2018/09/25 16:35
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产品配置单:
Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色谱系统
型号: 1260 Infinity II Prime
产地: 德国
品牌: 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II Multisampler
型号: 1290 Infinity II Multisampler
产地: 德国
品牌: 安捷伦
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方案详情:
前言
重组单克隆抗体治疗药物(mAb) 是最大的一组治疗性蛋白药物。此类治疗性药物的有效性高度依赖于mAb 正确的糖基化模式,且迄今为止,所有批准的治疗性mAb 均为免疫球蛋白G (IgG) 。人类IgG 的每个重链上均含有一个保守的N 连接糖基化位点[2]。N 连接糖基化是一种极为重要且非常复杂的翻译后修饰,需要在糖蛋白药物开发、加工和生产的每个阶段对其进行控制、监测与了解。此外,治疗性蛋白的安全性、有效性和血清半衰期等特性也会因糖基化模式的不同而受到影响。因此,糖基化模式分析是表征治疗性糖蛋白(尤其是mAb)的一个重要部分。
虽然已有多种不同的方法用于糖基化分析。但是,大部分的方法均基于酶解蛋白,从 mAb 中释放多糖,然后通过标记试剂(例如2-氨基苯甲酰胺,2-AB)进行进一步的衍生化。由于糖基缺少发色团,所以荧光检测前需先采用2-AB(中性)标签标记。而由于标记后的多糖结构极为亲水,因此将亲水相互作用色谱(通常称为HILIC)作为首选的分离技术。采用配合荧光检测的 HILIC 分离是一种非常稳健的糖基化分析方法,同时 HILIC/LC 还可与质谱联用,以获得重要的质量及结构信息。
在本应用简报中,我们介绍了AdvanceBio 糖谱分析色谱柱,这是一种亚2 μm HPLC 色谱柱,具有新型HILIC 酰胺化学技术,用于高通量糖基化分析。与现有的HPLC 色谱柱技术相比,该色谱柱及方法可增强多糖的分离,且减少了40% 的洗脱时间。为了阐释AdvanceBio 糖谱分析色谱柱的实用性,我们以2-AB 标记后的人类IgG N 连接糖链样品为例进行研究。
结论
与其他HPLC 色谱柱技术相比,基于HLIC 的安捷伦AdvanceBio 糖谱分析色谱柱可提供高灵敏度、高效率的糖基化分离且洗脱时间缩短40%。此外,该色谱柱在至少5000 个柱体积以内还具有绝佳的化学稳定性。
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