下面上海远慕生物公司人 员讲解下ELISA方法的类型操作,常用的ELISA法有双抗体夹心法和间接法,前者用于检测大分子抗原,后者用于测定特异抗体。酶联免疫吸附试验:是酶 免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体( 聚苯乙烯微量反应板 )表面,使酶标记的抗原-抗体反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。
1、竞争ELISA:此法主要用于测定小分子抗原及半抗原,其原理类似于放射免疫测定。
其基本程序为:
① 抗体包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干
② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原(对照孔仅加酶标抗原)→ 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干
③ 加底物液 → 37℃ 20分钟,加终止液
④ 用ELISA检测仪测定OD值。
被结合的酶标抗原的量由酶催化底物反应产生有色产物的量来确定,如果待检溶液中抗原越多,被结合的标记抗原的量就越少,有色产物就减少,这样根据有色产物
的变化就可求出未知抗原的量。此法的优点在于快速、特异性高、且可用于小分子抗原及半抗原的检测;其主要不足在于每种抗原都要进行酶标记,而且因为抗原的
结构不同,还需应用不同的结合方法。此外试验中应用酶标抗原的量较多。
2、阻断ELISA
本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎(TGE)、猪伪狂犬病(PR)及猪胸膜肺炎(AP)的主要检测方法。
下面以AP2型抗体的阻断ELISA检测法为例介绍其操作程序:
① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干
② 用200μl阻断缓冲液进行封闭 → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干
③ 加工作量1:4稀释被检猪血清100μl → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干
④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干
⑤ 加100μl工作量猪抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干
⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分钟,加终止液
⑦ 用ELISA检测仪测定OD值。
本试验同时设标准阴、阳性血清对照、兔抗AP2型阳性对照、空白对照。
以上是上海远慕生物科技有限公司专业技术员给大家提供ELISA相关文章,希望可以对做实验朋友有所帮助。我们专业生产销售ELISA试剂盒产品,公司具有良好的市场信誉,迎得了国内外厂商的一致好评,如您还有什么疑问,请拨打上海远慕生物专业热线:021-51829242,我们将一对一的进行解答。
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