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利妥昔单抗聚集体和片段的高分离度 SEC 分离与定量分析——Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统和 AdvanceBio SEC 300Å, 2.7 μm 色谱柱
2018/09/11 14:13
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方案摘要：
产品配置单：
Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色谱系统
型号： 1260 Infinity II Prime
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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OpenLAB 软件
型号： OpenLAB
产地： 美国
品牌： 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II Multisampler
型号： 1290 Infinity II Multisampler
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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方案详情：
摘要
单克隆抗体聚集可通过产品和环境因素等多种机制产生。体积排阻色谱(SEC) 是单克隆抗体型治疗药物聚集体和片段含量测定和定量分析的标准方法。本应用简报重点展示强制应激研究中获得的利妥昔单抗生物仿制药和创新药物的完整态、聚集体及片段的高分离度分离与定量分析。其中采用Agilent 1260 Infinity 四元生物惰性液相色谱和Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱进行分离与定量分析，并使用分子量标准品校准色谱柱。AdvanceBio SEC 色谱柱的高灵敏度、高分离度分离适用于监测聚集体/降解物，也是亟需高分离度与高灵敏度的应用的理想选择。
前言
体积排阻色谱(SEC) 是分离治疗性mAb 中单体、低分子量(LMW) 和高分子量(HMW) 异构体的一种常用方法。原始条件下的SEC根据不同分子大小在填料孔隙中的差异化扩散来实现单体及其异构体的分离。mAb 型药物的成功开发还需要评估强制降解研究中产生的聚集体和片段，这类研究中通常采用物理和化学降解途径。由于聚集体与免疫原性息息相关，且会对安全性与药效产生影响，因此分子大小在生物治疗药物的开发中扮演着重要角色。而确定能够分离与监测这些异构体的SEC 方法是一项艰巨的挑战。本文展示了使用SEC 分析中突破性技术— Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱的此类方法的优势。这款色谱柱采用独特的2.7 μm 硅胶填料与键合技术实现mAb 及其质量异构体的高分离度分离。该方法具有出色的保留时间和峰面积精度，证明了色谱柱与所用生物惰性液相色谱系统之间具有适用性。
结论
基于mAb 的产品的开发过程极其复杂，其中涉及大量用于测定纯度、聚集体和其他与产品相关异构体的物理化学表征。体积排阻色谱广泛应用于原始条件下单体、HMW 和LMW 类型的监测与定量分析。本研究采用Agilent AdvanceBio SEC 300Å，7.8 ×300 mm，2.7 μm 色谱柱开发出了一种原始条件下分离完整和应激利妥昔单抗样品的简单方法。优化的方法将单体分离为一个纯度为100% 的单一对称峰，且未出现聚集体或片段迹象。此外，该方法还可对应激研究产生的聚集体和碎片进行分离与定量分析。仅有类似AdvanceBio SEC 这样能够实现mAb 及其质量异构体高分离度与高灵敏度分离的色谱柱才能实现上述分析。此外，Agilent 1260 Inifinity 生物惰性四元液相色谱为生物惰性和耐腐蚀性提供了保证。
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