资生堂：“某某净”性激素加标回收率实验

“某某净”性激素加标回收率实验

雌三醇等7种性激素组分为2015版《化妆品安全技术规范》规定的禁用组分。本次实验按照2015版《化妆品安全技术规范》雌三醇等7种组分分析中的第一法，使用资生堂 CAPCELL PAK C₁₈ MG S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm色谱柱，对雌三醇等7种组分标准品以及加标实际样品进行检测分析，并对标准曲线以及回收率进行考察。

1.雌三醇等7种组分标准曲线的制作

分别称取实验室雌激素、雄激素和孕激素标准品，配制成1 mL分别含4种雌激素各0.1 mg、2种雄激素各30.0 μg和1种孕激素30.0 μg的混合标准储备溶液。取混合标准储备溶液0.00 mL、1.00 mL、2.00 mL、5.00 mL于10 mL容量瓶，用甲醇稀释至刻度，制得混合标准系列溶液。各组分标准曲线如图1至图7所示，线性相关系数均在0.99以上。

图1  雌三醇标准品浓度-峰面积标准曲线图

图2  雌酮标准品浓度-峰面积标准曲线图

图3  雌二醇标准品浓度-峰面积标准曲线图

图4  己烯雌酚标准品浓度-峰面积标准曲线图

图5  睾丸酮标准品浓度-峰面积标准曲线图

图6  甲基睾丸酮标准品浓度-峰面积标准曲线图

图7  黄体酮标准品浓度-峰面积标准曲线图

2.回收率

从客户处得到样品“某某净儿童霜”，因客户反映按照技术规范2.2“膏状、乳状样品”前处理方法，需使用饱和氯化钠溶液进行振荡溶解、再以环己烷分三次萃取、最后馏除环己烷并以甲醇溶解，操作过程复杂，加标回收率较低。

为解决该问题，实验室将前处理方法进行调整，具体方法为：称取样品1 g于10 mL容量瓶，加甲醇稀释至刻度，以10000 rpm转速离心10 min，取上清液，经0.22 μm滤膜过滤，滤液作为样品待测溶液。

以此样品完成加标回收实验，分别测定样品溶液以及加标样品溶液，如图8和图9所示，各峰可实现基线分离，分离度良好。样品溶液雌激素、雄激素和孕激素均未检出。

图8  样品溶液及加标样品溶液分析色谱图（雌激素 PDA 204 nm）

图9  样品溶液及加标样品溶液分析色谱图（雄激素、孕激素 PDA 245 nm）

对加标样品进行回收率计算，各组分回收率结果如表1所示，雌激素和雄激素回收率在90%-110%左右，孕激素黄体酮回收率为74.64%。

表1  加标回收率结果（浓度单位：μg/mL）

3.结论

综上所述，使用资生堂CAPCELL PAK C₁₈ MG S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm色谱柱按照2015版《化妆品安全技术规范》中雌三醇等7种组分分析中的第一法，可得到线性良好的标准曲线，对实际加标样品使用甲醇提取回收，各组分回收率良好。

注： 图中色谱峰线条不平滑是由于图像在复制过程中解像度问题引起的。

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