小伙伴们大家好,前面我们分别对鬼峰和肩峰离奇事件进行了分析,找出了根源。最近接到实验室小jie姐报案称实验过程保留时间有规律的漂移,小伙伴描述的着实诡异,跟本探长继续来探案吧,揭开谜底。
先来看看备案笔录:
User:老师,发现主峰每一针都向后移动半分钟。
Engineer:只有保留时间移动?峰型和柱效有变化吗?
User:没有,用了一个星期,峰已经从5分钟漂到10分钟了。
Engineer:手动混匀走单泵还是双泵用的混合器走样?
User:单泵……
案情陈述
客户做某单糖衍生成盐的物质A,色谱条件:
色谱柱:氨基柱,4.6×250mm,5μm。
柱温:35℃;
流动相A:乙腈,流动相B:硫酸缓冲溶液(取磷酸氢二钾7.0g,用2000mL水溶解,加氨水0.5mL,用磷酸调节pH至7.5);流动相比例:流动相A:流动相B=75:25;
流速:1.5mL/min;
紫外检测波长:195nm;
进样体积:20μL。
样品由1:1乙腈水溶解制得。
案情细节披露
客户小jie姐在实验过程中发现在一个序列中保留时间有规律的后延,客户讲述峰形没有太大变化,峰面积RSD也还好,换过不同的实验人员多次重新配置了流动相,均存在这个问题,色谱图如下:
漂移色谱图
漂移重叠的色谱图
这里要特别指出,用户小jie姐用的色谱柱和色谱仪不是月旭品牌的,仅仅是基于用户小jie姐对我们月旭工程师的信任,向我们的销售工程师寻求指导帮助,我们都是做好事不留名的月旭人。
案情分析
我们先来罗列一些导致保留时间漂移的原因,再结合用户的色谱图来分析一下。
导致保留时间漂移的可能原因及解决办法:
1、色谱柱原因:
1)柱子没有达到平衡
解决办法:延长平衡时间。
2)色谱柱污染或键合相流失
解决办法:更换新柱。
2、仪器原因:
1)柱温箱温度变化
解决办法:保持室温恒定,柱温设定正确且恒定。
2)仪器原因导致的流动相比例变化,如混合器,比例阀出现故障。
解决办法:排查仪器流速恒定,检查比例阀及混合器是否正常。
3、流动相配置原因
解决办法:重新配置流动相,确保配置比例准确,对于易挥发的正相体系可使用安全瓶盖防止挥发;在使用缓冲盐的体系保证缓冲盐没有沉淀或析出,pH恒定。
4、系统漏液
解决办法:排查系统的各接口处是否漏液,观察压力波动情况以及压力线。如有漏液应重新连接管路拧紧。
5、样品自身原因,如样品降解,保留时间发生变化
解决办法:研究更利于样品稳定的流动相及溶剂体系。
根据用户的情况给出建议
1、重配流动相
2、排查仪器
3、排查柱子
如此有规律的变化,考虑仪器的原因比较大。我们依据用户的陈述来判断一下:
首先用户说柱温箱温度设定没问题而且温度恒定,我们排除这个原因。
其次小jie姐说他们是等度而且是预混合之后才上机的,并且多人多次配置,这样基本可以排除流动相的问题。
第三,针对色谱柱的问题客户强调他们延长了平衡时间,而且分不同工作日跑了几次序列均存在这个问题,故可以排除色谱柱的问题,最后只剩下仪器的问题了,由于用户没有时间慢慢排查,换了一台仪器,保留时间漂移的问题没有再出现,至此谜底解开了。
Engineer: 老师您好,换了仪器之后,问题有改善吗?
User: 昨天换了两台仪器,有一台仪器跑出来的时间漂移不明显,可以接受!
Engineer: 这根柱子比较特殊,现在漂移情况如何?
User: 嗯嗯,做了一天下来,漂移不到1分钟。
Engineer: 太好了!
征求用户同意我们编辑了本文,分享给更多的用户小伙伴,当实验过程中遇到保留时间漂移的情况时莫慌,我们可以逐一排查仪器、色谱柱、流动相、样品等因素,色谱图是以上各部分综合作用产生的结果,我们只要耐心一一排查就可以找出问题所在。
[来源:月旭科技(上海)股份有限公司]
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