补体依赖的细胞毒性(complement dependent cytotoxicity,CDC )是指补体参与的细胞毒作用,即通过特异性抗体与细胞膜表面相应抗原结合,形成复合物而激活补体经典途径。
补体经典激活途径是抗体介导的体液免疫应答的主要效应方式之一。补体分子C1q是补体经典激活途径中的启动蛋白,具有调节各种免疫细胞反应的能力。多分子蛋白质复合物C1通过C1q亚基结合免疫复合物中的Fc片段而被激活。活化的C1依次酶解C4和C2,形成C3转化酶,C3转化酶进一步酶解C3形成C5转化酶。当C5转化酶裂解C5形成C5a和C5b时,即开始了膜攻击复合物(MAC)的装备,膜攻击复合物由C5~C9构成,在功能上作为一个整体可导致靶细胞的溶解破坏。
CDC是抗体的一个重要效应功能。C1q是CDC的核心成分。C1q与IgG的结合能力和由此产生的CDC活性影响着治疗性单克隆抗体的安全性和有效性,因此需要在开发过程中进行分析表征。HTRF人源C1q结合试剂盒旨在测量IgG Fc区与人源C1q的结合能力。
Figure 1. Role of C1q in the classical pathway of CDC
# 实验原理 #
HTRF人源C1q结合试剂盒采用夹心法在均相体系下测量人源C1q和IgG Fc端的结合,实验方便快捷。该试剂盒里的检测试剂为Eu标记的抗C1q抗体(供体),生物素化的抗人IgG Fab抗体与标记了染料d2的链霉亲和素结合后的复合物(受体)。当被检测抗体Fc与C1q结合,供体荧光团会接近受体,从而产生一个FRET信号。FRET信号的强度与抗体Fc区与人C1q的结合程度成正比。
Figure 2. HTRF® C1q binding kit assay format
# 实验流程 #
人源C1q结合试验在依次加入实验试剂后只需要一步孵化步骤。先将被测抗体(或标准品)加入到检测板中。然后加入预混物(生物素化的抗人源IgG-Fab抗体和标记有d2的链霉亲和素),接着加入人C1q蛋白和Eu标记的抗C1q抗体。在室温条件下孵育3小时后,可以在HTRF兼容的酶标仪上记录FRET信号。
Figure 3. HTRF® Human C1q Binding assay protocol
# 验证数据 #
将纯化的人IgG1、IgG2和IgG4抗体用试剂盒里的稀释液梯度稀释后作为样品,用人源C1q结合试剂盒进行测试。实验结果如Figure 4所示,人IgG1与C1q有效结合,人IgG2与C1q的相互作用较弱,而人IgG4没有与C1q结合。此结果与文献相符。[1]
Figure 4. Binding profiles of Human IgG isotype controls
# 相关产品 #
Product | Cat. number |
HTRF Human C1q Binding Kit | 64C1QPET/G, 100/500 tests |
参考文献
[来源:珀金埃尔默企业管理(上海)有限公司]
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