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为热熔实验提供更快的升温速率——使用 Cary 3500 紫外-可见分光光度计在任意升温速率下获得相同结果

2018/12/17 11:29

阅读:566

分享:
应用领域:
生物产业
发布时间:
2018/12/17
检测样品:
其他
检测项目:
溶解温度
浏览次数:
566
下载次数:
参考标准:
暂无

方案摘要:

升高温度可诱导双链核酸分离为单链。在一定温度下,碱基对之间的氢键发生断裂。热熔实验利用了腺嘌呤-胸腺嘧啶 (A=T) 与鸟嘌呤-胞嘧啶 (GΞC) 核苷酸之间氢键数的差异。由于 GΞC 核苷酸含有三个氢键,解离所需热能大于 A=T 对所需的热能。这表示含有更多 GΞC 对的 DNA 要在更高的温度下才能熔解。熔解温度 (Tm) 可指示样品中的碱基组成(GΞC 与 A=T 的比例)。制造商和研究人员常将 Tm 用作 QC 校验指标。 使用紫外-可见分光光度法测定熔点,利用的是单链核酸在 260 nm 处的吸光度高于双链核酸的原理。图 1 显示了使用小干扰 RNA (siRNA) 样品的示例,与 25 °C 相比,85 °C 下 260 nm 处的吸光度明显更高。

产品配置单:

分析仪器

Agilent Cary 3500 紫外可见分光光度计

型号: Cary 3500

产地: 马来西亚

品牌: 安捷伦

¥30万 - 50万

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方案详情:

升高温度可诱导双链核酸分离为单链。在一定温度下,碱基对之间的氢键发生断裂。热熔实验利用了腺嘌呤-胸腺嘧啶 (A=T) 与鸟嘌呤-胞嘧啶 (GΞC) 核苷酸之间氢键数的差异。由于 GΞC 核苷酸含有三个氢键,解离所需热能大于 A=T 对所需的热能。这表示含有更多 GΞC 对的 DNA 要在更高的温度下才能熔解。熔解温度 (Tm) 可指示样品中的碱基组成(GΞC 与 A=T 的比例)。制造商和研究人员常将 Tm 用作 QC 校验指标。

使用紫外-可见分光光度法测定熔点,利用的是单链核酸在 260 nm 处的吸光度高于双链核酸的原理。图 1 显示了使用小干扰 RNA (siRNA) 样品的示例,与 25 °C 相比,85 °C 下 260 nm 处的吸光度明显更高。

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