抽丝剥茧探案三：难以捉摸的保留时间漂移

先来看看备案笔录：

User：老师，发现主峰每一针都向后移动半分钟。

Engineer：只有保留时间移动？峰型和柱效有变化吗？

User：没有，用了一个星期，峰已经从5分钟漂到10分钟了。

Engineer：手动混匀走单泵还是双泵用的混合器走样？

User：单泵……

客户做某单糖衍生成盐的物质A，色谱条件：

色谱柱：氨基柱，4.6×250mm，5μm。

柱温：35℃；

流动相A：乙腈，流动相B：硫酸缓冲溶液（取磷酸氢二钾7.0g，用2000mL水溶解，加氨水0.5mL，用磷酸调节pH至7.5）；流动相比例：流动相A：流动相B=75：25；

流速：1.5mL/min；

紫外检测波长：195nm；

进样体积：20μL。

样品由1：1乙腈水溶解制得。

客户小jie姐在实验过程中发现在一个序列中保留时间有规律的后延，客户讲述峰形没有太大变化，峰面积RSD也还好，换过不同的实验人员多次重新配置了流动相，均存在这个问题，色谱图如下：

漂移色谱图

漂移重叠的色谱图

这里要特别指出，用户小jie姐用的色谱柱和色谱仪不是月旭品牌的，仅仅是基于用户小jie姐对我们月旭工程师的信任，向我们的销售工程师寻求指导帮助，我们都是做好事不留名的月旭人。

我们先来罗列一些导致保留时间漂移的原因，再结合用户的色谱图来分析一下。

导致保留时间漂移的可能原因及解决办法：

1、色谱柱原因：

1）柱子没有达到平衡

解决办法：延长平衡时间。

2）色谱柱污染或键合相流失

解决办法：更换新柱。

2、仪器原因：

1）柱温箱温度变化

解决办法：保持室温恒定，柱温设定正确且恒定。

2）仪器原因导致的流动相比例变化，如混合器，比例阀出现故障。

解决办法：排查仪器流速恒定，检查比例阀及混合器是否正常。

3、流动相配置原因

解决办法：重新配置流动相，确保配置比例准确，对于易挥发的正相体系可使用安全瓶盖防止挥发；在使用缓冲盐的体系保证缓冲盐没有沉淀或析出，pH恒定。 

4、系统漏液

解决办法：排查系统的各接口处是否漏液，观察压力波动情况以及压力线。如有漏液应重新连接管路拧紧。 

5、样品自身原因，如样品降解，保留时间发生变化

解决办法：研究更利于样品稳定的流动相及溶剂体系。

1、重配流动相

2、排查仪器

3、排查柱子

如此有规律的变化，考虑仪器的原因比较大。我们依据用户的陈述来判断一下：

首先用户说柱温箱温度设定没问题而且温度恒定，我们排除这个原因。

其次小jie姐说他们是等度而且是预混合之后才上机的，并且多人多次配置，这样基本可以排除流动相的问题。

第三，针对色谱柱的问题客户强调他们延长了平衡时间，而且分不同工作日跑了几次序列均存在这个问题，故可以排除色谱柱的问题，最后只剩下仪器的问题了，由于用户没有时间慢慢排查，换了一台仪器，保留时间漂移的问题没有再出现，至此谜底解开了。

Engineer: 老师您好，换了仪器之后，问题有改善吗？

User: 昨天换了两台仪器，有一台仪器跑出来的时间漂移不明显，可以接受！

Engineer: 这根柱子比较特殊，现在漂移情况如何？

User: 嗯嗯，做了一天下来，漂移不到1分钟。

Engineer: 太好了！

征求用户同意我们编辑了本文，分享给更多的用户小伙伴，当实验过程中遇到保留时间漂移的情况时莫慌，我们可以逐一排查仪器、色谱柱、流动相、样品等因素，色谱图是以上各部分综合作用产生的结果，我们只要耐心一一排查就可以找出问题所在。