影响ELISA实验的对策及操作原因

上海远慕生物科技有限公司

2015/09/02 11:31

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实验配图 (11).jpg

       elisa试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在科研上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。
下面将操作中各个环节常出现问题解决办法总结如下：试剂要选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。标本收集与保存：避免使用肉眼可见的溶血标本、高脂标本和混浊标本；2-8℃下，标本可放置24-48小时，长期保存需放置-20℃下，请避免反复冻融。
      具体请参照：
      1.洗涤液：用前配制，有的试剂盒会标明，配好的4度下一般可以放一个月，如果没有标明，尽量用新鲜的，不要多配制；
      2.显色液（有A液和B液的），用前15分钟配制；
      3.标准品：有的试剂盒中标准品是已经配制好的，4度保存，有的是要现配制的，按照说明书操作；
      4.浓缩生物素结合的二抗和HRP：如果需要配制，试剂盒没注明配好可以保存多久的话，尽量现配现用（用前15分钟配制）；原则是试剂盒上没有指出配制物的储藏方式的话，应该现配现用；不要怕麻烦；还有小瓶的管子开盖前要离心，以免盖子上粘连以后总量不够；
      5.加样：室温温育的试剂，特别是温育时间比较短的实验操作的试剂，加样对数据的影响比较大，特别要注意加样问题。
    不好的操作原因：不会正确使用加样器；血清或血浆标本分离不好即进行加样；手工操作中，加样板过多造成加样後放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)；加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。

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