天然有机物总氮含量的测定方法

一、实验原理

 天然有机物（如蛋白质和氨基酸等化合物）的总氮量通常用微量凯氏定氮法（micro-kjeldahl method）来测定。

当被测的天然含氮化合物与浓硫酸共热时分解出氨，氨与硫酸反应生成硫酸铵，此过程称为消化。由于消化过程进行缓慢，实验中常添加硫酸钾和硫酸铜的混合物来促进，硫酸铜是催化剂，硫酸钾可提高消化液的沸点。氧化剂过氧化氢也能加速反应。消化完成后，在凯氏定氮仪中加入强碱碱化消化液，使碳酸铵分解出氨。用水蒸汽蒸馏法将氨蒸入无机酸溶液中，然后再用标准酸溶液进行滴定。

 在微量凯氏定氮法中，常用硼酸-指示剂混合液收集氨，氨与溶液中氢离子结合生成铵离子，使溶液中氢离子浓度降低，指示剂颜色发生改变，然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度，即指示剂变回原来颜色为止。所用无机酸的摩尔数即相当于样品中氨的摩尔数，本法适用范围约为0.2~1mg氨。

   因为蛋白质含氮量通常在16%左右，所以将凯氏定氮法测得的含氮量乘上系数6.25，便得到该样品的蛋白质含量。

二、实验用品

（一）器材

 （1）微量凯氏定氮仪。

 （2）50ml凯氏烧瓶，100ml锥型瓶，50ml酸式滴定管，100ml量筒，100ml容量瓶，

      100ml烧杯，酒精灯。

（二）试剂

   （1）无水乙醚（AR）

   （2）粉末硫酸钾-硫酸铜混合物：K2SO4:CuSO4.5H2O=3:1、6：1或10：1。

   （3）40%（W/V）NaOH溶液。

   （4）4%（W/V）硼酸溶液。

   （5）0.01mol/L标准盐酸（用硼砂标定）：吸取分析纯HCL（比重1.19，约12mol/L）8.5ml，用蒸馏水稀释至1L，贮于试剂瓶中待标定。准确称取3份干燥的硼砂，每份0.381~0.383g分别放在150ml三角瓶中，加入20ml蒸馏水使其溶解，加入3滴甲基红指示剂（0.1g甲基红溶于250ml水中），用待测的盐酸滴定至橙红色为止，记下盐酸的滴定体积，通过计算即可知道盐酸的准确浓度：