动物细胞培养的技术应用与培养步骤
动物细胞培养的技术应用
1、生物制品的生产(如制备单克隆抗体)
2、转基因动物的培养
3、检测有毒物质并判断其强弱
4、医学研究(生理 病理 药理)
5、器官移植培养
6、筛选抗癌药物
动物细胞培养的培养条件
1、无菌、无毒的环境:对培养液和所有培养用具进行无菌处理,通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素,以防被污染。此外应定期更换培养液,以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。
2、营养物质:无机物(无机盐、微量元素等),有机物(糖、氨基酸、促生长因子等)
3、血清和血浆 (提供细胞生长必须的营养成份)
4、温度和pH(36.5±0.5℃,7.2~7.4)
5、气体环境(95%的空气+5%CO₂的混合气体)
6、其中5%CO₂气体是为保持培养液的pH稳定
动物细胞培养的培养步骤
注:所有步骤应在无菌无毒的超净工作台进行。胰蛋白酶处理时间不宜过长。
取离体的动物组织,器官或细胞,剪碎并加入胰蛋白酶分解成单个细胞,配置形成细胞悬液。
制备动物细胞培养液体培养基(需加入血清,保证无菌无毒),将细胞接种至培养基,放入二氧化碳培养箱中进行初代培养。
当细胞增殖达到一定程度,出现接触抑制现象时,用胰蛋白酶再次处理,并用细胞悬液吹打贴壁生长的细胞。进行细胞计数。
依照计数结果,分瓶培养,进行传代培养。获得细胞系或细胞株。