天美中国- 新冠病毒核酸提取以及检测解决方案---安全保证（人员、样品、环境）

2020年2月5日，国家卫生健康委员会发布了《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第五版）》 ，方案中指出新冠肺炎经呼吸道飞沫和接触传播是主要的传播途径，气溶胶和消化道等传播途径尚待明确。确诊病例需要以下病原学证据之一：1.呼吸道标本或血液标本实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性；2.呼吸道标本或血液标本病毒基因测序，与已知的新型冠状病毒高度同源。

     在此次新型冠状病毒疫情中，作为最终确诊的关键性技术，核酸检测发挥了及其重要的作用。但是近期关于如何提高检测的准确性，如何减少假阴性/假阳性以及气溶胶污染等潜在的风险成为困扰检测工作者的重要难题。天美公司在从核酸提取到样品检测提供一系列的完整的解决方案---安全保证、效率优先(建议选用安全柜品牌NUAIRE安全柜，保证人员、环境、样品的安全)

   一、核酸提取：

  作为核酸检测的起始步骤，病毒核酸能否被高效安全的从样本中提取出来，将会成为整个核酸检测至关重要的一步。在多数核酸提取过程中，操作者将面临如下几类问题：

1.  咽拭子、血清、血浆等上样量不足，约 200μL的上样体积，病毒获得不足，产生假阴性结果；

2. 手工提取过程复杂，步骤繁多(需要多步离心)增加交叉污染概率而导致假阳性结果；

3. 病毒富集效率低、裂解不充分，导致核酸产物收率较低而引起的假阴性结果；

4. 提取产物富含高浓度盐分、有机物等PCR抑制剂残留，纯度低，对后续定量PCR检测产生抑制产生假阴性结果；

5. 提取过程中过度的剪切力将本来含量不高的病毒核酸破环，病毒核酸完整度差，无法作为后续荧光定量PCR模板而导致的假阴性结果；

6. 磁珠法全自动核酸提取仪因磁棒磁力下降导致磁珠残留，重复性差（每个样品粘度不同），进而导致交叉污染出现假阳性/假阴性结果。

解决方案：

     天美生化代理的日本KURABO公司的核酸提取系统，具有30多年的历史，其QuickGene系列拥有专利的超薄多孔滤膜技术，具有如下优势：得率高、片段完整（175bp-97kb）、纯度高、不需离心等优势，针对新冠病毒核酸提取提供两种解决方案：半自动提取型号Mini480系列（可以直接放在安全柜里）和全自动提取型号Auto12S/24S系列。

1. 半自动提取型号Mini480系列

   ------直接放在安全柜里，不需繁琐的离心步骤，保护环境、样品、人员---防止气溶胶等交叉污染

           

2.全自动提取型号Auto12S/24S系列

------其中自动提取仪只需要加入样本（不需手动添加试剂---采用试剂条模式），选择相应的提取程序（具有加热、紫外消毒功能），按下“开始”即可轻松获得得率高、片段完整、纯净的核酸。

二、荧光定量PCR仪：

检测工作者在收获了高质量、低杂质的样本核酸后，荧光定量PCR过程中的检测效率，以及灵敏度、特异性、重复可靠性就成为了获取高质量检测结果最至关重要的因素了。鉴于对荧光定量PCR的个性化需求，天美生化部门提供两种检测模式选择：KURABO单通道便携式定量PCR仪（可以放置在安全柜里）以及英国BJS快速XXpress五通道定量PCR仪。

解决方案：

1. KURABO单通道便携式定量PCR仪        2. 英国BJS快速XXpress五通道定量PCR仪

技术特点：                                    技术特点：

检测通道：单通道（FAM/SYBR荧光通道）         检测通道：5个检测通道；

温控速率：8°C/秒 12分钟（30个循环）           样本通量：24孔(5µL-40µL)、54孔

样品采集类型：透明高分子聚合物芯片              (2µL-15µL)、96孔(1µL-5µL)；

尺寸：宽20×长20×高12.5cm（A4纸大小）        电阻加热：采用分区电阻加热技术；

精确性：±0.1°C；

均一性:<± 0.3°C；

升降温速度：升10℃/秒，降8°C/秒 40个循环时间最快<10分钟；

如有任何其它相关问题，请随时联系天美（中国）科学仪器有限公司。