核酸染料使用方法和注意事项

    使用方法：

    1．胶染法（用法同EB） （1）制胶时加入GelRed核酸染料（例如：每50mL琼脂糖溶液中加入5μL GelRed 10,000×储液，以此比例类推）。 （2）按照常规方法进行电泳。 注意事项： 此方法染色染料用量相对较少，500 μL染料大约可以做100块50 mL的胶。 由于GelRed具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷却。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将GelRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中，然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。GelRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液。 含有染料的预制凝胶溶液可以大量制备，并长期保存直到使用。 此方法不适合预制聚丙烯xian胺凝胶，对于聚丙烯xian胺凝胶请使用泡染法。

    2．泡染法 （1）按照常规方法进行电泳。 （2）用H2O将GelRed 10,000×储液稀释约3,300倍到0.1 M NaCl中，制成3×染色液。（例如将15μL GelRed 10,000×储液和5 mL 1 M NaCl加到45 mL H2O中）。 （3）将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中，缓慢加入足量的3×染色液浸没凝胶，室温振荡染色30 min左右，最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5～10％丙烯xian胺的凝胶，染色时间通常介于30 min到1 h，并随丙烯xian胺含量增加而延长。

    注意事项：

    1）用泡染法染色时，染料用量较多，单次使用的染色液可重复使用3次左右。3×GelRed染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。

    2）如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。

    3）如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关，请尝试：降低琼脂糖浓度、延长凝胶时间以保证边缘清晰、改进上样技巧或选择泡染法染色。

    3．预染法（最省染料的染色方法，按25μL体积上样，500μL原液理论做20万个样品）

    1）该方法适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳

    2）工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的GelRed原液稀释1000倍，即为10 X GelRed工作液。GelRed工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。

    3）制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。

    4）样品染色：向分析样品中加入GelRed工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，使GelRed与样品中DNA充分结合。GelRed工作液加入量为总上样量的1/10，使GelRed在上样时的终浓度为1X.

    5）DNA Marker染色：将5μL DNA Marker和1μLGelRed工作液混匀，室温放置5分钟，使GelRed与DNA充分结合。

    6）上样、电泳：按常规操作。 注意事项： 根据染料分子量小，带电荷少的特性开发本染色方法，按照一块胶10个样品计算，500μL原液理论上可以完成2万块胶的染色。