概述
胰高血糖素样肽-1(GLP-1)激动剂被认为是未 来几年最具市场增长潜力的一类糖尿病药物。司美 格鲁(Semaglutide,又称索马鲁肽)和替尔泊肽 (Tirzepatide,又称替西帕肽),作为新一代的GLP- 1药物,不仅可以刺激体内胰岛素的释放,有效地控 制血糖水平,同时可以抑制胃肠蠕动,增加饱腹 感,抑制食欲。它们在降糖、减重、心血管收益、 安全性等方面均展现出良好的临床优势。本文建立 了一种血浆中索马鲁肽和替尔泊肽药物的测定方 法,为药物安全性和治疗效果的进一步研究提供科 学依据。
关键词
多肽;Peptide-3-MW;Aeris peptide XB-C18; LC-MS/MS
化合物信息
实验部分
3.1仪器、试剂与材料
3.1.1主要仪器设备
液相色谱串联质谱仪(AB SCIEX Triple QuadTM6500),配有电喷雾离子源(ESI); 96孔正压装置(Agela Cleanert M96);
3.1.2试剂材料
96孔板:Peptide-3-MW (5mg/1mL/Well, 2ea/pk)
屈臣氏蒸馏水,甲醇、甲酸、乙醇均为色谱 级。
3.1.3样品基质
EDTA抗凝大牛血浆
3.2样品前处理方法
预处理:200 µL血浆,加入400 µL甲醇蛋白沉 淀,15000g/5min 离心取500µL上清,再加入 400 µL水稀释,涡旋混匀,待净化;
活化:96孔板依次使用 200 µL甲醇、200 µL水 活化;
上样:加载预处理后的血浆至活化后微孔板;
淋洗:使用500 µL水淋洗微孔板;
洗脱:用50 µL洗脱液(5%甲酸 乙醇:水=4:1) 洗脱2次,涡旋混合,待检测
3.3仪器检测条件
3.3.1色谱条件
色谱柱: Aeris peptide XB-C18(2.1×100 mm, 2.6 μm);P/N: 00D-4505-AN
流动相A相:0.1%甲酸水溶液;
流动相B相:0.1%甲酸乙腈溶液;
流 速:0.3 mL/min;
柱 温:40 ℃;
进样量:5 μL;
梯度程序见表2:
3.3.2质谱条件
离子源类型:电喷雾离子源(ESI+)
扫描方式:多反应监测正负离子模式(MRM)
喷雾针电压:5500 V
离子源温度:450 ℃
加热器(GS1):60 psi
辅助加热气(GS2):60 psi
气帘气(CUR):30 psi
碰撞气(CAD):High
为获得较好的稳定和灵敏度,各化合物监测离 子对的去簇电压(DP)和碰撞电压(CE),目 标化合物定量离子对以及内标监测离子对等参 数均需经过系统优化。本案例参数仅供参考不 具备法律效力。
3.4结果与讨论
3.4.1 灵敏度和线性
如图1所示,该方法两种化合物的线性范围为 0.5ng/mL~200ng/mL,线性良好,R 2均大于0.995。 化合物定量下限均可做到0.5ng/mL血浆浓度。图2、 3中可以看出两个化合物峰形良好,且残留非常小 (图4),进曲线最高点200ng/mL后进空白溶液,索 马鲁肽残留在千分之一,替尔泊肽残留在万分之五 以内。
3.4.2 方法回收率和基质效应
分别对血浆浓度10ng/mL和100ng/mL进行了加 标回收考察和基质效应情况评估,结果见下表4,两 个化合物绝对回收均在80%以上,但表现出一定的基 质抑制效应。
3.5实验谱图
结论
本实验建立了血浆中索马鲁肽(Semaglutide)和 替尔泊肽(Tirzepatide)的定量方法,LQD可以做到 0.5ng/mL,线性范围0.5ng/mL~200ng/mL,外标法 回收率均在80%以上。
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