Keywords: Catecholamine, LC-MS/MS, Solid-phase extraction,Plasma前言嗜铬细胞瘤及副神经节瘤（PPGL）是一种能够引起内分泌性高血压的少见神经内分泌肿瘤，在普通高血压门诊中患病率为0.2% - 0.6%，在儿童高血压患者中为1.7%。PPGL患者的主要临床表现为儿茶酚胺（catecholamine，CA）类物质分泌增多，进一步导致高血压及心、脑、肾血管并发症和代谢性改变，在经准确诊断后，可通过手术治疗，属于一种可治愈的继发性高血压。CA是一类含有儿茶酚和胺基的神经类物质，是人体内重要的神经递质和激素，包括肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)和多巴胺（DA）。CA在儿茶酚-O-甲基转移酶（COMT）的作用下生成变肾上腺素类物质（metanephrines，MNs），主要包括甲氧基肾上腺素(MN)、甲氧基去甲肾上腺素(NMN)和3-甲氧酪胺(3-MT)。在《嗜铬细胞瘤和副神经节瘤诊断治疗的专家共识（2020）》中，推荐：诊断PPGL的实验室检查首选血浆游离或尿液甲氧基肾上腺素(MN)、甲氧基去甲肾上腺素(NMN) 浓度测定；建议：可同时检测血或尿NE、E、DA及其他代谢产物3-MT等浓度以帮助诊断。并且，鉴于质谱法灵敏度高、专属性强、稳定性好等特点，专家共识中推荐首选使用LC-MS/MS法测定MNs。本方法基于SCIEX 液相色谱串联质谱系统，采用同位素内标校正法，建立了一次处理，同时准确检测血浆中6种儿茶酚胺类物质的定量方法。各化合物信息如下。RUO-MKT-02-13152-ZH-A p 1The Power of PrecisionFor Research Use Only. Not for use in Diagnostic Procedures.Clinical ResearchSCIEX液相色谱串联质谱法测定血浆中6种儿茶酚胺类物质Determination of 6 Catecholamines in Human PlasmaSamples by SCIEX Liquid Chromatography-Tandem MassSpectrometry张元媛，胡凤梅，黄超，崔敬文，李国庆Zhang Yuanyuan, Hu Fengmei, Huang Chao, Cui Jingwen, Li Guoqing实验部分样品前处理本实验采用SPE固相萃取法对血浆中6种儿茶酚胺类进行处理。色谱条件色谱柱：Kinetex F5（2.6 μm, 3.0×100 mm）；流动相：A含甲酸的水溶液，B含甲酸的甲醇，梯度洗脱；流速：0.4 mL/min；柱温：40 ℃；质谱条件电离方式：电喷雾离子源，正离子；检测方式：多反应监测 (MRM)；中文名英文名CAS编号分子式结果与讨论在本实验条件下，各化合物得到有效分离，典型色谱图如图1。标准曲线以水为替代基质，制作标准工作曲线。各待测物典型标准曲线结果如下表。加标回收率取混合人血浆样本，分为4组，向其中三组加入不同浓度的6种儿茶酚胺混合标准溶液，制备低、中、高三组血浆加标样本，以随行标曲测定4组血浆样本中各化合物浓度。按下述公式计算加标回收率。加标回收率=(实测加标后样本浓度-实测加标前样本浓度)/理论加标浓度各化合物在各自加标水平下加标回收率结果如下图所示。各待测物的加标回收率在92.2%-112.1%之间，符合相关要求。*单位：ng/ml；本实验条件下，统一配置标准曲线范围如表所示，具体曲线范围可根据真实需求调整。*单位：ng/ml；本实验条件下，统一配置标准曲线范围如表所示，具体曲线范围可根据真实需求调整。加标回收率取混合人血浆样本，分为4 组，向其中三组加入不同浓度的6 种儿茶酚胺混合标液，制备低、中、高三组血浆加标样本，以随行标曲测定4 组血浆样本中各化合物浓按下述公式计算加标回收率。加标回收率=(实测加标后样本浓度-实测加标前样本浓度)/理论加标浓度各化合物在各自加标水平下加标回收率结果如下图所示。各待测物的加标回收92.2%-112.1%之间，符合相关要求。图2 6 种儿茶酚胺类物质低、中、高浓度水平加标回收率精密度取混合人血浆样本，分为3 组，向其中加入不同浓度的6 种儿茶酚胺混合标准溶制备低、中、高三组血浆加标样本（QC）。各浓度4 样本分析，连续测定3 天。根日的标准曲线，计算QC 样本浓度。根据QC 的RSD%对方法的日内与日间精密度进察。结果下图所示。各化合物的日内和日间精密度分别为0.7-6.0%和2.9-9.4%，符合0.0%精密度取混合人血浆样本，分为3组，向其中加入不同浓度的6种儿茶酚胺混合标准溶液，制备低、中、高三组血浆加标样本（QC）。各浓度4样本分析，连续测定3天。根据当日的标准曲线，计算QC样本浓度。根据QC的RSD%对方法的日内与日间精密度进行考察。结果下图所示。各化合物的日内和日间精密度分别为0.7-6.0%和2.9-9.4%，符合相关相关要求。结果与讨论在本实验条件下，各化合物得到有效分离，典型色谱图如图1。总结本实验在SCIEX 液质连用平台上，搭建了一针进样，6 种儿茶酚胺类化合物同时定量检测方法。实验采用SPE 法进行样本前处理，同位素内标校准，对血浆中6 种儿茶酚胺类化合物定量分析。方法线性良好，加标回收，日内、日间精密度满足相关要求。可用于临床实际样本的检测。

前言类固醇激素是一类脂溶性小分子激素，是由胆固醇经一系列酶催化而来，可分为肾上腺皮质激素和性激素两类，在维持机体正常内分泌，调节性功能、机体发展、免疫调节及生育控制方面有明确的作用。人体内类固醇激素的升高或者降低与一些临床疾病，如，先天肾上腺增生、多囊卵巢综合症、内分泌紊乱、肾上腺皮质功能及（3,17和21）羟化酶缺乏症等息息相关。各个类固醇激素作为代谢网络中的节点相互影响，如能详尽表征代谢网络上下游中各激素的含量变化情况，对临床疾病的确诊、机体内分泌状态的监控等具有种重要意义。临床传统方法采用放射免疫或ELISA试剂盒方法进行激素检测，可能存在抗原抗体假阳性干扰，低浓度水平激素测定不准确等问题。且临床对于不同激素检测方式不同，多激素全面检测所需血液量较大，增加患者负担。液质联用法具有特异性强，检测灵敏度高，适合高通量测定等优点，因此，建立一种基于液质法的同时准确测定多种类固醇激素的分析方法，对于临床相关疾病的诊断具有重要的指导意义。本方法基于SCIEX 液相色谱串联质谱系统，采用同位素内标校正法，建立了一次分析，同时准确检测血清中20种类固醇激素的定量方法。20种类固醇激素相关信息如下。RUO-MKT-02-10571-ZH-ASCIEX液相色谱串联质谱法测定血清中20种类固醇激素Determination of 20 Steroid Hormones in Human Serum Samples bySCIEX Liquid Chromatography-Tandem Mass SpectrometryThe Power of Precision实验部分样品前处理本实验采用沉淀蛋白结合SPE固相萃取法对血清中20种激素进行处理，具体步骤如下。提取：准确量取200 μL样品于1.5 mL塑料离心管中，加入20 μL同位素内标混合工作溶，200 μL甲醇，涡旋1 min，加入200 μL水，涡旋1 min，10000 rpm离心5 min，取上层溶液待用。净化：取SPE柱（Cleanert PEP 96 Well Microplates：2 mg），依次用200 μL甲醇活化，200 μL水平衡。取提取后上清液350 μL，加载至SPE柱，弃去滤液；依次用200 μL 10 %乙腈水溶液和200 μL正己烷进行淋洗，弃去淋洗液；加入30 μL洗脱溶剂进行洗脱，收集洗脱液，用10 %乙腈水溶液稀释至200 μL，混匀待测。色谱条件色谱柱：Kinetex® C18（2.6 μm，3.0×100 mm）；流动相：A为0.5 mM氟化铵水溶液B为甲醇，洗脱流程如表1；流速：0.6 mL/min；柱温：40 ℃；进样体积：20 μL。辅助气 (Gas2): 60 psi；气帘气 (Gurtain Gas): 35 psi;电喷雾电压：5500V (+) / -4500V (-)；对应MRM通道及参数见表2，表3。时间（min） A(%) B(%)0 50 504 40 606.5 25 757.2 10 9010 10 9010.2 50 5012 50 50表1. 洗脱梯度。质谱条件电离方式：电喷雾离子源，正负离子同时采集；检测方式：分时间窗口 (schedule)，多反应监测 (MRM)；离子源温度 (TEM): 600℃;雾化气 (Gas1): 60 psi;表2. 待测组分和内标物质的质谱参数（正离子模式）。RUO-MKT-02-10571-ZH-A p 3The Power of Precision结果与讨论各化合物在各自出峰位置峰形对称，响应良好。在20种激素中，17α羟孕酮和21羟基孕酮；11-脱氧皮质醇，21-脱氧皮质醇和皮质酮为两组同分异构体，在本方法条件下，同分异构体间可以实现基线分离。典型色谱图如图1。结果与讨论各化合物在各自出峰位置峰形对称，响应良好。在20 种激素中，17α 羟孕酮和21 羟基孕酮；11-脱氧皮质醇，21-脱氧皮质醇和皮质酮为两组同分异构体，在本方法条件下，同分异构体间可以实现基线分离。典型色谱图如图1。图1 20 种激素典型色谱图标准曲线以PBS 为替代基质，制作标准工作曲线。各待测物典型标准曲线结果如下表。负离子色谱图正离子色谱图标准曲线以PBS为替代基质，制作标准工作曲线。各待测物典型标准曲线结果如下表。总结本实验在SCIEX 液质连用平台上，搭建了一针进样，正负离子同时采集的ScheduledMRM™ 方法，实现20 种激素的同步检测。实验采用SPE 法进行样本前处理，同位素内标校准，对血清中20 种激素进行定量。方法线性良好，加标回收，精密度满足相关要求。可用于临床实际样本的检测。

血浆中多肽药物的测定应用及技术服务部概述多肽是由多个氨基酸通过肽键连接而形成的一类化合物，通常由10~100个氨基酸分子组成，其连接方式与蛋白质相同，相对分子质量低于10000。多肽普遍存在于生物体内，迄今在生物体内发现的多肽已达数万种，其广泛参与和调节机体内各系统、器官、组织和细胞的功能活动，在生命活动中发挥重要作用。关键词多肽；Peptide-1-MW；Luna Omega Palor C18；LC-MS/MS化合物信息实验部分3.1仪器、试剂与材料3.1.1主要仪器设备液相色谱串联质谱仪(AB SCIEX Triple QuadTM5500)，配有电喷雾离子源(ESI)；孔正压装置(Agela Cleanert M96)；氮吹浓缩仪(Agela Cleanert V96)。3.1.2试剂材料96孔板：Peptide-1-MW屈臣氏蒸馏水，甲醇、甲酸、乙酸铵、乙腈、氨水均为色谱级。3.1.3样品基质EDTA抗凝大牛血浆3.2样品前处理方法预处理：200 μL血浆加入200 μL 2%氨水水溶液，涡旋，待净化；活化：96孔板依次使用 200 μL甲醇、200 μL水活化；上样：加载预处理后的血浆至活化后微孔板；淋洗：依次使用500 μL水、200 μL水淋洗微孔板；洗脱：用100 μL洗脱液（2%甲酸 乙醇：水=3:1）洗脱2次，涡旋混合；氮干复溶：37 ℃氮气干燥20 min后，加入150 μL水涡旋混合，待检测。3.3仪器检测条件3.3.1色谱条件色谱柱： Luna Omega Polar C18（2.1×50 mm, 1.6 μm, 100 Å）；P/N: 00B-4748-AN流动相A相：0.1%甲酸5 mM乙酸铵水溶液；流动相B相：0.1%甲酸乙腈溶液；流 速：0.3 mL/min；柱 温：40 ℃；进样量：10 μL；梯度程序见表2：3.3.2质谱条件离子源类型：电喷雾离子源（ESI+）扫描方式：多反应监测正负离子模式（MRM）喷雾针电压：5500 V离子源温度：500 ℃加热器（GS1）：60 psi辅助加热气（GS2）：60 psi气帘气（CUR）：40 psi碰撞气（CAD）：10 psi为获得较好的稳定和灵敏度，各化合物监测离子对的去簇电压（DP）和碰撞电压（CE），目标化合物定量离子对以及内标监测离子对等参数均需经过系统优化。本案例参数仅供参考不具备法律效力。3.4结果与讨论由表4可知，大部分肽类在该模式下的外标法回收率均在80%~120%之内，相对标准偏差RSD小于10%可以满足分析需求。结论本实验建立了血浆中小肽类药物的检测方法，特立帕肽的通常回收率在40%-60%之间，考虑到方法的普适性故选择此进行前处理。

花生油中 8 种抗氧化剂的分析方法AF10133应用及技术服务部摘要：本实验采用固相萃取结合高效液相色谱的方法，建立了花生油中 8 种抗氧化剂（PG、TBHQ、NDGA、BHA、Ionox-100、OG、BHT、DG）的检测方法。样品经乙腈提取，Cleanert S C18-N 固相萃取柱净化，Venusil XBP C18（L）色谱柱（4.6 × 250 mm，5 µm，150 Å）分离，0.5%甲酸水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱，外标法进行定量。结果表明，8 种抗氧化剂添加量分别为 PG: 171mg/kg、TBHQ: 135 mg/kg、NDGA: 121 mg/kg、BHA: 213 mg/kg、Ionox-100: 141 mg/kg、OG: 95 mg/kg、BHT: 151 mg/kg、DG: 135 mg/kg 时，回收率在 89%~106%之间，变异系数小于 6.0%，能够满足检测要求。关键词:抗氧化剂；Venusil XBP C18（L）色谱柱；Cleanert S C18-N0前言食品抗氧化剂是能阻止或延缓食品氧化变质、提高食品稳定性和延长贮存期的食品添加剂。氧化反应不仅会使食品中的油脂变质，而且还会使食品退色、变色和破坏维生素等，从而降低食品的感官质量和营养价值，甚至产生有害物质，引起食物中毒。由于合成抗氧化剂化学性质稳定，价格比较优惠且有较好的效果，在预防脂质氧化的方法中，往往被优先考虑，一般使用的合成抗氧化剂有 BHA、BHT、TBHQ 等。然而由于这些抗氧化剂不是食品成分之一，而且在食品工业中存在很多违规操作， 抗氧化剂的添加往往超出规定的标准，越来越多的研究表明：人工合成的抗氧化剂有一定的毒副作用，有害人们的身心健康，因此对食品中合成抗氧化剂的测定显得尤为重要。本实验建立了高效液相色谱法检测花生油中 8 种抗氧化剂的方法。实验部分仪器、试剂与材料主要仪器设备高效液相色谱仪（紫外检测器）；博纳艾杰尔 12 位负压 SPE 装置。试剂材料乙腈、甲醇为色谱纯；实验用水为超纯水，8种抗氧化剂标准品及化学式，CAS号见表1；表1.食品中8种抗氧化剂中文与英文名称、CAS号序号中文名称英文名称英文简称CAS 号1没食子酸丙酯Propyl gallatePG121-79-92叔丁基对苯二酚Tert-butylhydroquinoneTBHQ1948-33-03去甲二氢愈创木酸Nordihydroguaiaretic acidNDGA500-38-94叔丁基对羟基茴香醚ButylhydroxyanisoleBHA25013-16-552,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenolIonox-100489-01-06没食子酸辛酯Octyl gallateOG1034-01-172,6-二叔丁基对甲基苯酚Butylated hydroxytolueneBHT128-37-08没食子酸十二酯Dodecyl gallateDG1166-52-5一次性无菌注射器；Nylon 针式过滤器 (0.22 µm，直径 13 mm) ；Cleanert S C18-N 固相萃取柱：2000 mg/12 mL样品制备样品提取称 1 g 样品至 50 mL 离心管中，加 10 mL 乙腈，震荡 2 min，超声 10 min，3000 r/min离心 5 min，收集上清液至鸡心瓶中，再加 10 mL 乙腈萃取，震荡 2 min，超声 1 min，3000 r/min 离心 5 min 合并上清液。样品净化先将小柱用 5 mL 甲醇，5 mL 乙腈活化平衡，然后将待净化液上 SPE 柱，收集流出液，再用 10 mL 乙腈︰甲醇=2︰1（V/V）进行洗脱，并收集洗脱液，40℃蒸干，用1 mL 乙腈溶解残留物，过 0.22 µm Nylon 针式过滤器后待测。以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。实验条件液相条件色谱柱：Venusil XBP C18（L），5 µm，150 Å，4.6 × 250 mm流动相：A: 0.5%甲酸水溶液；B:甲醇； 流 速：1 mL/min柱 温：35℃ 进样量：5 µL检测波长：280 nm流动相梯度见表2表2.流动相梯度 时间/minA/%B/%04060153070250100300100314060354060结果与讨论实验结果由表 3 可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测食品中 8 种抗氧化剂，花生油基质加标回收率 89% ~ 106%，变异系数小于 6.0%，能够满足检测标准要求。表 3. 花生油中 8 种抗氧化剂加标回收实验结果物质名称保留时间/min添加水平/mg/kg回收率 /%CV /%PG4.43017193.84.3TBHQ6.058135100.62.5NDGA11.44712195.55.8BHA13.078213105.03.0Ionox-10017.806141105.22.8OG20.9209593.54.2BHT26.506151101.32.7DG26.80413589.54.3图1. 8种抗氧化剂标准溶液液相色谱图（标准浓度：PG: 171 µg/mL、TBHQ: 135 µg/mL、NDGA: 121µg/mL、BHA: 213 µg/mL、Ionox-100: 141 µg/mL、OG: 95 µg/mL、BHT: 151 µg/mL、DG: 135 µg/mL）图3花生油基质加标液相色谱图（加标浓度：PG: 171 mg/kg、TBHQ: 135 mg/kg、NDGA: 121 mg/kg、BHA: 213 mg/kg、Ionox-100: 141 mg/kg、OG: 95 mg/kg、BHT: 151 mg/kg、DG: 135 mg/kg）图4. 乙腈提取后氮气吹干油样残留（左：1 g油样；右：净化后油样残留）结论本实验建立了花生油中 8 种抗氧化剂的检测方法，并结合高效液相色谱对花生油中 8 种抗氧化剂含量进行测定。对加标量为 PG: 171 mg/kg、TBHQ: 135 mg/kg、NDGA:121 mg/kg、BHA: 213 mg/kg、Ionox-100: 141 mg/kg、OG: 95 mg/kg、BHT: 151 mg/kg、DG: 135 mg/kg 的花生油样品，回收率在 89% ~ 106%之间，变异系数小于 6.0%，符合实验要求。附：相关产品产品名称规格描述包装数量订货号Venusil XBP C18(L)5 µm，150 Å，4.6 × 250 mm1 支VX952505-LCleanert S C18-N2000 mg/12 mL20 支/包S18200012NQdaura®卓睿全自动固相萃取系统4 通道1 台SPE-4015 位氮吹仪15 位1 台NV15-M保护柱套适用于4.6 × 10 mm 和2.1× 10 mm1 支SH-100直联式保护柱芯5 µm，150 Å；4.6 × 10 mm4 支/包VX950105-LS1.5 mL 样品瓶短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm100/pk1109-05191.5 mL 样品瓶盖9 mm 中心孔蓝盖，红色橡胶/米色 PTFE 隔垫45°Shore A; 1.0 mm100/pk0915-1819Nylon 针式过滤器单膜，13 mm，0.22 µm200/pkAS021320一次性注射器2 mL 无针头100 支/包LZSQ-2ML

基于 Cleanert SLE 高通量萃取血浆中维生素 A 与维生素 E— 背景维生素 A 对人体多种器官的发育以及人体正常生理机能的维护有不可或缺的作用，然而过量摄入维生素 A 会引发毒副作用；维生素 E 作为一种抗氧化剂在体内的主要功能是保护细胞的生物膜结构，最近发现维生素 E 也能调控基因表达，维生素 E 缺乏症虽少见，却与新生儿发育不良和遗传代谢病相关。因此，准确测定人体内维生素 A 与维生素 E 具有重要意义。维生素 A 与维生素 E 由于化学性质活泼，易被氧化，对这类物质的准确定量具有很大的挑战。本应用案例介绍一种液相色谱-串联质谱的方法，采用 Cleanert SLE 96 孔板净化血浆样品，从血浆样品中萃取富集维生素 A（视黄醇，VA）、α-生育酚（α-VE）和 γ-生育酚（γ-VE），实验方法具有良好的稳定性及可靠性，可为 VA、VE 临床研究提供一种解决方案。二 目标物信息三 材料及仪器Cleanert SLE 96 孔板（200mg/well），Cleanert M96 生物样品前处理仪，Cleanert V96 样品氮吹浓缩仪，96 孔收集板，Bonshell C18（2.1*100 mm, 2.7 μm），以上产品均为天津博纳艾杰尔科技有限公司产品；LC-MS/MS, API 4000+（SCIEX）；VA、α-VE、γ-VE、d6-α-VE、 d4-γ-VE（以上 5 种标准品购自 altascientific）；d6-VA（购自 BUCHEM BV）；甲醇；甲酸；水；异辛烷；异丙醇；2, 6-二叔丁基对甲酚。四 样品处理方法4.1 样品预处理由于 VA 与VE 稳定性差，为防止被氧化，在实验中需要加入抗氧化剂，所用抗氧化剂为 2,6-二叔丁基对甲酚（BHT）。取 100 μL 血浆至洁净样品瓶中，加入内标溶液，再加入 50 μL 异丙醇和 50 μL 水溶液， 涡旋振荡混匀。4.2 SLE 过程上样：将预混合好的溶液全部上样，静置 5 min；洗脱：2 mL 异辛烷/异丙醇 (9/1，含 1 g/L BHT)洗脱，每次加入 500 μL，分四次洗脱， 合并洗脱液；最后一步洗脱结束，将 Cleanert SLE 与收集板整体放到Cleanert M96 生物样品前处理仪上，开启压力至 0.02 MPa，约 30 s，完全收集洗脱液。将洗脱液在室温下用 Cleanert V96 样品氮吹浓缩仪进行温和氮吹干，再使用 500μL 0.1%甲酸甲醇（含 1 g/L BHT）复溶，进样检测。五 仪器检测条件5.1 HPLC 条件色谱柱：Bonshell C18（2.1*100 mm, 2.7 μm） 流速：200 μL/min柱温：30 ℃进样量：5 μL流动相条件：100%有机相（0.1%甲酸甲醇）等度分离 6min5.2 质谱条件扫描模式：电喷雾电离正模式 采集模式：多反应监测（MRM）表 1 参数信息六 结果6.1 线性范围与灵敏度根据目标物在人体内的含量范围确定标准曲线浓度范围，试验中使用不含目标物的血浆样品配制 7 个不同浓度的校准曲线点，VA 的浓度分别为：0.05、0.15、0.3、0.5、0.8、1、5 μg/mL；α-VE 的浓度分别为：1、2、4、8、10、20、25 μg/mL；γ-VE 的浓度分别为：0.2、0.5、1、1.5、3、4.5、8 μg/mL；所得样品采用上述样品前处理方法净化样品并进行检测， 获得结果见表 2。表 2 线性范围及灵敏度化合物回归方程相关系数（r2）方法定量限 LOQ(μg/mL)VAy = 1.3073x + 0.52420.99630.012α-VEy = 1.5237x + 0.12410.99140.022γ-VEy = 2.744x + 0.04250.99790.0346.2 方法精密度与准确度为考察方法精密度与准确度，取低、中、高三个浓度的样本，每个浓度平行处理 6 个样，获得数据见表 3.表 3 精密度与准确度6.3 色谱图将经Cleanert SLE 净化的样品按上述 LC-MS/MS 测试条件进行测试，获得谱图见图 4-6.血样中大量存在的磷脂是造成液质联用基质效应的主要原因，为考察 Cleanert SLE 技术去除磷脂的能力，特取磷脂两对特征离子对同时进行考察：496/184，524/184，获得谱图见图 7.结论本应用介绍了一种简单、高效的样品前处理方法，通过Cleanert SLE 96 孔板可高通量净化血样并萃取富集脂溶性维生素 A 与维生素 E，本实验方法易操作且稳定，可在临床研究及药物代谢领域替代耗时、低效的液液萃取技术。八 订货信息表产品名称规格/包装订货号Cleanert SLE 96 孔板96 孔板，200mg/wellHC2002-9WCleanert M96 生物样品前处理仪与 96 孔板匹配SPE-M96Cleanert V96 样品氮吹浓缩仪与 96 孔板匹配NV-96G96 孔收集板2mL/well，与 96 孔板匹配96SP2036-YBonshell C182.1*100mm，2.7μmSC921002-0甲醇LC-MS 级, 4*2.5LLC230水LC-MS 级，4*2.5L/箱LC365

LC/MS/MS 检测血清中类固醇激素— 背景类固醇激素又称为甾体激素，是内分泌细胞分泌的高效能生物化学物质。它们在维持生命、调节机体物质代谢、促进性器官发育和维持生育等方面起着重要作用。类固醇激素在体内的含量较低，对其准确定量具有重要意义。本实验采用 Cleanert® PEP96 微孔板对血清样品进行净化，建立了血清中类固醇激素的检测方法，该方法适合高通量样品前处理。二 目标物信息表 1 化合物结构三 材料及仪器Cleanert PEP 96 微孔板(5mg/1mL)；96 孔板正压装置；96 位接收板；Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm，150 Å）；API 4000+。四 样品处理方法4.1 样品预处理100μL 血清样品与 100μL 含有 1%甲酸的甲醇/水溶液混合（50/50，v/v）4.2 SPE 过程活化：依次用 200μL 甲醇、200μL 水活化；上样：将预处理过的血清样品上样至 96 孔板中；淋洗：加入 400μL 甲醇/水(35/65, v/v)用于淋洗样品中的干扰物；洗脱：加入 200μL 1%甲酸甲醇，用 96 位收集板收集洗脱液用于 LC-MS/MS 检测。（将洗脱液氮吹浓缩可获得更低的检测限）五 仪器检测条件5.1 HPLC 条件色谱柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm，150Å） 流速：200μL/min柱温：30℃ 进样量：3μL流动相：0.1%甲酸水/0.1%甲酸乙腈（ 40/ 60，v/v）5.2 质谱条件扫描模式：电喷雾电离正模式 采集模式：多反应监测（MRM）表 2 参数信息六 结果表 3 加标回收率数据加标浓度醛固酮氢化可的松睾酮脱氢表雄酮黄体酮30ppb85.9%87.0%105.5%110.6%97.7%七 结论在临床检验中类固醇激素是一个难点。本实验使用Cleanert® PEP 96 孔板提取血清中的类固醇，加快了检测速度，相较免疫法提高了最低检测浓度，回收率高于 85%，可满足实验室检测相关物质的需要。八 订货信息表产品名称规格/包装订货号Cleanert PEP96 微孔板，5mg/1mLPE00501-MWCleanert M96 生物样品前处理仪与 96 孔板匹配SPE-M96Cleanert V96 氮吹浓缩仪与 96 孔板匹配NV-96G96 位接收板1mL，与 96 孔板匹配96SP1036-YVenusil ASB C182.1*50mm，3μm,150 ÅVS930502-0甲醇HPLC，4*4LAH230-4乙腈HPLC，4*4LAH015-4水LC-MS 级，4*2.5L/箱LC365

方便面中8种抗氧化剂分析方法AF10131 应用及技术服务部摘要：本实验采用固相萃取结合高效液相色谱的方法，建立了方便面中8种抗氧化剂（PG、TBHQ、NDGA、BHA、Ionox-100、OG、BHT、DG）的检测方法。样品经乙腈提取，Cleanert S C18-N固相萃取柱净化，Venusil XBP C18（L）色谱柱（4.6 × 250 mm，5 μm，150 Å）分离，0.5%甲酸水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱，外标法进行定量。结果表明，8种抗氧化剂添加量分别为PG: 129 mg/kg、TBHQ: 121 mg/kg、NDGA: 119 mg/kg、BHA: 240 mg/kg、Ionox-100: 181 mg/kg、OG: 117 mg/kg、BHT: 155 mg/kg、DG: 147 mg/kg时，回收率在80% ~ 100%之间，能够满足检测要求。关键词:抗氧化剂；Venusil XBP C18（L）色谱柱；Cleanert S C18-N前言食品抗氧化剂是能阻止或延缓食品氧化变质、提高食品稳定性和延长贮存期的食品添加剂。氧化反应不仅会使食品中的油脂变质，而且还会使食品退色、变色和破坏维生素等，从而降低食品的感官质量和营养价值，甚至产生有害物质，引起食物中毒。由于合成抗氧化剂化学性质稳定，价格比较优惠且有较好的效果，在预防脂质氧化的方法中，往往被优先考虑，一般使用的合成抗氧化剂有BHA、BHT、TBHQ等。然而由于这些抗氧化剂不是食品成分之一，而且在食品工业中存在很多违规操作，抗氧化剂的添加往往超出规定的标准，越来越多的研究表明：人工合成的抗氧化剂有一定的毒副作用，有害人们的身心健康，因此对食品中合成抗氧化剂的测定显得尤为重要。本实验建立了高效液相色谱法检测食品中8种抗氧化剂的方法。实验部分仪器、试剂与材料主要仪器设备高效液相色谱仪（紫外检测器）；博纳艾杰尔12位负压SPE装置。试剂材料乙腈、甲醇为色谱纯；实验用水为超纯水，8种抗氧化剂标准品及化学式，CAS号见表1；添加图片注释，不超过 140 字（可选）一次性无菌注射器；Nylon针式过滤器(0.22 μm，直径13 mm) ；Cleanert S C18-N固相萃取柱：2000 mg/12 mL样品制备样品提取 称1 g样品至50 mL离心管中，加10 mL乙腈，震荡2 min，超声10 min，3000 r/min离心5 min，收集上清液至鸡心瓶中，再加10 mL乙腈，震荡2 min，超声1 min，3000 r/min离心5 min合并上清液。样品净化先将小柱用5 mL甲醇，5 mL乙腈活化平衡，然后将待净化液上SPE柱，收集流出液，再用10 mL 乙腈：甲醇=2:1（V/V）进行洗脱，并收集洗脱液，40℃蒸干，用1 mL乙腈溶解残留物，过0.22 μm Nylon针式过滤器后待测。以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。实验条件液相条件色谱柱：Venusil XBP C18（L） ，5 μm，150 Å，4.6 × 250 mm流动相：A: 0.5% 甲酸水溶液；B: 甲醇；流速：1 mL/min柱 温：35℃进样量：5 μL检测波长：280 nm流动相梯度见表2：添加图片注释，不超过 140 字（可选）结果与讨论实验结果由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测食品中8种抗氧化剂，方便面基质加标回收率在80% ~ 100%之间，能够满足检测标准要求。添加图片注释，不超过 140 字（可选）（标准浓度：PG: 129 μg/mL、TBHQ:121 μg/mL、NDGA: 119 μg/mL、BHA: 240 μg/mL、Ionox-100: 181 μg/mL、OG: 117 μg/mL、BHT: 155 μg/mL、DG:147 μg/mL）添加图片注释，不超过 140 字（可选）结论本实验建立了方便面中8种抗氧化剂的检测方法，并结合高效液相色谱对方便面中8种抗氧化剂含量进行测定。对于加标量分别为PG : 129 mg/kg、TBHQ:121 mg/kg、NDGA: 119 mg/kg、BHA: 240 mg/kg、Ionox-100: 181 mg/kg、OG: 117 mg/kg、BHT: 155 mg/kg、DG: 147 mg/kg 的方便面样品，8种抗氧化剂回收率在80% ~ 100%之间，符合实验要求。添加图片注释，不超过 140 字（可选）

豆芽中植物生长调节剂的分析方法AF 10142应用及技术服务部摘要：本实验采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱的方法，建立了豆芽中植物生长调节剂的检测方法。样品经酸化乙腈提取，Cleanert MCS固相萃取柱净化，DA-5MS（30 m × 0.25 mm × 0.25 μm）和Venusil MP C18色谱柱（3 μm，100 Å；3.0 × 50 mm）分离，采用水和乙腈为流动相进行洗脱，外标法进行定量。结果表明，样品添加量为0.1 mg/kg和0.004 mg/kg时，回收率在60% ~ 100%之间，能够满足检测要求。关键词：植物生长调节剂；Cleanert MCS固相萃取柱；Venusil MP C18色谱柱前言植物生长调节剂，是用于调节植物生长发育的一类农药，包括人工合成的具有天然植物激素相似作用的化合物和从生物中提取的天然植物激素。是人们在了解天然植物激素的结构和作用机制后，通过人工合成与植物激素具有类似生理和生物学效应的物质，在农业生产上使用，有效调节作物的生育过程，达到稳产增产、改善品质、增强作物抗逆性等目的。按照登记批准标签上标明的使用剂量、时期和方法，使用植物生长调节剂对人体健康一般不会产生危害。如果使用上出现不规范，可能会使作物过快增长，或者使生长受到抑制，甚至死亡。对农产品的品质会有一定影响，并且对人体健康产生危害。实验部分仪器、试剂与材料主要仪器设备AB SCIEX API 4000+液相质谱联用仪试剂材料甲醇、乙腈为色谱纯；实验用水为超纯水；氯化钠、无水硫酸钠、氨水为分析纯；40 mmol/L的盐酸溶液：吸取0.33 mL的盐酸与100 mL纯水混合配成浓度为40 mmol/L的盐酸溶液5%氨化甲醇：量取95 mL甲醇，加入5 mL氨水，混匀农药混合标准工作液：0.1 μg/mL，甲醇溶解；Cleanert MCS：500 mg/6 mL。样品制备样品提取称取试样10 g于50 mL离心管中，加入40 μL甲酸，再加入20 mL乙腈，涡旋混匀1 min，然后超声30 min，超声结束冷却后，8000 r/min离心5 min，上清液转移至新的50 mL离心管中，然后加入3.0 g氯化钠，涡旋混匀1 min，超声10 min，冷却后8000 r/min离心5 min，吸出乙腈层，用无水硫酸钠脱水过滤至40 mL玻璃瓶中，用氮气吹至近干，加入2 mL甲醇超声溶解，待净化。样品净化净化一：取上述待净化液1 mL，加入到QuEChERS净化管中，混匀，静止5 min，进一步混匀，然后8000 r/min离心5 min，取上清液过0.22 μm Nylon针式过滤器后，进行GC-MS分析测定2,4-D-乙酯和2,4-D-丁酯。净化二：另外取1 mL待净化液，加入9 mL 40 mmol/L的盐酸溶液，然后超声混匀，转移至15 mL离心管后，8000 r/min离心5 min，上清液待净化。先将MCS（500 mg/6 mL）小柱依次用5 mL甲醇，5 mL水和5 mL 40 mmol/L的盐酸溶液活化平衡；然后将待净化液转移到小柱内，待样品过柱后，用5 mL水淋洗小柱并抽干；最后用5 mL甲醇洗脱收集，抽干得洗脱液1；再用5 mL 5%氨化甲醇（V/V）洗脱收集，抽干得洗脱液2。洗脱液1、2于45℃氮气吹干，用1 mL 20%乙腈水（V/V）溶解定容，过0.22 μm PTFE-Q针式过滤器后，进行LC-MS/MS检测。洗脱液1用于分析赤霉素、2,4-D、4-氯苯氧乙酸、吲哚乙酸、吲哚丁酸、2-萘乙酸6种植物生长调节剂；洗脱液2用于分析氯吡脲、噻苯隆、6-BA、多效唑4种植物生长调节剂。色谱条件气质检测色谱柱：DA-5MS (30 m × 0.25 mm × 0.25 μm)；进样量：1 μL；进样口：220℃，不分流进样；程序升温：起初80℃保持1min，之后以10℃/min的速度升至280℃，保持21 min载气：氦气，1 mL/min离子源：230℃液质检测液相条件色谱柱：Venusil MP C18，3 μm，100 Å，3.0 × 50 mm流动相：A：水；B：乙腈柱 温：30℃进样量：5 μL质谱条件正离子模式离子源：ESI+；电喷雾电压：5500 V；雾化气压力：45 psi；气帘气压力： 25 psi；辅助气压力：45 psi；离子源温度：500℃；采集方式：多反应监测（MRM）。负离子模式离子源：ESI-；电喷雾电压：-4500 V；雾化气压力：40 psi；气帘气压力： 25 psi；辅助气压力：40 psi；离子源温度：550℃；采集方式：多反应监测(MRM)。梯度洗脱：实验结果由表3可知，采用固相萃取结合气相色谱串联质谱和液相色谱串联质谱的方法检测豆芽中12种植物生长调节剂，加标回收率在60% ~ 100%之间，能够满足检测实验谱图6.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.00500100015002000250030003500400045005000550060006500700075008000850090009500 13.19415.215

饼干中8种抗氧化剂的分析方法AF10132 应用及技术服务部摘要：本实验采用固相萃取结合高效液相色谱的方法，建立了饼干中8种抗氧化剂（PG、TBHQ、NDGA、BHA、Ionox-100、OG、BHT、DG）的检测方法。样品经乙腈提取，Cleanert S C18-N固相萃取柱净化，Venusil XBP C18（L）色谱柱（4.6 × 250 mm，5 μm，150 Å）分离，0.5%甲酸水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱，外标法进行定量。结果表明：8种抗氧化剂添加量分别为PG: 129 mg/kg、TBHQ: 121 mg/kg、NDGA: 119 mg/kg、BHA: 240 mg/kg、Ionox-100: 181 mg/kg、OG: 117 mg/kg、BHT: 155 mg/kg、DG: 147 mg/kg时，回收率在85%~100%之间，能够满足检测要求。关键词:抗氧化剂；Venusil XBP C18（L）色谱柱；Cleanert S C18-N前言食品抗氧化剂是能阻止或延缓食品氧化变质、提高食品稳定性和延长贮存期的食品添加剂。氧化反应不仅会使食品中的油脂变质，而且还会使食品退色、变色和破坏维生素等，从而降低食品的感官质量和营养价值，甚至产生有害物质，引起食物中毒。由于合成抗氧化剂化学性质稳定，价格比较优惠且有较好的效果，在预防脂质氧化的方法中，往往被优先考虑，一般使用的合成抗氧化剂有BHA、BHT、TBHQ等。然而由于这些抗氧化剂不是食品成分之一，而且在食品工业中存在很多违规操作，抗氧化剂的添加往往超出规定的标准，越来越多的研究表明：人工合成的抗氧化剂有一定的毒副作用，有害人们的身心健康，因此对食品中合成抗氧化剂的测定显得尤为重要。本实验建立了高效液相色谱法检测食品中8种抗氧化剂的方法。实验部分仪器、试剂与材料主要仪器设备高效液相色谱仪（紫外检测器）；博纳艾杰尔产品应用案例试剂材料乙腈、甲醇为色谱纯；实验用水为超纯水，8种抗氧化剂标准品及化学式，CAS号见表1；样品制备样品提取 称1 g样品至50 mL离心管中，加10 mL乙腈，震荡2 min，超声10 min，3000 r/min离心5 min，收集上清液至鸡心瓶中，再加10 mL乙腈，震荡2 min，超声1 min，3000 r/min离心5 min合并上清液。样品净化先将小柱用5 mL甲醇，5mL乙腈活化平衡，然后将待净化液上SPE柱，收集流出液，再用10 mL 乙腈：甲醇=2:1（V/V）进行淋洗，并收集洗脱液，40℃蒸干，用1 mL乙腈溶解残留物，过0.22 μm Nylon针式过滤器后待测。以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。实验条件液相条件色谱柱：Venusil XBP C18（L），5 μm，150 Å，4.6 × 250 mm流动相：A: 0.5%甲酸水溶液；B: 甲醇；流速：1 mL/min柱 温：35℃进样量：5 μL检测波长：280 nm流动相梯度见表2：结果与讨论实验结果由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测食品中8种抗氧化剂，手动分析时饼干基质加标8种抗氧化剂回收率85%~100%，采用卓睿全自动固相萃取仪SPE-40分析时8种抗氧剂回收率88%~96%，能够满足检测要求。表3.饼干中8种抗氧化剂加标回收实验结果min51015202530mAU050100150200 4.419 5.995 11.171 12.872 17.642 20.700 26.462 26.722（加标浓度：PG: 129mg/kg、TBHQ: 121 mg/kg、NDGA: 119 mg/kg、BHA: 240 mg/kg、Ionox-100: 181 mg/kg、OG: 117 mg/kg、BHT: 155 mg/kg、DG: 147 mg/kg）结论本实验建立了饼干中8种抗氧化剂的检测方法，并结合高效液相色谱对饼干中8种抗氧化剂含量进行测定。对于加标量分别为PG: 129 mg/kg、TBHQ: 121 mg/kg、NDGA: 119 mg/kg、BHA: 240 mg/kg、Ionox-100: 181 mg/kg、OG: 117 mg/kg、BHT: 155 mg/kg、DG: 147 mg/kg 的饼干样品，8种抗氧化剂回收率在85% ~ 100%之间，符合实验要求。

1. 样品制备按 GB/T 8855 抽取菠菜、番茄样品，取可食部分，经缩分后，将其切碎，充分混匀放入食品加工器粉碎，制成待测样，放入分装容器中于 -16℃~ -20℃ 条件下保存，备用。2. 样品提取净化2.1 有机磷农药残留量的测定提取：准确称取 25.0 g 试样放入匀浆机中，加入 50.0mL 乙腈，在匀浆机中高速匀浆 2 min 然后用滤纸过滤，滤液收集到装有 5 g - 7 g 氯化钠的 100 mL 具塞量筒中，收集滤液 40 mL - 50 mL，盖上塞子，剧烈震荡 1 min，在室温下静止 30 min，使乙腈相和水相分层。净化：从具塞量筒中吸取 10.0 mL 乙腈溶液，放入 150mL 烧杯中，将烧杯放在 80℃ 水浴锅上加热，杯内缓缓通入氮气或空气流，蒸发至近干，加入 2.0 mL 丙酮，盖上铝箔，备用。将上述备用液完全转移至 15 mL 刻度离心管中，再用约 3 mL 丙酮分三次冲洗烧杯，并转移至离心管中，最后定容 5.0 mL，在涡旋混合器上混匀，分别移入两个 2 mL 自动进样器样品瓶中，供色谱测定。如定容压后的样品液过于浑浊，应用 0.22 μm 滤器过滤后再进行测定。2.2 有机氯、拟除虫菊酯类农药残留量的测定提取：同上净化及检测：从 100 mL 具塞量筒中吸取 10.00 mL 乙腈溶液，放入 150 mL 烧杯中，将烧杯放在 80℃ 水浴锅上加热，杯内缓缓通入氮气或空气流，蒸发近干，加入 2.0mL 正己烷，盖上铝箔，待净化。将 Florisil 柱置于 Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪中，上述提取液转移至上样管中。设定操作程序如下：5.0 mL 丙酮+正已烷(10+90)、5.0 mL正已烷活化(流速 2-3 mL/min)，加样(流速 1 mL/min)，用10 mL 丙酮+正已烷(10+90)淋洗(流速 2 mL/min)，同时收蔬菜中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯、氨基甲酸酯类等农药多残留检测方法应用编号：MF10003集上样液和淋洗液。取出收集液置于氮吹仪上，在水浴温度50℃条件下，氮吹蒸发至小于5 mL，用正已烷定容至5.0mL，在旋涡混合器上混匀，分别移入两个2 mL 自动进样器样品瓶中，进气相色谱待测。2.3 氨基甲酸酯类农药残留量的测定提取：同上净化：从 100 mL 具塞量筒中吸取 10.0 mL 乙腈溶液，放入 150 mL 烧杯中，将烧杯放在 80℃ 水浴锅上加热，杯内缓缓通入氮气或空气流，蒸发近干加入 2.0 mL 甲醇+二氯甲烷(1+99)溶解残渣。盖上铝箔待净化。将氨基柱和上述提取液置于 Qdaura® 卓睿全自动固相萃取仪中。设定操作程序如下：4 mL 甲醇+二氯甲烷(1+99)活化，加样；5 mL 甲醇+二氯甲烷(1+99)淋洗—收集(以上流速均为 1 mL/min)。取出上述收集液，氮吹仪上，在水浴温度 50℃ 条件下，氮吹蒸发至近干，用甲醇定容至 2.5 mL，旋涡混合器上混匀，滤膜过滤后待测。备注：以上固相萃取过程亦可在 6 位大体积固相萃取装置中完成。3. 结果选用色素含量较少的番茄和较多的油菜做添加回收率实验，添加两个浓度水平分别为 0.1 mg/kg、0.2 mg/kg。每个水平重复三次。结果见表14. 订货指南

食品中八种人工着色剂的测定 HPLC 法应用编号：AF10046人工合成着色剂又称人工合成色素，常以苯、甲苯等为原料，先制备色素中间体，再将一种或两种中间体进行磺化、偶合、缩合和偶氮化等化学反应而制成。《食品中合成着色剂的测定》(GB/T 5009.35-2003)，采用聚酰胺吸附食品中的人工合成着色剂，并用乙醇胺溶液进行洗脱。聚酰胺对合成色素的吸附能力会受到温度的影响，实验时需对样品和淋洗液做加热处理，而且乙醇胺浓缩所需时间过长，此方法不适合大批量样品同时处理，且不易做自动化方法移植。大多数人工合成着色剂均具有苯磺酸钠结构，本实验选用Cleanert® PWAX 混合型弱阴离子交换柱，用以吸附食品中的合成着色剂，选用氨化甲醇洗脱，浓缩时间短，适用于大批量样品的同时检测。2. 样品提取a) 饮料类样品：称取 10 g 样品放入 100 mL 烧杯中，含二氧化碳的样品加热去除二氧化碳；b) 配制酒类：称取 10 g 样品放入 100 mL 小烧杯中，加热去除乙醇；c) 液体调味料：称取 10 g 样品放入 100 mL 小烧杯中，若试样 pH 值偏高，用柠檬酸水溶液调节 pH 至 6 左右；d) 固体调味料：称取 2 g 样品放入 100 mL 小烧杯中，加入 10 mL 1% 氨水溶液，涡旋提取 1 min，4000 r/min 离心5 min，重复提取至提取液无色，合并上清液，用柠檬酸水溶液调节 pH 至 6 左右作为待净化液；e) 酱料类：称取 2 g 样品，加入 20 mL 石油醚，涡旋混合1 min，5000 r/min 离心 5 min，弃去石油醚上清液，残渣吹干，加入 10 mL 1% 氨水溶液，涡旋提取 1 min，4000r/min 离心 5 min，重复提取至提取液无色，合并上清液，用柠檬酸水溶液调节 pH 至 6 左右作为待净化液；f) 果冻、水果罐头：称取已均质样品 2 g，装入 50 mL离心管中，加入 5 mL 提取液a涡旋 1 min，4000r/min 离心 5min，重复提取至提取液无色，合并上清液置于 80℃水浴中浓缩至 2 mL，水洗转移至 10 mL 比色管中，用水定容(若试样 pH 偏高，用柠檬酸水溶液调节 pH 至 6 左右)；g) 肉制品：称取已均质样品 2 g，装入 50 mL 离心管中，加入 20 mL 石油醚，涡旋混合 1 min，4000 r/min 离心5 min，弃去石油醚上清液。残渣吹干，加入 5 mL 提取液a涡旋 1 min，4000 r/min 离心 5 min，重复提取至提取液无色，合并上清液置于 80℃ 水浴中浓缩至 2 mL，水洗转移至10 mL 比色管中，用水定容 (若试样 pH 偏高，用柠檬酸水溶液调节 pH 至 6 左右)转移至卓睿全自动固相萃取仪上样管中，待净化。3. 固相萃取柱净化SPE小柱：Cleanert® PWAX (150 mg/6 mL)Cleanert® PA (1 g/6 mL)取以上两种固相萃取柱及上述提取液至 Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪中，完成SPE 净化过程：6 mL 甲醇，6 mL 水 (pH 值 6 ~ 7)；加样 10 mL；6 mL 水 (pH为4)、6 mL 甲醇-甲酸(6：4)、6 mL 水(pH 值6 ~ 7) 淋洗；通入空气吹干小柱 5 min，6 mL 2% 氨化甲醇洗脱并接收，收集液于 50℃ 氮气吹干，用 1 mL 水定容，过 0.45 μm 水系滤器过滤，待测。结构式结构式1. 样品溶液的配置a) 乙酸铵溶液 (0.02 mol/L)：称取 1.54 g 乙酸铵，加水溶解并稀释至 1000 mL；b) 甲醇/甲酸 (6+4) 溶液：量取甲醇 60 mL，甲酸 40mL，混匀；c) 柠檬酸溶液：称取 20 g 柠檬酸，加水至 100 mL 溶解，混匀；d) 提取液a：量取无水乙醇 70 mL，氨水溶液 20 mL、水 10 mL，混匀；e) 水 (pH为6.0)：水加柠檬酸溶液调节 pH为6.0；4. 实验条件色谱柱：Venusil® XBP C18(L) 5μm 4.6 × 150 mm；流 速：1.0 mL /min；进样量：20 μL；波 长：254 nm；梯 度：5. 实验结果5.1 Cleanert® PWAX SPE 柱添加回收实验通过对不同基质样品的加标实验，对上述检测方法进行验证，结果见下表：5.2 赤藓红净化方法优化赤藓红为苯甲酸钠结构，相对其他苯磺酸钠结构的着色剂，在 SPE 小柱上保留较弱，国标《GB5009.35-2003》中赤藓红的前处理方法是和其他色素不一样的，采用的是液液萃取的方法。如按照 2.2 的净化方法操作，在淋洗阶段赤藓红将全部被洗脱下来。通过方法优化，最终淋洗方法确定为 6mL 水 (pH 值 6 ~ 7)、6 mL甲醇，选用 Cleanert® PWAX (150mg/6 mL)，其他条件不变，可满足同时处理9种着色剂的实验要求。注意事项1) 若提取液呈碱性，在上样之前要将其pH值调节至6左右，保证小柱对合成着色剂有良好地吸附；2) 若样品酒精度过高，建议在上样前对样品进行除醇处理；3) SPE小柱净化过程中，要注意对流速的控制，建议控制在1mL/min左右；4) 洗脱液氮吹复溶后，应选用水系滤膜过滤，防止因滤膜吸附造成样品的损失，建议选用Hydrophilic PTFE 滤头。5.3 结论实验结果表明，Cleanert® PWAX 或者 Cleanert® PA 聚酰胺柱和 Venusil® XBP C18(L) 液相色谱柱可以用于食品中的合成着色剂的检测，该方法快速、准确。Cleanert® PWAXSPE 小柱可同时处理9种着色剂，Cleanert® PA 聚酰胺柱可同时处理 8 种着色剂。6. 订货信息

A(OA) 研究应用编号：CU1010参考《GB/T 25220-2010 粮食中赭曲霉毒素A的测定 高效液相色谱法》1. 样品处理1.1 提取用试剂提取液：含 20% 0.1 mol/L 氢氧化钾溶液 60% 甲醇水溶液；淋洗液：含 30% 0.1 mol/L 氢氧化钾溶液 50％ 乙腈水溶液；洗脱液：甲醇:乙腈:甲酸:蒸馏水=4:5:0.5:0.51. 2 提取a) 玉米：将样品粉碎，称取玉米粉 10 g，加入 50 mL氯仿，震荡 3 ~ 5 min，用滤纸过滤，取滤液 10 mL 进入一个100 mL 平底烧瓶中，于 60℃ 水浴中旋转蒸发至近干，用 20mL 石油醚溶解残渣，加入 10 mL 提取液，震荡 3 ~ 5 min，分层后，用滤纸过滤，取下层提取液 5 mL 进行固相萃取。b) 糙米、小麦、小麦粉和大豆：将样品粉碎，称取粉碎样品 l0 g，加入 50 mL 提取液，震荡 3 ~ 5 min，用滤纸过滤，取滤液10 mL进入一个100 mL平底烧瓶中，加入 20 mL石油醚，震荡 3 ~ 5 min，分层后，用滤纸过滤，取下层提取液 5 mL 至 Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪上样管中进行固相萃取操作。2. 固相萃取净化Cleanert® PAX 固相萃取柱置于 Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪中，上样管至于对应位置，设定操作程序如下：5 mL甲醇，3 mL 提取液活化，加样 5 mL，10 mL 淋洗液淋洗，吹干，最后用 5 mL 洗脱液洗脱 OA，收集 (以上操作流速均为 1 mL/min)。收集液于 60℃ 水浴中旋转蒸发至干，用 1mL 流动相溶解残留物，经滤器过滤后上液相色谱检测。3. 色谱条件色谱柱：Venusil® ASB C18，4.6 mm × 250 mm，5 μm保护柱：Venusil® ASB C18 ，4.6 mm × 10 mm，5 μm流动相：乙腈:水:乙酸=48:51:1；检测器波长：激发光 333 nm，发射光 460 nm；进样量：25 μL；流速：1 mL/min；柱温：30℃4. 结果以小麦粉、小麦、玉米、糙米和大豆为研究对象，分别作三个不同浓度 OA 添加水平，这三个浓度分别为 0.8 μg/kg、4 μg/kg、10 μg/kg，每个浓度水平作 6 次平行性检测。检测回收率和精密度数据见表 l、表 2和表 3；典型色谱图见图 3。5．订货信息产品名称Qdaura® 卓睿全自动固相萃取仪LC-10F 高效液相色谱仪CC-100 分析型色谱柱温箱Cleanert® PAX 固相萃取柱Venusil® ASB C18 液相色谱柱Venusil® ASB C18 保护柱针式过滤器 (Nylon)一次性无针头注射器1.5 mL 样品瓶1.5 mL 样品瓶盖规格包装4 通道 24 位10 mL/min，梯度系统，200-800 nm 双波长检测器温控范围：5-70℃；可安装 1-2 支 300 mm 色谱柱200 mg/6 mL，30/pk4.6 mm × 250 mm，5 μm4.6 mm × 10 mm，5 μm0.22 μm，直径 13 mm，200/pk5 mL，100/pk短螺纹透明带书写 32 × 11.6 mm，100/pk9 mm 中心孔蓝盖，红色橡胶/米色 PTFE 隔垫,45．Shore A 1.0 mm，100/pk订货号SPE-40FL-LC010GSCC-100AX2006VS952505-0VS950105-0AS021320ZSQ-5ML1109-05190915-1819

(DB 31/2010—2012) 火锅底料中罂粟碱类物质的残留量测应用编号：CU1005罂粟碱是罂粟壳的主要成分之一, 罂粟碱对血管、心脏或其它平滑肌有直接的非特异性松弛作用，人体长期摄入可成瘾，大量摄入可导致严重心律失常。同时，罂粟壳中还含有吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因等相关违禁成分。近些年一些不法商贩在大众食品调料、汤料中掺入罂粟壳及其水浸物，企图使顾客产生依赖成瘾以达到拉“回头客”的目的。地方食品安全标准DB 31/2010—2012规定了火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的液相色谱-串联质谱测定方法。适用于火锅酱料、汤料、调味油和固体类调味粉等火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因、蒂巴因的测定。本方法样品用水或盐酸溶液分散均匀、乙腈提取后，经盐析分层，乙腈提取液用键合硅固相萃取吸附剂净化，离心，液相色谱－串联质谱仪检测，罂粟碱、那可丁和蒂巴因采用外标法定量，吗啡和可待因采用内标法定量。1. 样品处理称取2 g 试样（精确至0.01 g）于50 mL 聚四氟乙烯具塞离心管中，加入150 μL 同位素内标工作液，加入5 mL 水，振摇使分散均匀（酱类样品必要时可加10 mL 水），加入15mL 乙腈，涡旋振荡1 min，加入6 g 无水硫酸镁（3.7）和1.5g 无水醋酸钠（3.8）的混合粉末（P/N：MS-MG5052），迅速振摇，涡旋振荡1 min，以4000 转/分钟离心5 min，取上清液待净化。称取50 mg（±5 mg）PSA（3.9），100 mg（±5 mg）无水硫酸镁（3.7），100 mg（±5 mg）C18 粉末置于2 mL聚四氟乙烯具塞离心管中(P/N：MS-9PA0205），移取1.5mL 上清液至此离心管中，涡旋混合1 min，以10 000 转/分钟离心2 min，移取上清液，0.22 μm 滤膜过滤，取滤液待测。以上前处理方法主要针对火锅酱料、汤料、调味油。2. 液相条件色谱柱：Venusil® Hilic，2.1×100 mm，3 μm（P/N：VH931002-0）；进样量：10 μL流动相：A: 0.1%甲酸，10 mmol/L乙酸铵 水溶液B: 乙腈3. 质谱条件离子源: 具备电喷雾接口的Turbo V™离子源极性: 正离子模式，离子源相关参数如下：CUR: 40.00； TEM: 600.00GS1: 60.00； GS2: 60.00； IS: 5500.00总结该方法基于(DB 31/2010—2012) ，使用LC-MS/MS法进行火锅调料中罂粟碱类的物质检测，并且通过验证可用于各种火锅调料产品中罂粟碱类物质的定量、定性分析。经验证适用于SCIEX Triple Quad 4000系列、4500系列、API5000 、5500系列以及6500系列的LC/MS/MS系统。灵敏度高，重现性好，适用于各相关实验室进行该类物质的日常分析。5种罂粟碱类物质的总离子流色谱图

氨基酸对动物的生长、神经系统的发育及动物体内营养物质的正常代谢都有重要的作用，而且蛋白质是动物生长必需的营养物质，是评价饲料营养成分的一种重要物质，而氨基酸是构成蛋白质的基本单位，所以氨基酸的种类和含量也就是评价饲料质量的根本依据，从而准确检测氨基酸的含量和种类具有重要意义。柱后衍生的方法，虽然准确性高，但是耗时长、灵敏度低，所以本文采用柱前衍生的方法以缩短分析时间，增加灵敏度。同时该方法得到的氨基酸衍生物在 -20℃ 可保存数月，克服了柱前衍生法衍生物不稳定的缺点，另外该方法准确性高，用标准品做未知样品进行检测，检测的含量与标准品的标示值非常接近。1. 样品前处理酸水解法：准确称取一定量的样品，使样品氨基酸总量在 50~75 mg 范围内，置于 20~30 mL 安瓿瓶中，加入 10 mL含 0.1% 苯酚的 6 mol/L 盐酸，振摇使样品溶解或者是样品均匀分散在溶液中，将安瓿瓶置于 -20℃ 冰箱中冷冻3~5 分钟，充氮后用喷灯熔封，然后置于 110±1℃ 烘箱中水解 24小时，取出冷却，取水溶液 1 mL，置于浓缩管中用浓缩仪浓缩至干，加入 1 mL 的 0.1 mol/L 稀盐酸溶解，用 0.45 µm滤器过滤后，取清液贮存于冰箱中，供衍生使用。2. 衍生方法准确量取水解后溶液及氨基酸标准品 200 µL，分别置于 1.5 mL 离心管中，往每支离心管中准确加入正亮氨酸内标 50 µL，然后分别加入三乙胺乙腈溶液 100 µL 和异硫氰酸苯酯乙腈溶液 100 µL，摇匀室温静置衍生 1 小时。衍生结束后分别加入 400 µL 正己烷，振摇并静置 10 min，取下层溶液 200 µL 并用水稀释到 1 mL，混合均匀后用 0.45 µm针式过滤器过滤即可。3. 检测方法3.1 溶液配制流动相 A：称取 15.2 g 无水乙酸钠，加水 1850 mL，溶解后用冰醋酸调 pH 值到 6.5，然后加乙腈溶液 140 mL，混合均匀并用 0.45 µm 滤器过滤流动相 B：80% 乙腈水溶液3.2 高效液相检测条件仪器：LC-10F 高效液相色谱仪色谱柱：Venusil® AA 氨基酸分析专用柱4.6×250 mm，5 µm，100 Å流 速：1 mL/min；进样量：10 µL检测波长：254 nm；柱 温：40℃检测梯度如表14. 实验结果与讨论4.1 液相条件的建立样品中氨基酸含量比较低，而且直接检测溶剂效应较大，经过衍生后直接检测样品中的氨基酸不能完全分离，本文通过用水稀释衍生溶液的方法降低检测中的溶剂效应，并且经过优化流动相梯度使 18 种氨基酸得到良好的分离。但是实际检测过程中相同的检测条件下，仪器不同，分离效果差别较大，有的甚至都完全分不开，为此本文还开发了一种基础检测条件，可以根据仪器的自身特点，稍加调整流动相的比例即可使 18 种氨基酸得到较好的分离。基础检测条件如表2 所示。4.2 检测方法的稳定性、线性及准确性氨基酸标准品按照 2 方法衍生后，相同的条件下连续重复进样 6 次，计算相对标准偏差，结果如表3 所示。由结果可知该方法比较稳定，可以用来检测氨基酸样品，其实验谱图如图1 所示。根据仪器对各个物质的响应情况，将氨基酸标准溶液分别稀释成 2.5 µmol/mL (胱氨酸为 1.25 µmol/mL)、1.25 µmol/mL (胱氨酸为 0.625 µmol/mL)、0.5 µmol/mL (胱氨酸为 0.25µmol/mL)、0.25 µmol/mL (胱氨酸为 0.125 µmol/mL)、0.125µmol/mL (胱氨酸为 0.0625 µmol/mL) 5个浓度，然后按照 2 的衍生方法同时衍生处理，样品经稀释过滤后在相同的实验条件下进样，依据进样浓度X (µmol/mL)为横坐标，峰面积Y为纵坐标进行线性回归，根据各个物质峰高、噪音，遵循 S/N=3 计算出最低检出限，回归方程及检出限见表3。可见，在选定的液相色谱条件下氨基酸标准溶液的响应与浓度呈良好的线性关系。为了验证建立方法的准确性，本文用 Sigma 氨基酸标准品为样品，以博纳艾杰尔科技的标准品为标准品通过相同的方法衍生和检测得出检测值与标示值之间的偏差，除胱氨酸外，偏差均小于 3%，接近标准品的标示值，证明该方法准确性高，检测效果稳定。实验结果如表4。因为半胱氨酸在碱性环境下能够转化成胱氨酸，所以经碱水解后胱氨酸的含量不稳定，此外有时两个半胱氨酸残基会发生二硫键交联，经异硫氰酸苯酯衍生后的胱氨酸也不稳定，非常容易分解，所以胱氨酸的相关系数和偏差都比较大。4.3 样品检测结果按照上述方法检测处理后的饲料样品可得色谱图如图2、图3，通过单点校正法可以得出样品1和样品2 中含有标准品中的 18 种氨基酸。样品中的 18 种氨基酸均能得到良好的分离，这说明在有基质干扰的情况下本文建立的这种方法同样适用，而且样品连续进样重复性非常好，未出现样品变质或者峰形变差的现象，证明本文建立的方法在有基质干扰的情况下也同样克服了衍生氨基酸容易分解的问题。4.4 实验结论按照上述实验条件，可以准确检测饲料样品中 18 种氨基酸，同时检测的灵敏度及线性都能满足检测的要求，而且本方法准确性高，与样品中含有氨基酸的真值偏差非常小，所以该方法可以准确的检测饲料样品中的氨基酸。5. 订货信息

参考《GB/T 25220-2010 粮食中赭曲霉毒素A的测定 高效液 相色谱法》1. 样品处理1.1 提取用试剂提取液：含 20% 0.1 mol/L 氢氧化钾溶液 60% 甲醇水溶液；淋洗液：含 30% 0.1 mol/L 氢氧化钾溶液 50％乙腈水溶液；洗脱液：甲醇:乙腈:甲酸:蒸馏水=4:5:0.5:0.51. 2 提取a) 玉米：将样品粉碎，称取玉米粉 10 g，加入 50 mL氯仿，震荡 3 ~ 5 min，用滤纸过滤，取滤液 10 mL 进入一个100 mL 平底烧瓶中，于 60℃水浴中旋转蒸发至近干，用 20mL 石油醚溶解残渣，加入 10 mL 提取液，震荡 3 ~ 5 min，分层后，用滤纸过滤，取下层提取液 5 mL 进行固相萃取。b) 糙米、小麦、小麦粉和大豆：将样品粉碎，称取粉碎样品 l0 g，加入 50 mL 提取液，震荡 3 ~ 5 min，用滤纸过滤，取滤液10 mL进入一个100 mL平底烧瓶中，加入 20 mL石油醚，震荡 3 ~ 5 min，分层后，用滤纸过滤，取下层提取液 5 mL 至 Qdaura® 卓睿全自动固相萃取仪上样管中进行固相萃取操作。2. 固相萃取净化Cleanert® PAX 固相萃取柱置于 Qdaura® 卓睿全自动固相萃取仪中，上样管至于对应位置，设定操作程序如下：5 mL甲醇，3 mL 提取液活化，加样 5 mL，10 mL 淋洗液淋洗，吹干，最后用 5 mL 洗脱液洗脱 OA，收集 (以上操作流速均为 1 mL/min)。收集液于 60℃ 水浴中旋转蒸发至干，用 1mL 流动相溶解残留物，经滤器过滤后上液相色谱检测。3. 色谱条件色谱柱：Venusil® ASB C18，4.6 mm × 250 mm，5 µm保护柱：Venusil® ASB C18 ，4.6 mm × 10 mm，5 µm流动相：乙腈:水:乙酸=48:51:1；检测器波长：激发光 333 nm，发射光 460 nm；进样量：25 µL；流速：1 mL/min；柱温：30℃4. 结果以小麦粉、小麦、玉米、糙米和大豆为研究对象，分别作三个不同浓度 OA 添加水平，这三个浓度分别为 0.8 µg/kg、4 µg/kg、10 µg/kg，每个浓度水平作 6 次平行性检测。检测回收率和精密度数据见表 l、表 2和表 3；典型色谱图见图 3。5．订货信息

【飞诺美色谱】1. 实验材料1.1 糖皮质激素类药物标准品1.2 标准储备液及混合标准工作液的配置分别精密称取适量的 11 种糖皮质激素标准品，用甲醇溶解定容，分别配制成 1000 µg/mL 的贮备液。-20℃ 以下保存。混合标准工作液：准确量取糖皮质激素类药物标准贮备液适量，用20%乙腈水溶液稀释成适宜浓度的混合标准工作液，现配现用。1.3 标准储备液及混合标准工作液的配置a) 10% 亚铁氰化钾溶液：称量 2.3 gK4Fe(CN)6•3H2O，用水溶解定容至 20 mL；b) 20% 乙酸锌溶液：称量 4.78 g C4H6O4Zn•2H2O，用水溶解定容至 20 mL；c) 定容液：量取 70 mL水 和 30 mL 乙腈，混匀后加入100 µL 甲酸混匀。2. 样品提取霜膏类化妆品：称取 0.2 g 试样 (精确至 0.01 g)于 50mL 离心管，混匀。加入 3 mL 饱和氯化钠溶液，涡旋混合使样品分散，加入 3 mL 乙腈，超声提取 5 min，8000 r/min离心 5 min，吸取上层清液于另一 50 mL 离心管中，下层氯化钠溶液用 2 mL 乙腈重复提取一次，合并二次乙腈提取液，往提取液加入 40 mL 去离子水，混匀，加入亚铁氰化钾溶液 0.2 mL，混匀，加入乙酸锌溶液 0.2 mL，混匀，8000 r/min 离心 10 min，作为待净化液。精油类样品：称取 0.5 g 试样 (精确至 0.01 g)于 50 mL离心管，混匀。加入 4 mL 正己烷，涡旋混合使样品分散，加入4 mL 50%乙腈水溶液，涡旋提取2 min，8000 r/min离心5min，吸取下层提取液，上层正己烷用4 mL 50%乙腈水溶液重复上述提取步骤一次，合并二次50%乙腈提取液，往提取液加入36 mL去离子水，混合，加入亚铁氰化钾溶液0.1 mL，混匀，加入乙酸锌溶液 0.1 mL，混匀，8000 r/min 离心 10min，作为待净化液。3. 固相萃取柱净化将 Cleanert® PEP-2 固相萃取小柱置于 Qdaura® 卓睿全自动固相萃取仪，上样液转移至上样管中，溶剂置于相应的溶剂瓶中，设定操作程序如下：用 5 mL 甲醇、10 mL 水活化。将上样管中溶液全部上样，然后以 10 mL 10% 乙腈水溶液淋洗小柱，通气吹干小柱中的残留液 (5 min)。最后以 6 mL 甲醇洗脱小柱，通气吹干小柱中的残留液 (5 min)，以上操作流速均设定为 1 mL/min。取出收集瓶，于 40℃氮气吹干，用 1mL 定容液溶解定容，过 0.22 µm Nylon 滤器，待测。4. 检测条件4.1 液相色谱条件色谱柱：Venusil® ASB C18，3 µm，150 Å，2.1 × 150 mm；柱温：30℃；进样量：10 µL。流动相：A 相：含 0.1% 甲酸的水溶液；B 相：含 0.1% 甲酸的乙腈溶液；梯度洗脱程序见表44.2 液相色谱条件离子源：电喷雾离子源； 扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应监测； IS：-4500V；GS1：55Psi； GS2：55Psi；TEM：550℃；表 3 糖皮质激素类药物多反应监测的优化参数图 1 11 种糖皮质激素液相色谱 - 串联质谱图5. 结果与讨论以市售玫瑰精油和护手霜为基质，进行添加回收实验，进行0.1 µg/g 和 0.05 µg/g 添加浓度的实验，11 种糖皮质激素的回收率和重现性如下：实验结论：使用 Cleanert® PEP-2、Venusil® ASB C18，API 4000 PLUS 三重四级杆质谱仪进行定量分析，建立了一种化妆品中 11 种糖皮质激素同时检测的分析方法，在高低添加水平下，11 种糖皮质激素的平均回收率为 75%-120%；相对标准偏差均小于 13%。实验结果表明本方法快速、准确，可用于化妆品中糖皮质激素的检测。表 4 玫瑰精油 0.1 µg/g 添加回收实验结果表 5 玫瑰精油 0.05 µg/g 添加回收实验结果实验结论：使用 Cleanert® PEP-2、Venusil® ASB C18，API 4000 PLUS 三重四级杆质谱仪进行定量分析，建立了一种化妆品中 11 种糖皮质激素同时检测的分析方法，在高低添加水平下，11 种糖皮质激素的平均回收率为 75%-120%；相对标准偏差均小于 13%。实验结果表明本方法快速、准确，可用于化妆品中糖皮质激素的检测。6. 订货信息

一 背景胆汁酸（bile acid, BA）为胆固醇的系列衍生物，体内约有 50%胆固醇是以胆汁酸形式排泄，是体内清除胆固醇的重要途径。粪便中的胆汁酸经过复杂的肠道菌群解离作用已证实主要为一级胆汁酸和次级胆汁酸。目前已有相关研究表明，粪便中胆汁酸的含量与肝脏疾病进展程度相关，建立操作简便、可准确定量的样品前处理方法对临床相关研究具有重要意义。本实验采用 Cleanert MAS-MAW 进行样品净化处理，考察胆汁酸在粪便样品中的加标回收率，建立 SPE 方法对粪便样品进行净化处理。二 目标物信息表 1 目标物信息三 材料及仪器Cleanert MAS-MAW；PTFE 滤头；Cleanert M96 生物样品前处理仪；Cleanert V96 氮吹浓缩仪；96 孔接收板；Venusil MP C18（2.1*150mm，3μm，100Å）；API 4000+.四 样品处理方法4.1 样品预处理称取 10mg 粪便样品至样品瓶中，并加入 3mL 甲醇，涡旋 2min，超声 15min，8000rpm离心 5min，将上清液转移至干净样品瓶中，向样品残渣中再加入 3mL 甲醇，重复提取一次，将上清液合并，并用 PTFE 过滤头进行过滤，将滤液于 45℃下氮吹干，使用 1mL 1%甲酸甲醇/水（1：1，v/v）溶液重新溶解，待净化。4.2 SPE 过程活化：2ml 乙腈，2ml 3%甲酸水溶液上样：将待净化液全部上样淋洗：4mL 50%甲醇水，淋洗液弃去洗脱：先用 2mL 甲醇进行洗脱，再用 2ml 三乙胺-水-甲醇混合液（2%-10%-88%）洗脱，将洗脱液合并，在 40℃下氮吹干，残渣用 100μL 甲醇/水（7:3，v/v）溶解。注：粪便样品中部分胆汁酸的含量较高，可将溶液进一步稀释再进行检测。五 仪器检测条件5.1 HPLC 条件色谱柱：Durashell C18-AM（2.1*100mm，3μm，100Å）流速：200μL/min柱温：30℃；进样量：5μL表 2 梯度条件5.2 质谱条件扫描模式：电喷雾电离负模式采集模式：多反应监测（MRM）表 3 参数信息六 结果表 4 样品加标回收率图 1 8 组分出峰顺序图（简称见表 1）七 结论本实验采用 Cleanert MAS-MAW 96 孔板对粪便样品中的胆汁酸进行高通量前处理。实验结果表明 Cleanert MAS-MAW 能够有效除去粪便中的干扰物，对 8 种胆汁酸进行定量萃取，绝对回收率范围为 83%~114%，可以满足日常对批量生物样品分析的需求。八 订货信息表

在制药产业，mRNA治疗方法作为新型治疗方案，在新冠疫苗研发以及肿瘤免疫治疗方面具备非常大的发展潜力和应用前景。近期，全球首款呼吸道合胞病毒（RSV）mRNA疫苗获批上市，首个LNP-mRNA体内基因编辑疗法公布积极长期数据等消息更是振奋了mRNA这条赛道。众所周知，质控方法和质量标准的研究是决定产品能否进入临床研究以及顺利上市的重要环节之一。美国药典（USP）标准历来被认为是一种重要的公共医药工具，2023年4月，USP重磅更新了新的一版《mRNA疫苗质量分析方法-指南草案》（后文简称“2023版草案”），2023版草案从整个mRNA疫苗产品的全生命周期出发，基于质量源于设计（QbD）的理念，涵盖了包括DS和DP在内的表征和放行测试。mRNA是一种单链RNA分子，可以形成二级结构（如发夹和R-环）和三级结构，并可能与其他mRNA分子发生相互作用从而形成聚集。而聚集体的存在可能会影响mRNA的稳定性与活性。因此，在2023版草案中收录了SEC-HPLC方法用于mRNA聚集体的定量测定方法。近日，艾杰尔-飞诺美上海应用实验室采用全新推出的Biozen dSEC-7色谱柱对全长约为4.5K nt的Cas9 IVT mRNA及其聚集体进行分离并定量。通过体积排阻色谱法（SEC）可以让研究人员更好地理解和控制mRNA聚集体的形成，从而优化mRNA的生产工艺，提高产品质量。为了尽可能保证mRNA构型的稳定，此应用选择了30 ℃的柱温。并且在0.3 mL/min的流速下对比了多种流动相的表现。其中最有代表性的三种分别是2023版草案中收录的SEC-HPLC推荐流动相150 mM磷酸钠缓冲液，更高离子强度的流动相150 mM磷酸钠缓冲液+100 mM氯化钠，以及另一种对于核酸类样品常用的SEC流动相体系50 mM Tris-Hcl缓冲液+250 mM氯化铵。下图展示了三种类型流动相的结果。图1 三种不同流动相下的峰形对比（绿色：150 mM磷酸钠缓冲液+100 mM氯化钠；红色150 mM磷酸钠缓冲液；蓝色：50 mM Tris-Hcl缓冲液+250 mM 氯化铵）表1 不同流动相积分结果比较流动相主峰保留时间 (min)主峰分离度聚集体百分比 (%)150 mM磷酸钠缓冲液6.8430.885.108150 mM磷酸钠缓冲液+100 mM氯化钠6.9810.905.80650 mM Tris-Hcl缓冲液+250 mM氯化铵7.0150.953.716通过上述实验证明飞诺美最新上市的700 Å孔径SEC柱能够很好的对大小约5K nt 的IVT mRNA样品进行聚集体分离。事实证明，孔径并非越大越好，优化的孔径分布更有利于聚集体分离。Biozen dSEC-7采用BioTi™生物惰性硬件，进一步降低了和生物大分子之间的次级相互作用，提高了产品的稳定性，极少量的样品即可获得足够的聚集体响应。实验结果表明，该色谱柱适合mRNA聚集体的质量研究和放行检测。另外，SEC方法作为一种Native的分析方法，可以模拟出mRNA分子在不同的formulation中的原始状态，辅助用于formulation的筛选工作。此项应用的Cas9 IVT mRNA样品提供来自丹纳赫中国生命科学战略合作伙伴——云舟生物科技（广州）有限公司。CAS9作为新一代基因编辑技术，在疾病研究和治疗中具有巨大的发展前景。此次项目也将进一步作为双方合作的标杆示范项目，为双方未来开展更多行业领先方法和工艺研究，包括AAV、mRNA和基因药物载体平台方案带来更多合作空间。关于云舟生物云舟生物是引领全球基因递送技术的创新型企业，可提供科研载体构建服务、基因递送CRO服务、基因载体CDMO服务等全产业链服务。云舟生物通过全球首创的智慧基因载体智能设计与订购平台“载体家（VectorBuilder）”，开启了定制化基因载体的商品化时代，助力全球科研机构与药企研发人员提升基因研究效率和基因治疗创新效率。针对基因递送在基因疗法中应用的关键技术瓶颈，云舟生物深耕质粒载体、慢病毒载体、AAV病毒载体、LNP-mRNA等多种基因递送平台技术，并结合自身CRO和CDMO服务平台，加速创新基因疗法从科研到临床的转化。关于艾杰尔飞诺美艾杰尔（Agela）和飞诺美（Phenomenex）是我们双品牌经营策略。我们致力于新型分析化学方案的研究，从而解决工业、临床研究、政府和学术领域研究人员所面临的分离和纯化挑战。艾杰尔-飞诺美的色谱解决方案推动着分离科学发展，并为研究人员提供改善全球健康和福祉所需的工具。四十年间，飞诺美（Phenomenex）已11次荣获“R&D 100创新大奖”。今天，艾杰尔-飞诺美作为丹纳赫中国生命科学平台的一员，我们将继续在色谱技术领域开发稳健、可靠的解决方案，以此助力罕见病、癌症和疫苗生物制剂等新兴疗法和相关药物从药物发现到临床试验成果的快速转化。在食品检测、接触性材料、毒物检测及环境检测等方面提供更高标准的分析检测手段。用分离科学的力量，让人类生活更加美好。【关注微信公众号“艾杰尔飞诺美”获取应用案例】

摘要：本实验采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合蒸发光散射检测器，选择 Venusil® HILIC (5 μm，100 Å，4.6 × 250 mm)色谱柱建立了去氢抗坏血酸的分析方法。结果表明：采用蒸发光散射检测器，流动相为 0.1%甲酸︰乙腈=10︰90(v/v)，柱温为 30℃，进样量为 20 µL 时，测得去氢抗坏血酸峰型较好，能够满足分析要求。关键词：高效液相色谱法；蒸发光散射检测器；去氢抗坏血酸；Venusil® HILIC 色谱柱；前言抗坏血酸，是具有许多生物学功能的水溶性己糖衍生物，其分子中 2 位和 3 位碳原子的两个烯醇式羟基极易解离，释放出 H+，而被氧化成去氢抗坏血酸。抗坏血酸和去氢抗坏血酸在人体内形成可逆的氧化还原系统，此系统在生物氧化、还原作用及细胞呼吸中起重要作用。本实验使用Venusil® HILIC色谱柱采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合蒸发光散射检测器，建立了去氢抗坏血酸的分析方法，以期为去氢抗坏血酸的分析提供参考。表 1. 去氢抗坏血酸化学信息实验部分仪器、试剂与材料主要仪器设备高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器；试剂材料实验用水为屈臣氏蒸馏水；乙腈、甲酸均为色谱纯试剂；去氢抗坏血酸对照品：白色粉末，由某药业集团股份有限公司提供；高效液相色谱柱：Venusil® HILIC；5 μm，100 Å，4.6 × 250 mm。色谱条件色谱柱：Venusil® HILIC；5 μm，100 Å，4.6 × 250 mm；流动相：0.1 %甲酸︰乙腈=10︰90(v/v)；流 速：1.0 mL/min；柱 温：30℃；进样量：20 µL；检测器条件检测器：ELSD；雾化室温度：85℃；载气：超纯氮气；载气流量：2.0 ln/min样品制备称取去氢抗坏血酸对照品 5 mg，置 10 mL 样品瓶中，加入 5 mL 流动相超声溶解，并稀释至刻度，摇匀，经 0.45 µm 滤膜过滤，取续滤液作为对照品储备溶液。分别量取对照品储备液适量，加流动相稀释制成每 1.0 mL 中含去氢抗坏血酸 10 µg；20 µg；30 µg；40 µg；50 µg 的溶液，作为对照溶液。结果与讨论本实验采用 Venusil® HILIC 色谱柱建立了去氢抗坏血酸的分析方法，由表 2 及下图可知，流动相为乙腈和 0.1 %甲酸，等度洗脱时，对去氢抗坏血酸保留、峰形较好，可满足检测要求。表2.去氢抗坏血酸对照品溶液分析结果图 1. Venusil® HILIC 色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(10 µg/mL)图 2. Venusil® HILIC 色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(20 µg/mL)图 3. Venusil® HILIC 色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(30 µg/mL)图 4. Venusil® HILIC 色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(40 µg/mL)图 5. Venusil® HILIC 色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(50 µg/mL)结论本实验采用 Venusil® HILIC 色谱柱建立了去氢抗坏血酸的分析方法，根据实验结果可知，采用蒸发光散射检测器，流动相为乙腈和 0.1 %甲酸，等度洗脱时，对去氢抗坏血酸保留、峰形较好，可满足检测要求。附：相关产品

摘要：本实验采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合紫外检测器，按照 Ch.P2015 版二部曲克芦丁项下方法，使用 Venusil® MP C18 色谱柱(5 µm，100Å；4.6 × 250 mm)对曲克芦丁系统适用性溶液进行分离。结果表明：在波长为 254 nm，流动相为磷酸盐缓冲溶液(pH4.4)、乙腈条件下，Venusil® MP C18 色谱柱可用于曲克芦丁有关物质和含量测定中系统适用性溶液的分离。关键词：高效液相色谱法；紫外检测器；曲克芦丁；系统适用性；Venusil® MP C18；前言曲克芦丁系芦丁经羟乙基化制成的半合成黄酮化合物，能抑制血小板的凝集，有防止血栓形成的作用。同时具有对抗 5-羟色胺、缓激肽引起的血管损伤，增加毛细血管抵抗力，降低毛细血管通透性，防止血管通透性升高引起的水肿等作用。表 1. 曲克芦丁有关物质样品信息实验部分仪器、试剂与材料主要仪器设备高效液相色谱仪，紫外检测器；试剂材料屈臣氏水；乙腈为色谱纯；磷酸二氢钠、磷酸为分析纯；曲克芦丁系统适用性溶液：由某医药公司提供；高效液相色谱柱：Venusil® MP C18； 5 μm，100 Å，4.6 × 250 mm；有关物质色谱条件色谱柱：Venusil® MP C18； 5 μm，100 Å，4.6 × 250 mm；流动相 A：0.1 mol/L 磷酸二氢钠溶液(磷酸调节 pH 至 4.4)；流动相 B：乙腈；波 长：254 nm；柱 温：30℃；流 速：0.5 mL/min；进样量：10 µL。表 2.梯度洗脱程序含量测定色谱条件色谱柱：Venusil® MP C18； 5 μm，100 Å，4.6 × 250 mm；流动相：0.1 mol/L 磷酸二氢钠溶液(磷酸调节 pH 至 4.4) ︰乙腈=80︰20(v/v)；波 长：254 nm；柱 温：30℃；流 速：0.5 mL/min；进样量：10 µL。结果与讨论本实验按照 Ch.P2015 版二部曲克芦丁项下方法，使用 Venusil® MP C18 色谱柱对曲克芦丁系统适用性溶液进行检测，由表 3 及图可知，在上述两种色谱条件下，曲克芦丁均具有良好峰形，与相邻杂质峰分离度均大于 1.5，满足药典要求。表 3.曲克芦丁系统适用性溶液实验数据图 1.Venusil MP C18 色谱柱曲克芦丁有关物质系统适用性溶液高效液相色谱图图 2.Venusil MP C18 色谱柱曲克芦丁有关物质系统适用性溶液高效液相色谱图 (纵坐标局部放大图)图 3.Venusil MP C18 色谱柱曲克芦丁含量测定系统适用性溶液高效液相色谱图图 4.Venusil MP C18 色谱柱曲克芦丁含量测定系统适用性溶液高效液相色谱图 (纵坐标局部放大图)结论本实验按照 Ch.P2015 版二部曲克芦丁项下方法，使用 Venusil® MP C18 色谱柱对曲克芦丁系统适用性溶液进行检测，结果表明在上述实验条件下，Venusil® MP C18 色谱柱测试结果满足药典有关物质和含量测定的要求，可用于系统适用性溶液的分离分析。附：相关产品

摘要：本实验采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合紫外检测器，使用 Venusil® ASB C8 (3 µm，150Å；4.6 ×150 mm)色谱柱对他达拉非样品溶液进行了测试。结果表明：在波长为 285 nm，流动相乙腈︰水（含 0.1%三氟乙酸）=35︰65（v/v）时，样品溶液中他达拉非峰型较好，符合检测要求。关键词：高效液相色谱法；紫外检测器；他达拉非；Venusil® ASB C8 色谱柱；前言西力士就是他达拉非，是由美国礼来制药公司研发的一种口服治疗男性勃起功能障碍症药物，属第二代磷酸二酯酶 5 抑制剂。表 1.他达拉非相关信息实验部分仪器、试剂与材料主要仪器设备高效液相色谱仪，紫外检测器；试剂材料屈臣氏水；乙腈、三氟乙酸为色谱纯；他达拉非样品溶液：由某医药科技有限公司提供；高效液相色谱柱：Venusil® ASB C8；3 µm，150 Å；4.6 × 150 mm。实验条件色谱柱：Venusil® ASB C8；3 µm，150 Å；4.6 × 150 mm；流动相：乙腈︰水（含 0.1%三氟乙酸）=35︰65（v/v）；流 速：1.0 mL/min；波 长：285 nm；柱 温：30℃；进样量：10 µL。结果与讨论本实验使用 Venusil® ASB C8 色谱柱对他达拉非样品溶液进行了测试，由表 2 及实验图谱可知，样品溶液中他达拉非峰形较好。表 2.他达拉非样品溶液分析结果他达拉非样品溶液高效液相色谱图结论本实验使用 Venusil® ASB C8 色谱柱对他达拉非样品溶液进行了测试，根据实验结果可知，样品溶液中他达拉非峰形较好，符合检测要求。附：相关产品

摘要：本实验按照中国药典二部酮康唑项下方法，选择 Venusil® C18 Plus (5 μm，120 Å，4.6 × 250 mm)色谱柱对酮康唑系统适用性溶液进行了测试。结果显示：系统适用性溶液中酮康唑峰与盐酸洛哌丁胺峰的分离度为 16.649＞15，满足药典要求。关键词：中国药典；酮康唑系统适用性溶液；Venusil® C18 Plus 色谱柱前言酮康唑属吡咯类抗真菌药，对深部感染真菌如念珠菌属、着色真菌属、球孢子菌属、组织浆胞菌属、孢子丝菌属等均具抗菌作用，对毛发癣菌等亦具抗菌活性。表 1.酮康唑相关信息实验部分仪器、试剂与材料主要仪器设备高效液相色谱仪，紫外检测器；试剂材料屈臣氏水；乙腈为色谱纯； 四丁基硫酸氢铵为分析纯；酮康唑系统适用性溶液：客户提供；高效液相色谱柱：Venusil® C18 Plus；5 μm，120 Å，4.6 × 250 mm。样品制备酮康唑系统适用性溶液：客户提供。色谱条件色谱柱：Venusil® C18 Plus；5 μm，120 Å，4.6 × 250 mm；流动相 A：0.34%四丁基硫酸氢铵溶液；流动相 B：乙腈；检测波长：220 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；进样量：10 μL。洗脱梯度：结果与讨论本实验采用 Venusil® C18 Plus 色谱柱对酮康唑系统适用性溶液进行了测定，由表 2及图 1 可知，该色谱柱的检测结果能够满足药典要求。表 2. 酮康唑系统适用性溶液测试结果图 1.酮康唑系统适用性溶液测试图谱结论本实验采用 Venusil® C18 Plus 色谱柱(5 μm，120 Å，4.6 × 250 mm)对酮康唑系统适用性溶液进行了测试，结果表明该色谱柱的检测结果满足药典要求。附：相关产品

摘要：本实验采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合紫外检测器，按照 Ch.P2015 版二部头孢呋辛钠项下方法，使用 Venusil® XBP C8 色谱柱(5 µm，100Å；4.6 × 250 mm)对系统适用性溶液进行测试。结果表明：在波长为 273 nm，流动相为醋酸盐缓冲溶液(pH3.4)︰乙腈条件下，Venusil®XBP C8 色谱柱可同时用于含量测定和有关物质条件下系统适用性溶液的分离分析。关键词：高效液相色谱法；紫外检测器；头孢呋辛钠；Venusil® XBP C8；前言头孢呋辛钠为第二代头孢菌素类抗生素，对革兰阳性球菌的抗菌活性与第一代头孢菌素相似或略差，但对葡萄球菌和革兰阴性杆菌产生的 β-内酰胺酶相当稳定，临床主要应用于敏感的革兰阴性菌所致的下呼吸道、泌尿系、皮肤和软组织、骨和关节、女生殖器等部位的感染。表 1. 头孢呋辛钠中有关物质样品信息实验部分仪器、试剂与材料主要仪器设备高效液相色谱仪，紫外检测器；试剂材料屈臣氏水；乙腈为色谱纯；醋酸钠、冰醋酸为分析纯；头孢呋辛钠：由某医药公司提供；高效液相色谱柱：Venusil®XBP C8；5 μm，100 Å，4.6 × 250 mm；有关物质色谱条件色谱柱：Venusil®XBP C8；5 μm，100 Å，4.6 × 250 mm；流动相 A：醋酸盐缓冲溶液(取醋酸钠 0.68 g，冰醋酸 5.8g，加水稀释称 1000 ml，用冰醋酸调节 pH 至 3.4)；流动相 B：乙腈；波 长：273 nm；柱 温：30℃；流 速：1.5 mL/min；进样量：20 µL；梯度程序：表 2.头孢呋辛钠有关物质梯度洗脱程序含量测定色谱条件色谱柱：Venusil®XBP C8；5 μm，100 Å，4.6 × 250 mm；流动相 A：醋酸盐缓冲溶液(取醋酸钠 0.68 g，冰醋酸 5.8g，加水稀释称 1000 ml，用冰醋酸调节 pH 至 3.4)︰乙腈=85︰15(v/v)；波 长：273 nm；柱 温：30℃；流 速：1.5 mL/min；进样量：20 µL；样品制备头孢呋辛钠系统适用性溶液：取本品适量，加水溶解并稀释至每 1.0mL 中含 0.5mg的溶液，置 60℃水浴中放置 30 min，放冷，使头孢呋辛部分转变为去氨甲酰头孢呋辛，作为系统适用性溶液。结果与讨论本实验按照 Ch.P2015 版二部头孢呋辛钠项下方法，使用 Venusil® XBP C8 色谱柱对头孢呋辛钠系统适用性溶液进行检测，由表 3 及图可知，在上述有关物质和含量测定色谱条件下，头孢呋辛与去氨甲酰头孢呋辛分离度均大于 3.0，与相邻后杂质分离度满足药典要求大于 1.5。表 3.头孢呋辛钠系统适用性溶液实验数据图 1.有关物质系统适用性溶液高效液相色谱图图 2.有关物质系统适用性溶液高效液相色谱图(纵坐标局部放大图)图 3.含量测定系统适用性溶液高效液相色谱图图 4.含量测定系统适用性溶液高效液相色谱图(纵坐标局部放大图)结论本实验按照 Ch.P2015 版二部头孢呋辛钠项下方法，使用 Venusil® XBP C8 色谱柱对头孢呋辛钠系统适用性溶液进行检测，结果表明在有关物质和含量测定实验条件下，Venusil® XBP C8 色谱柱对头孢呋辛与周围杂质的分离均能满足药典要求，可同时用于有关物质和含量测定下系统适用性溶液的分离。附：相关产品

摘要：本实验采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合紫外检测器，按照 Ch.P2015 版二部头孢氨苄胶囊含量测定项下方法，分别使用 Promosil C18 色谱柱(5 µm，100 Å ；4.6 × 250 mm)对系统适用性溶液进行分析测定。结果表明：在波长为 254 nm，流动相为水︰甲醇︰3. 86%醋酸钠溶液︰4%醋酸溶液=742︰240︰15︰3(v/v/v/v) 时，Promosil C18 色谱柱对头孢氨苄峰与相邻杂质峰的分离可满足药典要求。关键词：高效液相色谱法；紫外检测器；头孢氨苄胶囊；含量测定；Promosil C18前言头孢氨苄为 β 内酰胺类药物，属第一代头孢菌素类。该品通过抑制细胞壁的合成，使细胞内容物膨胀至破裂溶解，从而达到杀菌作用，属于广谱抗生素。表 1. 头孢氨苄样品信息实验部分仪器、试剂与材料主要仪器设备高效液相色谱仪，紫外检测器；试剂材料屈臣氏水；甲醇为色谱纯；醋酸、醋酸钠为分析纯；头孢氨苄胶囊：由某医药公司提供；高效液相色谱柱：Promosil C18 ；5 µm，100 Å；4.6 × 250 mm；色谱条件色谱柱：Promosil C18 ；5 µm，100 Å；4.6 × 250 mm；流动相：水︰甲醇︰3. 86%醋酸钠溶液︰4% 醋酸溶液=742︰240︰15︰3(v/v/v/v) ；波 长：254 nm；流 速：1.0 mL/min；进样量：20 µL；温 度：25℃；结果与讨论本实验按照 Ch.P2015 版二部头孢氨苄胶囊中含量测定项下方法，使用 PromosilC18 色谱柱对头孢氨苄胶囊系统适用性溶液进行检测，由表 2 及图可知，在上述色谱条件下，头孢氨苄峰型对称，与相邻杂质峰分离度分别为 1.88、2.24，可实现基线分离。表 2.头孢氨苄胶囊系统适用性溶液实验数据图 1.头孢氨苄胶囊系统适用性溶液高效液相色谱图结论本实验按照 Ch.P2015版二部头孢氨苄胶囊中含量测定项下方法，使用 Promosil C18色谱柱对头孢氨苄胶囊系统适用性溶液进行检测，结果表明在上述实验条件下，Promosil C18 色谱柱结果可满足药典要求，可用于头孢氨苄胶囊含量测定。附：相关产品

摘要：本实验采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合紫外检测器，按 ChP2015 二部头孢克肟片项下分析方法，选择 Venusil® XBP C18(A)色谱柱对头孢克肟供试品与系统适用性溶液进行测试。结果表明：在波长为 254 nm，流速为 1.0 mL/min，柱温为 40℃，流动相为四丁基氢氧化铵溶液︰乙腈=72︰28(v/v)时，供试品溶液与系统适用性溶液中头孢克肟与(E)异构体及相邻杂质峰分离度均大于 1.5，可满足药典分离要求。关键词：高效液相色谱法；紫外检测器；头孢克肟片；Venusil® XBP C18(A)前言头孢克肟是第三代口服头孢菌素类抗生素，又称为氨噻肟烯头孢菌素、世伏素、世福素，临床上用于治疗由链球菌属（肠球菌除外）、肺炎链球菌、淋球菌、大肠杆菌、卡他布兰汉球菌、沙雷杆菌、枸橼酸杆菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、流感嗜血杆菌、克雷伯杆菌属、沙雷菌属、变形杆菌属及流感杆菌等引起的细菌感染性疾病。表 1.头孢克肟化学信息实验部分仪器、试剂与材料主要仪器设备高效液相色谱仪，紫外检测器；试剂材料10%四丁基氢氧化铵溶液与磷酸均为色谱纯试剂；头孢克肟片：由某医药公司提供；高效液相色谱柱：Venusil® XBP C18(A)；5 μm，120Å；4.6 × 250mm；实验条件色谱柱：Venusil® XBP C18(A)；5 μm，120Å；4.6 × 250mm；四丁基氢氧化铵溶液：取10 %四丁基氢氧化铵溶液25 mL，加水1000 mL，摇勻，用1.5 mol/L磷酸溶液调节pH值至7.0，混匀；流动相：四丁基氢氧化铵溶液︰乙腈=72︰28(v/v)；波 长：254 nm；流 速：1.0 mL/min；进样量：20 µL；温 度：40℃；样品制备取头孢克肟片1片，研细，置100 mL容量瓶中，加水50 mL超声溶解并稀释至刻度，制成每l.0 mL中含头孢克肟l.0 mg的溶液，摇匀，经0.45 µm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。取头孢克肟片1片，研细，置100 mL容量瓶中，加磷酸盐缓冲液（pH7.0）超声溶解并稀释至刻度，制成每l mL中含头孢克肟l mg的溶液，于沸水浴上加热45分钟，冷却，摇匀，经0.45 µm微孔滤膜过滤，取续滤液作为系统适用性溶液。结果与讨论本实验选择 Venusil® XBP C18(A)色谱柱按 ChP2015 二部头孢克肟片项下分析方法对头孢克肟供试品及系统适用性溶液进行测试，由表 2 及下图可知，供试品溶液与系统适用性溶液中头孢克肟与(E)异构体及相邻杂质峰可实现有效分离。实验数据表 2. 头孢克肟片相关样品溶液实验数据图 1.Venusil® XBP C18(A)色谱柱用于头孢克肟系统适用性溶液高效液相色谱图图 2.Venusil® XBP C18(A)色谱柱用于头孢克肟片供试品溶液高效液相色谱图(纵坐标局部放大)结论根据实验结果，选择 Venusil® XBP C18(A)色谱柱按 ChP2015 二部头孢克肟片项下分析方法对头孢克肟供试品及系统适用性溶液进行测试，供试品溶液与系统适用性溶液中头孢克肟与(E)异构体及相邻杂质峰分离度均大于 1.5，可满足药典分离要求。附：相关产品

(参考GB/T 22509-2008) 油脂中苯并(a)芘的检测 HPLC 法应用编号：RF10001本方法参考 GB/T 22509-2008 国标方法：动植物油脂苯并(a)芘的测定反相高效液相色谱法。1. 样品制备称取约 0.300 g 的油样，用 5 mL 正己烷溶解涡旋混合器上充分混匀。2. 固相萃取柱净化活化：用约 30 mL 正己烷 将Cleanert® BaP(P/N: BAP2260-0) 柱预先活化。(注意：在正己烷滴出的过程中，柱体上部要不断添加正己烷，千万注意不能让正己烷低于柱子的上筛板，避免空气进入柱子！)上样：将溶解好的油样添加到预活化好的 Cleanert® BaP柱子中，注意操作过程中上筛板不能干涸。洗脱：添加 80 mL 正己烷，用 150 mL 的旋蒸瓶接收，直到 80 mL 的正己烷完全自然滴出。为了保证回收率，也可以增加正己烷的洗脱体积，最多可至 120 mL。3. 浓缩旋转蒸发：将洗脱液在 45℃ 水浴中旋转蒸发至干，如果仍然有油滴无法蒸干，说明样品中油脂含量较高，净化不完全，需要向油滴中添加 80 mL 的正己烷制得新样，取一根新柱重复上述净化过程；氮吹：用总计 10 mL 的正己烷分三次淋洗旋蒸瓶，合并淋洗液到氮吹管中，氮气吹干。添加 300 μL 的正己烷到氮吹管中，在涡旋混合器上充分混匀。注意氮吹过程避免气流过大，造成液体溅出；涡旋过程避免正己烷蒸发。将上述300μL 的正己烷转移至 1.5 mL 样品瓶内插管中，进样分析。4. 色谱条件色谱柱：Venusil® ASB C18 250 mm×4.6 mm 5.0 μm( P/N:VS952505-0 )流速：1.0 mL/min；流动相：乙腈：水 = 95:5；发射波长：406 nm；

油墨样品制备案例PP10085应用及技术服务部摘要：本实验采用Cheetah MP200中压制备仪器，选择Flash AQ C18（20 μm，100 Å，120 g）填料对两种油墨样品进行了制备。结果表明：样品在210 nm 下，流动相为水和乙腈，进行洗脱，能够有效分离，且峰性良好。关键词：Cheetah MP200；油墨；Flash AQ C18前言油墨的主要成分为颜料及连接料，颜料一般包含有机和无机颜料两种，可根据具体产品性能要求选择不同的颜料作为原料，连接料是由天然树脂、合成树脂、纤维素、橡胶衍生物等溶于干性油或溶剂中制得。颜料的辅助成分较多如：填充剂、稀释剂、防结皮剂、防反印剂、增滑剂等等，油墨所选用的原料会直接影响到油墨的密度、细度、透明度、光泽度、耐光性、耐热性以及耐酸、碱、水、溶剂（醇）性。本实验建立的中压制备纯化方法可以制备油墨中多种成分。实验部分仪器、试剂与材料主要仪器设备Cheetah MP200 中压制备仪器，试剂材料乙醇为色谱纯； 水为去离子水高效液相色谱柱：Flash AQ C18 20 μm，100 Å，120 g葫油墨样品：客户提供样品前处理样品是黑色液体，用0.22 μm 滤膜过滤后上样制备条件色谱柱：Flash AQ C18 20 μm，100 Å，120 g；流动相：A：水 B：乙腈；检测器：210 nm，260 nm流 速：50 mL/min进样量：0.5 mL梯 度：检测条件色谱柱：Innoval ODS-2 10 μm，100 Å ，4.6 × 250 mm；流动相：A：0.05%TFA 水溶液 B：乙腈检测器：210 nm流 速：1.0 mL/min进样量：5 μL柱 温：35 ℃梯 度：结果与讨论本实验采用Flash AQ C18 (20 μm，100 Å，120 g)对油墨样品进行了制备，由表2及图1 可知，流动相为水和乙腈，进行梯度洗脱时，样品通过制备，峰形良好。结论本实验采用Flash AQ C18 (20 μm，100 Å，120 g)色谱柱对黑墨样品进行了制备。结果表明Flash AQ C18 中压填料对该样品分离效果良好，与分析图谱各峰能够很好的对应。

婴幼儿奶粉中双氰胺的分析方法AF10045北京时间1月25日凌晨消息，新西兰牛奶中发现了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二胺，缩写DICY或DCD。虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量，但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。针对婴幼儿奶粉中基质复杂的特点，本方法加大了净化材料的用量，以获得了更好的净化效果。采用天津博纳艾杰尔科技的新一代的Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管（500 mg/15 mL，货号：MS-SQA02）和Venusil® HILIC液相色谱柱，建立了奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS快速前处理方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。1 实验部分1.1 仪器、试剂与材料高效液相色谱仪，涡旋振荡器，超声波清洗机，氮吹仪。双氰胺标准品（CAS： 461-58-5；FW=84.08），新一代Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管，Venusil® HILIC液相色谱柱，微孔滤膜，乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯，实验用水为超纯水。样品：新西兰婴儿配方奶粉（0~6个月）1.2 实验步骤称取1 g试样于50 mL具塞离心管中，加2 mL水，涡旋30 s，加2 mL乙腈涡旋。再往现有的提取液中加2 mL乙腈，重复上述提取步骤。再将该提取步骤重复2次，得到共计约10 mL的提取液。以4000 r/min离心5 min，将全部上清液加入新一代Cleanert® MAS-QuChERS管中（500 mg/15 mL），将MAS管上下晃动30 s，然后涡旋30 s后，8000 r/min离心5 min，取全部上清液（约10 mL）于玻璃试管中，50℃下氮气吹干，加入1 mL乙腈-水混合溶液（97:3）复溶，过0.22 μm微孔滤膜，待测。注：1.做基质加标实验时的标准溶液建议选择以水为溶剂，防止加标瞬间发生蛋白沉淀；2.乙腈提取分4次，为防止乙腈体积过多时沉淀蛋白速度过快，影响提取效果；3.净化液氮气吹干后，如发现有少量油脂，可采用1 mL乙腈：水（97:3）混合溶液复溶，之后加入1 mL正己烷（色谱纯）液液萃取，取下层溶液过0.22 μm微孔滤膜，进样检测。1.3 实验条件1.3.1高效液相色谱法（HPLC法）：色谱柱：Venusil® HILIC（5 μm，100 Å，4.6 × 250mm）；流动相： 10 mmol/L乙酸铵（pH=4.0）：乙腈=15: 85；波长：220 nm；进样量：10 μL；柱温：30℃；流速：0.8 mL/min。1.3.2 LC-MS/MS法：（1）色谱条件：色谱柱：Venusil® HILIC（ 5 μm，100 Å，2.1 × 150mm）；流动相：A：0.5 mmol/L乙酸铵（pH=4.0）B：乙腈；*备注：本文曾尝试过多种C18色谱柱，对双氰胺没有保留，需要使用离子对试剂，但是无法用于LC-MS/MS；也曾尝试过MERCK ZIC-HILIC柱，但是得到双氰胺的峰面积偏差较大，分析原因是其具有阳离子交换基团，对双氰胺有不稳定的死吸附。最后确定使用键合丙基酰胺的Venusil HILIC柱，以亲水作用色谱机理对双氰胺进行保留。（2）质谱条件：质谱仪：AB SCIEX API 4000+；离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；CAD：8.00；CUR：20.00；GS1：60.00；GS2：50.00；IS：5500.00；TEM：600.00。注：带“____”的监测离子对为定量离子对。2 结果与讨论2.1 高效液相色谱法：2.1.1双氰胺的液相色谱图2.1.2实际样品基质加标的线性关系和检出限准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为标准贮备液；分别称取1g奶粉试样，添加一定量标准溶液，配制成含双氰胺为0.5μg/g，1μg/g，2μg/g，5.0μg/mL和10μg/g的添加样品，按照上述提取、净化方法操作，所得净化液按照上述色谱条件，依次进样检测。以双氰胺含量为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见表4：2.2 LC-MS/MS法2.2.1双氰胺的LC-MS/MS图XIC of +MRM (2 pairs): 85.100/68.100 Da from Sample 19 (10ppb+_new) of 20130128.wiff (Turbo Spray)Max. 8.9e4 cps.0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.5Time, min0.05000.01.0e41.5e42.0e42.5e43.0e43.5e44.0e44.5e45.0e45.5e46.0e46.5e47.0e47.5e48.0e48.5e48.9e4Intensity, cps2.252.2.2实际样品基质加标的线性关系和检出限准确称取双氰胺标准品50 mg于50 mL容量瓶中，加水溶液并稀释至刻度，作为标准贮备液； 分别称取1 g奶粉试样，添加一定量标准溶液，配制成含双氰胺为5 ng/mL，10 ng/mL，50 ng/mL，100 ng/mL和200 ng/mL的添加样品，按照上述提取、净化方法操作，所得净化液按照上述液质条件，依次进样检测。以双氰胺含量为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见表6： 表6 双氰胺线性方程和定量限（LC-MS/MS法）

茚虫威杂质制备案例PP10071应用及技术服务部摘要：本实验采用Cheetah MP200中压制备仪器结合紫外检测器的方法，选择Flash C18（20-35 μm，100 Å，12 g）填料对茚虫威中杂质进行了纯化。结果表明：样品在紫外波长271 nm 下，流动相为水和乙腈，进行洗脱，能够有效分离，且峰性良好。关键词：Cheetah MP200；茚虫威杂质；Flash C18色谱柱前言茚虫威是新近开发生产的一种杀虫剂。可有效防治粮、棉、果、蔬等作物上的多种害虫。茚虫威中含有少量杂质需要建立一个分离方法将此杂质分离做结构确证。实验部分仪器、试剂与材料主要仪器设备Cheetah MP200 中压制备仪器试剂材料甲酸、乙腈为色谱纯； 水为去离子水高效液相色谱柱：Flash C18 20-35 μm，100 Å，12 g茚虫威样品：客户提供样品前处理样品是白色粉末，取100 mg 样品用乙腈稀释至1 mL，用0.22 μm 滤膜过滤后上样制备条件色谱柱：Flash C18 20-35 μm，100 Å，12 g 三支串联；流动相：A：水 B：乙腈；检测器：271 nm流 速：15 mL/min进样量：50 mg梯 度：检测条件色谱柱：Innoval ODS-2 10 μm，100 Å，4.6 × 250 mm；流动相：A：0.1%甲酸水溶液 B：乙腈；检测器：271 nm流 速：1 mL/min进样量：5 μL梯 度：结果与讨论本实验采用Flash C18 (20-35 μm，100 Å，12 g)对茚虫威中杂质进行了制备，由表2 及图1 可知，流动相为水和乙腈，进行梯度洗脱时，样品通过制备，峰形良好，所得产物纯度满足客户需求。结论本实验采用Flash C18 (20-35 μm，100 Å，12 g)色谱柱对茚虫威中杂质进行了制备。结果表明Flash C18 填料对该样品分离效果良好，所得产物纯度能够满足客户要求。