上海月旭提供全套双酚A检测方法

根据卫生部办公厅《关于征求禁止双酚A用于婴幼儿食品用容器公告意见的函》，拟自2011年6月1日起，禁止双酚A用于婴幼儿食品容器生产和进口；自2011年9月1日起，禁止销售含双酚A的婴幼儿食品容器。 

双酚A危害：诱发性早熟或致癌
双酚A，也称BPA，是一种广泛应用于塑料制造的化学物质，主要用于生产聚碳酸酯（PC）、环氧树脂等多种高分子材料，被广泛用于生产化工产品和食品相关产品，如婴儿奶瓶、餐具、微波炉器皿、食品包装容器的涂层、饮料瓶以及供水管道等。研究显示，双酚A是一类具有雌激素样活性的内分泌干扰物，可能诱发儿童性早熟或致癌。

自2011年3月1日起，欧盟成员国禁止使用含双酚A的塑料生产婴儿奶瓶，并从6月1日起禁止进口此类塑料婴儿奶瓶。针对双酚A安全性问题，特别是对婴幼儿健康的影响，卫生部已将婴儿配方食品罐装容器和塑料奶嘴中双酚A列入2011年国家食品安全风险监测计划。 

上海月旭提供全套双酚A检测方法
目前，国内对双酚A检测方法有高效液相色谱紫外检测器法、高效液相色谱荧光检测器法、高效液相色谱二级阵列管检测器法、高效液相色谱-串联质谱法。但是，有关资料表明：食品接触材料中双酚A含量的检测被忽视，无明确的检测方案，如近期的“含双酚A的婴儿奶瓶”事件。上海月旭在多次的实验和研究后，建立了测定塑纸杯、奶瓶等食品接触材料中双酚Ａ含量的高效液相色谱法。 

1 实验部分
1.1 试剂：
甲醇：色谱纯（美国TEDIA试剂公司）
乙酸、无水乙醇：分析纯
水：超纯水（符合实验室一级用水）
双酚A标准物质：纯度＞99.0%（美国Accustandard 公司）
1.2 仪器与设备：
LC310高效液相色谱仪（江苏天瑞仪器股份有限公司）
DAD二极管阵列检测器（德国诺尔有限公司）
电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）
超声波清洗器（张家港市神科超声电子有限公司）
超纯水机（南京易普易达科学发展有限公司）
恒温水浴锅（金坛市杰瑞尔电器有限公司）
1.3 分析条件：
色谱柱：XB-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，（上海月旭提供）
流动相：甲醇+水=75+25
流速：0.7mL／min
柱温：30℃
检测波长：224nm
进样量：10μl
1.4 标准溶液的配置
双酚A标准储备液：称取适量的双酚A标准物质，用甲醇稀释，配置成浓度为1000μg/ml的双酚A储备液。
双酚A标准供试液：使用时用3%乙酸溶液稀释成浓度为1.0μg/ml的溶液，色谱图如图1所示。 


1.5样品前处理
称取5g的样品，将其剪成5×5mm的小碎片，置于250ml的三角烧瓶中，加入100mL的甲醇，50℃下超声提取2小时，过滤至250mL鸡心瓶，旋转蒸发至干，用5mL水漩涡洗脱，待净化。
1.6 样品浓缩和净化
SPE固相萃取小柱：C18E,500mg/3mL(part#：WSS4618E0350)
活化、平衡：10 mL甲醇，10 mL水依次过柱；
上样：在水到达小柱上层筛板时，加入待净化液；
淋洗：6 mL水合10 mL 30%甲醇水溶液依次淋洗小柱，流出液弃去；
洗脱：6 mL 50%乙腈水溶液洗脱，收集洗脱液。
洗脱液50℃下氮气至近干，1 mL流动相溶解，进样分析。
*可不过膜，过膜的话请选择玻璃纤维膜，如果使用Nylon 或其它有机滤膜，会导致目标化合物被吸附。 

2 结果与讨论
2.1 色谱条件优化选择
2.1.1流动相比例的选择
由上述参考文献可初步将流动相定为甲醇与超纯水，从实验结果可知：当只针对标准物质的测试时，使用纯甲醇做流动相对双酚A的响应效果最好，在检测样品含量时，我们可发现，以纯甲醇作为流动相将会产生大量的溶剂峰，影响到样品检测结果，因此我们适当的添加一定比例的水，降低流动相的洗脱能力，以避开溶剂峰的影响。由于3%的乙酸溶剂峰较大，因此将甲醇：水=75：25的流动相作为最佳流动相，其中可根据不同样品的性质我们也可灵活利用色谱条件。
2.1.2 波长的选择
经过二级阵列管检测器全波段扫描可知：双酚A在200nm至400nm波长范围内有三个最大吸收峰，分别为200nm、224nm、280nm，由于考虑到流动相的影响，200nm在流动相甲醇的截至波长（210nm）内因此不予考虑，而双酚A在224nm处的响应度比在280nm处的响应度高，因此将最佳波长选定为224nm。
2.2 阴性和系统适用性试验
不加入样品，加入试剂，按样品处理方法进行测定，在组分相应保留时间处没有吸收；适当的更改色谱条件中的流速、流动相比例、色谱柱品牌检测，均能符合相应的参数条件；其中取标样10μl进样检测，双酚A的理论板数大于7000。
2.3 精密度和重现性实验
取双酚A标准供试液，联系进样6针，每次10ul，进行测定，考察该组分精密度及重现性的相对标准偏差，精密度相对标准偏差为0.49%，重现性相对标准偏差为0.095%。
2.4 线性关系和检测限
在本方法确定的色谱条件下，双酚A浓度为0.1008ug/ml-1008.2ug/ml范围内，线性关系良好，其峰面积-浓度的线性方程为：y = 10.537x+14.293，相关系数R2=0.9999；在 S/N =3的条件下，本方法最低检测限为0.038mg/kg。
2.5 回收率试验
采用在实际样品中加入不同添加水平的双酚A标准溶液的方式进行回收率实验，按前处理方法处理后分析，采用外标法定量，每个添加水平单独测3次，实验结果表明，其平均回收率为85.78%～98.12%，RSD为397％～6.63％。
2.6 实际样品的测试
采用此方法对部分食品接触材料中双酚A含量的检测结果如下如表1所示。