揭秘沙门菌血清鉴定的黑科技：实时荧光PCR技术的应用！

沙门菌是一种较常见的食源性肠道致病菌，是肠杆菌科中最复杂的菌属，其抗原结构主要由菌体抗原( O 抗原) 、鞭毛抗原( H 抗原) 及表面抗原( Vi 抗原等) 3 部分组成。根据各抗原组成的不同，可将沙门菌分为不同的血清型，目前已确认的有2600多种血清型，我国已检出 300 余种。

由沙门菌引起的感染性疾病是一个世界性健康难题，对全球特别是发展中国家构成严重威胁，被世界卫生组织列为具有严重危害或中等危害的食源性病原菌。

由不同血清型沙门菌引发的疾病类型会有所差异，沙门菌血清型的准确快速鉴定对暴发流行中的溯源分析具有重要意义。

最近看到一篇由王雅静，管红霞，沙丹等撰写的专业论文《实时荧光PCＲ检测技术在沙门菌血清鉴定中的应用》，研究对比实时荧光PCＲ法和传统的玻片凝集法在实验操作、检测成本及灵敏度等方面的差异，了解实时荧光PCＲ 检测技术在沙门菌血清分型中的实际应用价值。

研究方法

选取 2010—2015 年无锡市健康从业人员肠道分离得到的 144 株沙门菌，分别采用传统玻片凝集法和实时荧光 PCR 法（美正生物）进行血清分型，以前者为金标准，比较两种方法的一致性。

研究结果

144 株沙门菌利用传统玻片凝集法均可分型，共鉴定出 28 个型别。两种方法鉴定结果一致的有 134 株菌，符合率为93. 06%，Kappa 值为 0. 68，具有高度一致性。

采用实时荧光 PCＲ 法鉴定沙门菌血清型，结果与金标准的玻片凝集法具有高度一致性。有10 株菌株检测结果与玻片凝集法不一致，可能与致病菌自身部分待测基因环境或宿主的改变发生突变，进而基因组呈现多样性有关。

4 种沙门菌优势血清型两种方法分型结果完全一致，且此血清型分布与 2017年无锡市食品行业从业人员沙门菌血清分布基本一致。

玻片凝集法VS实时荧光PCＲ法

玻片凝集法直观且可靠性高，是目前公认的沙门菌血清分型金标准。但耗时长，操作过程复杂，需尝试的血清诊断试剂较多，鉴定成本高，常要受制于试剂种类与质量优劣，且需多次诱导时具有一定鉴定难度。

部分粗糙型自凝性沙门菌利用玻片凝集法不能进行分型。个别情况下沙门菌的抗原与血清凝集反应程度较弱，对实验人员经验和操作水平要求高。

实时荧光PCR法是基于目标基因簇中特定区域或基因片段，操作简单，不易出现差错，对普通实验人员来说从分离培养、提取核酸到检测、记录 Ct 值、确定血清分型最多仅需要 1 d，且常规的一块 96 孔 PCＲ 板可以同时检测 8 份样本，极大缩短了检测时间。

但实时荧光 PCＲ 法对一些不常见、存在交叉情况的血清型鉴定时，尚无法准确判断沙门菌血清型。

实时荧光 PCＲ 法成本为 100 元/份，操作简单，耗时仅 1 d; 玻片凝集法成本为 300 元/份，操作复杂，耗时 3～5 d。

如何选择和应用此两种方法？

实时荧光 PCＲ 法对沙门菌进行血清分型与玻片凝集法鉴定结果一致性高，且检测时间较短，操作简单。

1. 对于多数常见的沙门菌菌株的分型鉴定，采用实时荧光 PCＲ 检测技术效果良好，尤其当检测量较大时，检测效率较高。

2. 对较不常见或血清型存在交叉的菌株，在实时荧光 PCＲ 法的基础上，再有针对性地进行凝集试验，可省去逐一用血清试剂做凝集反应的繁琐步骤，建议两种方法联合使用，可提高沙门菌血清分型检测效率。

本来内容来源：王雅静,管红霞,沙丹,等.实时荧光PCR检测技术在沙门菌血清鉴定中的应用[J].江苏预防医学2023,34(01):105107.DOI:10.13668/j.issn.10069070.2023.01.032.

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