快分离培养,离心后,用无钙、镁PBS洗两次,再用培养液洗一次后即可培养,不宜低温存放。
动物组织取材
鼠胚组织取材
首先用引颈或气管窒息致死法处死孕期合适的动物,然后将其整个浸泡在含有75%酒精的烧杯中,5min后(注意时间不能太长,以避免酒精从口或其他通道进入体内,影响组织活力),取出动物,在消毒过的木板上可用无菌的图钉或大头针固定四肢,切开皮肤,用无菌操作法解剖取胚或用无菌止血钳挟起皮肤、用无菌眼科剪沿躯干中部环形剪开皮肤,用止血钳分别挟住两侧皮肤拉向头尾,把动物反包,暴露躯干,然后再固定,更换无菌解剖器材,采用无菌操作法解剖取出胚胎。
幼鼠胚肾(或肺)取材
幼鼠采用上述方法处死消毒后,腹部朝上固定在木板上,先切开游离毛皮并拉开至两侧:然后采用无菌法打开胸腔取肺,或背部朝上固定在木板上,先将背部毛皮切开游离并拉向两侧,然后采用无菌法从背部打开腹腔取肾。
人胚体组织取材
取材方法与鼠类相同
鸡(鸭)鸟类胚胎组织取材步骤
(1)取孵化至适当胚龄(9~12天)的胚蛋,用照蛋灯在暗处灯检,若有丰富血管、胚体有运动的胚蛋,说明胚体发育良好,并用有色笔划出气室和胚体位置。
(2)将胚蛋置于蛋架上,先用温水清洗蛋壳,再用75%酒精棉球擦干;
(3)经碘酒、75%酒精消毒后,在无菌条件下采用无菌法用剪刀或中号镊子打开气室,沿气室边缘去除蛋壳;
(4)用眼科镊撕去壳膜,暴露出鸡胚;
(5)用弯头镊轻挑起胚头,取出胚胎,放入无菌平皿中,解剖取材。
以上关于原代细胞的取材介绍到这里,有需要的小伙伴可以收藏起来!
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