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本司产品仅用于科研,不用于临床诊断和治疗
小鼠胰岛细胞
注意事项如下:
(1)无菌操作:细菌或霉菌污染是培养失败的常见原因,必须加强对无菌操作的观念,以预防为主,一旦污染,通常难以消除。
(2)培养基:所使用的培养基必须满足细胞存活和生长的必要条件。由于细胞来源的动物种类、组织类型不同,对培养基的要求也会有一定差异,必要时可通过预实验选择适宜的培养基。
(3)小牛血清:小牛血清对于维持培养细胞的存活和促进细胞增殖起着至关重要的作用。可以选择多个不同批次的小牛血清进行小样分析。一旦确定了某一厂家某一批次的小牛血清,就应坚持使用至实验结束。
(4)胶原酶溶液:必须新鲜配制,贮存时间过长(即使是低温保存在-20℃),也会影响消化效力,导致消化时间过长,增加细胞损伤。
(5)L-谷氨酰胺:几乎所有细胞对谷氨酰胺都有较高的需求,细胞需要谷氨酰胺来合成核酸和蛋白质,缺乏谷氨酰胺会导致细胞生长不良而死亡。谷氨酰胺在溶液中不太稳定,在4℃冰箱贮存两周以上时,应重新加入相同量的谷氨酰胺。
(6)静置培养:原代细胞在消化分离后,放置于CO2培养箱的前24~48h(必要时达到72小时)内,应处于绝对静止状态,切忌频繁取出培养瓶观察生长情况,这会使原代分离细胞难以附着于壁面,更谈不上伸展和增殖。
(7)消化时间:通常消化至肉眼可见微小组织颗粒即可,因为此时组织颗粒已松散,稍加吹打即可形成细胞团或单个细胞,过长的消化时间往往导致细胞损伤加重,细胞培养成活率降低。
(8)其他生长因子:经过以上处理,一般原代分离细胞培养都可以成功。对于少数特殊类型的细胞,也可以考虑添加一些特殊的生长因子,例如胰岛素可以促进细胞对葡萄糖和氨基酸的摄取。此外,内毒素、EGF、FGF等也具有促进有丝分裂的作用,但费用较高。
原代细胞培养具体步骤如下:
1、准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2、布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。
3、处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2-3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30-60分钟。
4、剪切:用眼科剪把组织切成2-3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30-50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。
5、消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6、分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速(500-1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液。
7、计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在7.2-7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO3调整。
8、培养:置于37℃温箱培养,如用CO2温箱培养,瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞,纱布塞易生霉菌,每次换液时需要换新塞。
下列是公司正在出售的产品:
cAMP人环磷酸腺苷酶联免疫试剂盒 | VD2维生素D2ELISA试剂盒 |
cGMP人环磷酸鸟苷酶联免疫试剂盒 | VD维生素DELISA试剂盒 |
COX-2人环加氧酶2酶联免疫试剂盒 | VC维生素CELISA试剂盒 |
talin人踝蛋白酶联免疫试剂盒 | VB6维生素B6ELISA试剂盒 |
ALOX5/LOG5人花生四烯酸5脂氧合酶酶联免疫试剂盒 | VB3维生素B3ELISA试剂盒 |
ALOX15/LOG15人花生四烯酸15脂加氧酶酶联免疫试剂盒 | VB2维生素B2ELISA试剂盒 |
ALOX12/LOG12人花生四烯酸12-脂氧合酶,12S型酶联免疫试剂盒 | VB12维生素B12ELISA试剂盒 |
AA人花生四烯酸酶联免疫试剂盒 | VB1维生素B1ELISA试剂盒 |
SCS人琥珀酰辅酶A合成酶酶联免疫试剂盒 | VA维生素AELISA试剂盒 |
EP人红细胞原卟啉酶联免疫试剂盒 | MTF微量转铁蛋白ELISA试剂盒 |
EPOR人红细胞生成素受体酶联免疫试剂盒 | MAPT微管相关蛋白tauELISA试剂盒 |
EPO人红细胞生成素酶联免疫试剂盒 | MAP-2微管相关蛋白2ELISA试剂盒 |
smActinin-α人横纹肌辅肌动蛋白α酶联免疫试剂盒 | MAP1LC3B微管相关蛋白1A/1B轻链3BELISA试剂盒小鼠胰岛细胞 |
HAP1人亨廷顿相关蛋白1酶联免疫试剂盒 | MAP1LC3A微管相关蛋白1A/1B轻链3AELISA试剂盒 |
培养信息:
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
产品货号 CM-M142
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传2-3代左右
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
原代细胞和传代细胞培养的区别:
一、含义不同
原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养,也称初代培养。原代培养是将培养物放置在体外生长环境中持续培养,中途不分割培养物的培养过程。
传代培养是指需要将培养物分割成小的部分,重新接种到另外的培养器皿(瓶)内,再进行培养的过程。
二、培养过程不同
原代培养将动物组织从机体中取出离散成单个细胞(常用胰蛋白酶),置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。培养过程相对复杂,培养条件要求也高,在所有的操作过程中,都必须保持培养物及生长环境的无菌。
传代培养是在原代细胞基础上通过胰酶等物质消化后继续用于细胞培养的细胞,它与原代细胞具有相同核型。这类细胞在体外可以无限制分裂。一般普通培养条件下都容易生存,传代细胞容易增殖。但也要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染,所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作。
三、培养结果不同
原代培养细胞会分裂。原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了,细胞的生长就会出现停滞,大部分细胞衰老死亡。细胞接种后一般几小时内就能贴壁,并开始生长,如接种的细胞密度适宜,5天到一周即可形成单层。
传代培养一般传到40到50代。一般情况,传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上,2到4天就可在瓶内形成单层,需要再次进行传代。
四、应用不同
原代细胞培养为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段,同时也为以后传代培养创造条件。利用此方法还可直接服务于临床实践。例如,用从手术中切除的肿瘤细胞进行原代培养,然后用该培养细胞进行抗癌药物的筛选,来帮助选择最有效的化疗方案。
传代培养主要应用在医学领域,如口腔医学领域重新构建结构复杂的牙根,还有改良羊水细胞培养技术,可多次获得有效地细胞克隆,大大提高培养成功率,增加了可分析核型数量,提高了产前诊断工作的质量和效益。
公司正在出售的产品:
小鼠骨髓单核巨噬细胞 | 猪鼻腔粘膜上皮细胞永生化 细胞专用培养基 | Stbl3甘油菌 |
小鼠骨骼肌细胞 | 羊睾丸间质细胞永生化 细胞专用培养基 | 蛋白去除试剂M |
小鼠睾丸支持细胞 | 鸭胚肝间质细胞永生化 细胞专用培养基 | 蛋白去除试剂S |
小鼠肝星形细胞 | 鸭脑微血管内皮细胞永生化 细胞专用培养基 | DEAE-Dextran细胞转染试剂盒 |
小鼠肝实质细胞 | 小鼠脂肪干细胞永生化 细胞专用培养基 | 磷酸钙法细胞转染试剂盒 |
小鼠肝内胆管上皮细胞 | 小鼠胰腺星状细胞永生化 细胞专用培养基 | TG1甘油菌 |
小鼠肝枯否细胞 | 小鼠肾小球系膜细胞永生化 细胞专用培养基 | DH5α甘油菌 |
小鼠肝窦内皮细胞 | 小鼠肺成纤维细胞永生化 细胞专用培养基 | PLP固定液(Nakane-McLean固定液) |
小鼠肝动脉平滑肌细胞 | 兔肝脏间质细胞永生化 细胞专用培养基 | Methacarn固定液 |
小鼠肝动脉内皮细胞 | 山羊乳腺上皮细胞永生化 细胞专用培养基 | 乙酰丁香酮 |
小鼠腹膜间皮细胞 | 人子宫内膜上皮细胞永生化 细胞专用培养基 | 四环素盐酸盐(USP)小鼠滋养层干细胞 |
小鼠肺血管周细胞 | 人主动脉内皮细胞永生化 细胞专用培养基 | 嘌呤霉素盐酸盐 |
小鼠肺小动脉平滑肌细胞 | 人胰腺神经内分泌肿瘤细胞永生化 细胞专用培养基 | 磷酸钙法细胞转染试剂 |
小鼠肺微血管平滑肌细胞 | 人胰腺癌相关成纤维细胞永生化 细胞专用培养基 | 脂质体核酸转染试剂 |
小鼠肺微血管内皮细胞 | 人胰腺癌细胞永生化 细胞专用培养基 | 一步法快速支原体检测试剂盒 |
小鼠肺巨噬细胞 | 人前庭鞘膜瘤细胞永生化 细胞专用培养基 | 细胞膜固定剂 |
小鼠肺动脉成纤维细胞 | 人胆囊上皮细胞永生化 细胞专用培养基 | 红细胞裂解液 |
小鼠肺大静脉平滑肌细胞 | 湖羊瘤胃上皮细胞永生化 细胞专用培养基 | Rnase A(10mg/ml) |