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分析抗体-药物偶联物的药物结合位点——利用自动化样品前处理与 LC/MS 分析
2018/09/10 14:58
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方案摘要：
产品配置单：
Agilent AssayMAP Bravo 蛋白质样品前处理平台
型号： AssayMAP Bravo
产地： 美国
品牌： 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统
型号： 1290 Infinity II
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II Multisampler
型号： 1290 Infinity II Multisampler
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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方案详情：
前言
结合了单克隆抗体 (mAb) 特异性与细胞毒性分子效能的抗体药物偶联物 (ADC) 已获得了越来越多的关注，它作为一种极具前景的方法可用于实现选择性更强的癌症治疗。由于潜在药物结合位点众多且在这些位点中的占位形式多样，因此 ADC 与未修饰的生物治疗抗体相比具有更高复杂性与异质性。为获得 ADC 分子的完全表征，本研究进行肽谱分析实验以获得关于 ADC 结合位点的详细位点特异性信息。本应用简报介绍了结合采用 Agilent AssayMAP Bravo 样品前处理平台的自动化蛋白质酶解、采用高分辨率精确质量数 Agilent 6550 iFunnel Q-TOF 系统的 LC/MS 分析以及 Agilent BioConfirm 软件的 ADC 肽谱分析工作流程。T-DM1 获得的序列覆盖率为 98.7%。采用药物偶联物可鉴定出 29 个以上的赖氨酸位点。
结论
本文开发出一种用于深入表征抗体药物偶联物的集成化肽谱分析工作流程。实验结果证明，针对 T-DM1 使用 Agilent AssayMAP Bravo 系统可实现稳定而可重现的自动化胰蛋白酶溶液内酶解。利用 Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统可实现出色的质量精度与灵敏度，从而确保全面的序列覆盖与精确的多肽鉴定。Agilent MassHunter BioConfirm 软件可实现自动化数据提取、序列匹配与药物结合位点鉴定。T-DM1 获得的序列覆盖率为 98.7%。所鉴定的多肽涵盖了全部 44 个赖氨酸位点。44 个位点中的 29 个被确定为药物结合位点。所鉴定的额外多肽涵盖了 5 个位点，但无法清晰确定多肽修饰的精确位点。其余 10 个赖氨酸位点的药物结合情况无法得到证实。
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