2018/09/11 14:38
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产品配置单:
Agilent AssayMAP Bravo 蛋白质样品前处理平台
型号: AssayMAP Bravo
产地: 美国
品牌: 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统
型号: 1290 Infinity II
产地: 德国
品牌: 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II Multisampler
型号: 1290 Infinity II Multisampler
产地: 德国
品牌: 安捷伦
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方案详情:
前言
抗体药物偶联物 (ADC) 是制药公司药物开发途径中快速发展的一类新型生物治疗药物。ADC的制备方法是通过化学方法将具有生物活性的小分子药物与单克隆抗体相连。ADC 通过结合高效细胞毒性药物与靶标特异性抗体将细胞毒性药物直接送达病变组织,同时限制药物在非目标组织中的毒性。
药物/抗体比率 (DAR) 是抗体所连接药物数量的平均值,它是 ADC 的重要属性。由于低载药量会降低效力,而高载药量则会对药代动力学 (PK) 和毒性产生负面影响,因此 DAR 值能够对药效产生影响。目前的偶联化学方法有赖氨酸侧链酰胺化或半胱氨酸链间二硫键还原,载药量通常为 0 ~ 8 个药物分子 (D0 ~ D8)/抗体。
LC/MS 是测定 ADC 的 DAR 和载药量分布的常用分析方法, 也是鉴定不同种类载药 ADC 的关键方法。多数情况下可直接使用 LC/MS 分析完整 ADC 从而确定 DAR 值。而在需要有关轻链和重链的具体 DAR 信息时,则可能要在 LC/MS 分析前对 ADC 进行还原。此外,还可能需要在 LC/MS 分析前对 ADC 进行去糖基化以进一步降低谱图复杂性。
LC/MS 分析前的 ADC 样品前处理通常由手动完成,因此可能引入变异性并对通量产生限制。Agilent AssayMAP Bravo 是一款简单易用的自动化样品前处理系统,能够提高可重现性、通过减少手动操作时间节省人力、具有可扩展性(可同时运行 8 – 96 个样品)、简化人员间和站点间的方法转移,并能最大限度减少人为误差。AssayMAP Bravo 是一款适用于上述反应的强大自动化样品前处理平台。
AssayMAP Bravo 自动化样品前处理平台与安捷伦 LC/MS 和 MassHunter/BioConfirm/ DAR 计算器软件相结合,能够针对 ADC DAR 计算提供可重现的便捷解决方案。本应用简报中采用 Agilent AssayMAP Bravo 平台对经/未经去糖基化的完整和还原态 ADC 进行了平行处理,并采用安捷伦 LC/MS 对其进行分析,随后通过安捷伦 DAR 计算器确定 DAR。
结论
将快速 PNGase F 与 AssayMAP Bravo 自动化样品前处理平台相结合,可实现高通量快速去糖基化(用时少于 1 小时)。界面友好的蛋白质样品前处理工作台控制软件与 AssayMAP Bravo 平台的精确度使 ADC 样品轻松实现可重现的还原与去糖基化,便于进行 DAR 计算。Agilent 1290 Infinity UHPLC/6550 Q-TOF 质谱仪能够生成高分辨率精确质量谱图以便通过MassHunter/BioConfirm/DAR 计算器软件实现直接、准确的 DAR 计算。Agilent PLRP-S 色谱柱以甲酸为流动相可获得优异峰形,从而进一步提高灵敏度。安捷伦的自动化平台、液质联用系统、软件包与消耗品提供了能够快速、轻松、准确地获得可重现 ADC DAR 计算结果的完整解决方案。
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