【飞诺美色谱】花生油中 8 种抗氧化剂的分析方法

艾杰尔飞诺美

2024/06/17 13:37

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花生油中 8 种抗氧化剂的分析方法
AF10133
应用及技术服务部

摘要：本实验采用固相萃取结合高效液相色谱的方法，建立了花生油中 8 种抗氧化剂（PG、TBHQ、

NDGA、BHA、Ionox-100、OG、BHT、DG）的检测方法。样品经乙腈提取，Cleanert S C18-N 固相萃取柱净化，Venusil XBP C18（L）色谱柱（4.6 × 250 mm，5 µm，150 Å）分离，0.5%甲酸水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱，外标法进行定量。结果表明，8 种抗氧化剂添加量分别为 PG: 171
mg/kg、TBHQ: 135 mg/kg、NDGA: 121 mg/kg、BHA: 213 mg/kg、Ionox-100: 141 mg/kg、OG: 95 mg/kg、BHT: 151 mg/kg、DG: 135 mg/kg 时，回收率在 89%~106%之间，变异系数小于 6.0%，能够满足检测要求。
关键词:抗氧化剂；Venusil XBP C18（L）色谱柱；Cleanert S C18-N
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前言
食品抗氧化剂是能阻止或延缓食品氧化变质、提高食品稳定性和延长贮存期的食品添加剂。氧化反应不仅会使食品中的油脂变质，而且还会使食品退色、变色和破坏维生素等，从而降低食品的感官质量和营养价值，甚至产生有害物质，引起食物中毒。
由于合成抗氧化剂化学性质稳定，价格比较优惠且有较好的效果，在预防脂质氧化的方法中，往往被优先考虑，一般使用的合成抗氧化剂有 BHA、BHT、TBHQ 等。
然而由于这些抗氧化剂不是食品成分之一，而且在食品工业中存在很多违规操作，抗氧化剂的添加往往超出规定的标准，越来越多的研究表明：人工合成的抗氧化剂有一定的毒副作用，有害人们的身心健康，因此对食品中合成抗氧化剂的测定显得尤为重要。
本实验建立了高效液相色谱法检测花生油中 8 种抗氧化剂的方法。
实验部分
仪器、试剂与材料主要仪器设备

高效液相色谱仪（紫外检测器）；博纳艾杰尔 12 位负压 SPE 装置。
试剂材料

乙腈、甲醇为色谱纯；实验用水为超纯水，8种抗氧化剂标准品及化学式，CAS号见表1；
表1.食品中8种抗氧化剂中文与英文名称、CAS号

序号	中文名称	英文名称	英文简称	CAS 号
1	没食子酸丙酯	Propyl gallate	PG	121-79-9
2	叔丁基对苯二酚	Tert-butylhydroquinone	TBHQ	1948-33-0
3	去甲二氢愈创木酸	Nordihydroguaiaretic acid	NDGA	500-38-9
4	叔丁基对羟基茴香醚	Butylhydroxyanisole	BHA	25013-16-5
5	2,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚	2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol	Ionox-100	489-01-0
6	没食子酸辛酯	Octyl gallate	OG	1034-01-1
7	2,6-二叔丁基对甲基苯酚	Butylated hydroxytoluene	BHT	128-37-0
8	没食子酸十二酯	Dodecyl gallate	DG	1166-52-5

一次性无菌注射器；Nylon 针式过滤器 (0.22 µm，直径 13 mm) ；
Cleanert S C18-N 固相萃取柱：2000 mg/12 mL
样品制备样品提取
称 1 g 样品至 50 mL 离心管中，加 10 mL 乙腈，震荡 2 min，超声 10 min，3000 r/min
离心 5 min，收集上清液至鸡心瓶中，再加 10 mL 乙腈萃取，震荡 2 min，超声 1 min，
3000 r/min 离心 5 min 合并上清液。样品净化
先将小柱用 5 mL 甲醇，5 mL 乙腈活化平衡，然后将待净化液上 SPE 柱，收集流出液，再用 10 mL 乙腈︰甲醇=2︰1（V/V）进行洗脱，并收集洗脱液，40℃蒸干，用1 mL 乙腈溶解残留物，过 0.22 µm Nylon 针式过滤器后待测。
以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。
实验条件

液相条件
色谱柱：Venusil XBP C18（L），5 µm，150 Å，4.6 × 250 mm
流动相：A: 0.5%甲酸水溶液；B:甲醇；流速：1 mL/min
柱温：35℃ 进样量：5 µL
检测波长：280 nm
流动相梯度见表2

表2.流动相梯度

时间/min	A/%	B/%
0	40	60
15	30	70
25	0	100
30	0	100
31	40	60
35	40	60

结果与讨论

实验结果
由表 3 可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测食品中 8 种抗氧化剂，花生油基质加标回收率 89% ~ 106%，变异系数小于 6.0%，能够满足检测标准要求。

表 3. 花生油中 8 种抗氧化剂加标回收实验结果

物质名称	保留时间/min	添加水平/mg/kg	回收率 /%	CV /%
PG	4.430	171	93.8	4.3
TBHQ	6.058	135	100.6	2.5
NDGA	11.447	121	95.5	5.8
BHA	13.078	213	105.0	3.0
Ionox-100	17.806	141	105.2	2.8
OG	20.920	95	93.5	4.2
BHT	26.506	151	101.3	2.7
DG	26.804	135	89.5	4.3

图1. 8种抗氧化剂标准溶液液相色谱图（标准浓度：PG: 171 µg/mL、TBHQ: 135 µg/mL、NDGA: 121
µg/mL、BHA: 213 µg/mL、Ionox-100: 141 µg/mL、OG: 95 µg/mL、BHT: 151 µg/mL、DG: 135 µg/mL）

图3花生油基质加标液相色谱图（加标浓度：PG: 171 mg/kg、TBHQ: 135 mg/kg、NDGA: 121 mg/kg、

BHA: 213 mg/kg、Ionox-100: 141 mg/kg、OG: 95 mg/kg、BHT: 151 mg/kg、DG: 135 mg/kg）

图4. 乙腈提取后氮气吹干油样残留（左：1 g油样；右：净化后油样残留）

结论
本实验建立了花生油中 8 种抗氧化剂的检测方法，并结合高效液相色谱对花生油
中 8 种抗氧化剂含量进行测定。对加标量为 PG: 171 mg/kg、TBHQ: 135 mg/kg、NDGA:
121 mg/kg、BHA: 213 mg/kg、Ionox-100: 141 mg/kg、OG: 95 mg/kg、BHT: 151 mg/kg、DG: 135 mg/kg 的花生油样品，回收率在 89% ~ 106%之间，变异系数小于 6.0%，符合实验要求。

附：相关产品

产品名称	规格描述	包装数量	订货号
Venusil XBP C18(L)	5 µm，150 Å，4.6 × 250 mm	1 支	VX952505-L
Cleanert S C18-N	2000 mg/12 mL	20 支/包	S18200012N
Qdaura®卓睿全自动固相萃取系统	4 通道	1 台	SPE-40
15 位氮吹仪	15 位	1 台	NV15-M
保护柱套	适用于4.6 × 10 mm 和2.1× 10 mm	1 支	SH-100
直联式保护柱芯	5 µm，150 Å；4.6 × 10 mm	4 支/包	VX950105-LS
1.5 mL 样品瓶	短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm	100/pk	1109-0519
1.5 mL 样品瓶盖	9 mm 中心孔蓝盖，红色橡胶/米色 PTFE 隔垫45°Shore A; 1.0 mm	100/pk	0915-1819
Nylon 针式过滤器	单膜，13 mm，0.22 µm	200/pk	AS021320
一次性注射器	2 mL 无针头	100 支/包	LZSQ-2ML