固相萃取-液相色谱法测定奶粉中香兰素

艾杰尔飞诺美

2024/10/15 16:23

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【飞诺美色谱】

前言

香兰素亦称香草素、香草醛等，学名为 3-甲氧基-4-羟基苯甲醛，根据欧盟专家委员会 2000 年 2 月 24 日报道，大剂量可导致头痛，恶心，呕吐，呼吸困难，甚至损伤肝肾功能。

中华人民共和国国家标准《食品添加剂使用标准》（GB2760-2014）规定，较大婴儿和幼儿配方食品中香兰素最大使用量为 5 mg/100 mL，其中 100mL 以即食食品计，生产企业应按照冲调比例折算成配方食品中的使用量；婴幼儿谷类辅助食品中可以使用香兰素，最大使用量为7 mg/100 g，其中 100 g 以即食食品计；凡使用范围涵盖 0 至 6 个月婴幼儿配方食品不得添加任何食用香料。

国家标准中只规定了限值，未有检测方法。本实验使用 Cleanert® PAX 固相萃取小柱和 Venusil® XBP C18（ L）液相色谱柱，建立了一种奶粉中香兰素的检测方法，经实验验证，该方法简单、快速、准确度高。

实验方法

实验试剂和耗材

水（pH 为4.5）；取 100 mL 水，用乙酸调节 pH 至 4.5；

2%乙酸铅溶液：称取乙酸铅 2 g，加水稀释并定容至 100 mL；

5%氨水溶液：取氨水溶液 5 mL，加水稀释并定容至 100 mL； 5%酸化甲醇：取甲酸 5 mL，加甲醇 95 mL 混匀；

香兰素储备液（1mg/mL）：准确称取香兰素标准品 10 mg，加水稀释并定容至 10 mL；

固相萃取柱： Cleanert® PAX（规格为 60 mg/3 ml），使用前分别用 3 mL 甲醇和 3 mL 水活化；

液相色谱柱： Venusil® XBP C18(L)（规格为 5 µm 150 Å , 4.6 × 150 mm）

针式过滤器：亲水型 PTFE（ 0.45 µm ， 13 mm）。

仪器及设备

高效液相色谱仪；

12 位固相萃取装置。

试样处理

准确称取奶粉试样 1 g 于 50 mL 离心管中，加入 pH 为 4.5 的水溶液 5 mL，混匀超声提取 5 min，加 2%乙酸铅溶液 2 mL，混匀后静置 2 min ，8000 r/min 离心 10 min；取上清液用 5%氨水溶液调节 pH 至中性；将上清液全部加样至活化好的 Cleanert® PAX 小柱，然后分别用 3 mL 5%氨水溶液和 3 mL 甲醇淋洗小柱，弃去淋洗液；用 3 mL 5%酸化甲醇洗脱（以上固相萃取操作通过 Qdaura® 卓睿全自动固相萃取仪完成），收集洗脱液于 30℃下氮气吹干，用 1 mL 流动相重新溶解，过滤，待测。

液相色谱条件

色谱柱： Venusil® XBP C18(L) ，5 µm 150 Å , 4.6 × 150 mm；

流动相： A（ 0.02 mol/L 的磷酸二氢钾溶液，磷酸调节 pH 为 4.0）︰ B（乙腈）= 90 ︰ 10；

流速： 1.0 mL/min；进样量： 20 µL；波长： 276 nm；柱温： 30℃。

实验结果

线性关系和检出限

量取一定量香兰素标准储备液，分别用水稀释至 1 µg/mL 、5 µg/mL 、 10 µg/mL 、25 µg/mL 和 50 µg/mL，按照检测条件依次进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合标准曲线方程，结果见表 1：