对于养细胞的人来说,可谓是谈 「污」色变,任何时候听见细胞污染晴空万里立马暴风雨,而细胞污染又是养细胞过程中,尤其是新手经常遇到的问题。
细胞污染是一个很广的范围,微生物的种类更是各种各样,不同的污染的原因不同处理也不同,因此掌握对常见细胞污染的识别至关重要。
自己也是从刚开始养细胞 3 天一个小污染 7 天一个大污染过来,也积累了些经验,自己整理归纳了一下,希望对养细胞的同学有所帮助。
讲细胞污染之前需要说明一点,就是对待细胞大家一定要给予极大的重视,因为细胞相关的实验细胞的状态是很重要的。
对于确定污染的细胞zui好的办法就是及时丢弃,积极排查细胞污染的原因,除非是特别重要的细胞才会去抢救,而且抢救污染的细胞本来就有一定的风险,搞不好还可能会污染别的细胞。
下面进入正题,一般细胞污染大概分为细菌污染、真菌污染、支原体污染还有说法不一的黑胶虫污染等。每种污染的特征都很明显,因为微生物种类实在太多,所以我就选取比较典型和常见的污染讲下。
识别细胞污染的第1步就是从培养箱拿出细胞后观察细胞培养液的颜色,以常用的 DMEM 基础培养液为例,一般使用 DMEM 配制的培养液的颜色为鲜红色,而且是澄清透亮的,注意透亮不代表没有颜色。
但是大多数情况下会看到以下几种颜色,1 号管颜色偏紫一般原因是培养基 ph 升高置 ph 升高因有两个一个是培养液在冰箱放置太久,培养液中的二氧化碳逸出,第二个是培养箱没二氧化碳了,而且整个培养箱的细胞都会出现一样的颜色。
2 号管颜色有点偏红,一般是细胞生长消耗营养物质导致液 ph 稍微降低。
3 号和 4 号管颜色发黄,导致培养液颜色发黄的原因是培养液中的营养被大量消耗,培养液 ph 降低导致,导致 ph 降低的原因一般是细胞生长太快太满,提醒自己需要给细胞换液或者传代,但是有时细胞密度低生长速度缓慢也会出现这种情况,这时候就要怀疑是不是细胞污染了,除了细胞以外有其他东西在消耗着培养液的营养。
5 号管培养液呈肉眼可见的浑浊,这种情况一般就是细菌污染,具体判断还需要结合镜下的特征。
第二步就是去导致显微镜下结合镜下特征判断:
细菌污染
特征:培液会变黄,而且是浑浊的黄色,镜下观察不到正常细胞形态,镜下遍布细沙样的黑点。细菌污染一定要及时查找原因,如果换液的细胞全部污染,就要怀疑是不是培养液污染,或者使用的器械污染。
如果传代的细胞全部污染,也要怀疑培养液的问题,但是不要忽略了胰酶的问题。如果个别皿污染,有可能是一不小心蹭到或者枪头碰到非无菌区域。
怀疑是胰酶或者是培养液的问题,可以空培养,取空皿只加入怀疑的胰酶或者培养液培养,第二天观察。
霉菌污染
特征:培液不变浑浊但是会变黄,一般肉眼可见培养液中有团块的霉菌菌落,镜下呈细丝竹节管状,有菌丝结构。霉菌梅雨季节多见,一般霉菌污染及时扔掉,彻底清洁培养箱
白色念珠菌污染
特征:培液颜色没有明显改变,污染严重会变黄,但是是澄清的黄不变浑浊,镜下观察到好多像球形的亮点,多的话会聚集成葡萄串样。白色念珠菌污染不要抢救立马扔了,救也救不好,而且白色念珠菌会互相通过孢子传染。
杆菌污染
特征:镜下看到许多杆状的细菌,培液颜色没有明显改变。
支原体污染
特征:支原体污染很隐蔽,主要表现为细胞在生长速度变慢,细胞状态形态改变,而且不断死亡,镜下没啥改变,有时可见许多黑色的细胞碎片。检测支原体污染可以使用支原体检测试剂盒进行检测,现在市面上抗支原体的药很多,效果也都可以。不确定是不是支原体污染可以使用支原体药试一下,如果细胞状态明显改善,有可能就是支原体污染。
黑胶虫污染
特征:很邪乎,各种说法都有,一般认为是镜下许多黑点在不断布朗运动,刚开始对细胞没啥明显影响,多时会影响细胞的生长。一般也治不好,就扔了吧。现在主流认为黑胶虫是血清的问题,可以从新换一批次血清试一下。
其实污染也没有想象中的那么可怕,在做好消毒灭菌工作的基础上,提高自己的无菌意识和操作技术才是最为重要的。
从进入细胞培养室的穿着到超净台里物品的摆放都大有学问,对于刚养细胞的新手跟着师兄师姐养细胞是个很好的方式,刚开始不要着急上手,看师兄师姐操作时重点看他们的物品摆放、培养皿培养板开盖的方式和放置、吹打细胞的手法等小细节。
更多
分享蛋白检测抗体的方法与意义
厂商
2024.08.26
实验室检验检测离不开的生化试剂
厂商
2024.08.23
动物细胞培养的技术应用与培养步骤
厂商
2024.08.22
细胞培养过程中常见的污染源
厂商
2024.08.21