2018/09/06 14:34
阅读:987
分享:方案摘要:
产品配置单:
Agilent 1260 Infinity II Prime HPLC 液相色谱系统
型号: 1260 Infinity II Prime
产地: 德国
品牌: 安捷伦
面议
参考报价
联系电话
OpenLAB 软件
型号: OpenLAB
产地: 美国
品牌: 安捷伦
面议
参考报价
联系电话
Agilent 1290 Infinity II Multisampler
型号: 1290 Infinity II Multisampler
产地: 德国
品牌: 安捷伦
面议
参考报价
联系电话
方案详情:
摘要
通过聚乙二醇化能够改变治疗性蛋白质的物理化学和生物性质(如提高溶解度、降低免疫原性、延长半衰期以及防止蛋白酶破坏),从而显著提高其价值。体积排阻色谱法 (SEC) 是检测分子量大于聚乙二醇化蛋白质杂质的首选方法。由于聚乙二醇介导的与硅胶固定相的相互作用会导致回收率降低、峰形变差以及过度拖尾,因此聚乙二醇化蛋白质的 SEC 分析面临着很大挑战。本应用简报描述了一种用于检测聚乙二醇粒细胞集落刺激因子 (PEG GCSF) 的简单而灵敏的 SEC 方法。采用 AdvanceBio SEC, 130Å, 7.8 × 300 mm, 2.7 μm 色谱柱在水相流动相下进行 PEG GCSF 的分离和定量分析。线性曲线在 12.5-2000 μg/mL 的范围内具有优异的相关系数,表明该方法适用于定量分析。该方法具有出色的保留时间和峰面积精度,证明了该方法的适用性。此外,AdvanceBio SEC 还可对强制应激研究中得到的聚集体进行分离与定量分析。
前言
聚乙二醇化是聚乙二醇 (PEG) 聚合物链与另一个分子发生共价结合的过程,另一个分子通常是药物或治疗性蛋白质。将 PEG 的活性衍生物与目标大分子共同温育通常可实现聚乙二醇化。PEG 基团具备的多项优势有助于提高蛋白质稳定性并延长体内的循环半衰期。美国食品药品监督管理局 (FDA) 已批准 PEG 为公认安全物质。目前已有集中聚乙二醇化产品通过了 FDA 的审批。聚乙二醇粒细胞集落刺激因子 (PEG GCSF) 是一种长效的重组 GCSF,其中含有 GCSF 以及 20 KDa 与甲硫氨酸残基 N 端共价结合的聚乙二醇分子。GCSF 是一个含有 175 个氨基酸的蛋白质,分子量为 18800 道尔顿。PEG GCSF 的总分子量为 39 KDa。各论草案方法推荐使用体积排阻色谱 (SEC) HPLC 测定 PEG GCSF 和更高分子量聚集体的纯度。多数针对 PEG GCSF 的已发布方法采用含有 100 mM NaCl、85% 磷酸以及最多 10% 乙醇的水相流动相以减少非特异性相互作用并改善峰形和分离性能。聚集体有时会比自然形态更易于与固定相结合,因此治疗性蛋白质的不理想吸附是 SEC 分析过程中的一个主要问题。由于这一优先结合趋势,聚集体的 SEC 分析往往并不准确,甚至存在无法检出的风险。使用含有机溶剂或极端 pH 的流动相可解决这一问题,结果表明这种流动相能够提高分离度和回收率。然而,除可能会使可逆聚集体解离外,这种流动相还可能会使配方缓冲液中不可逆的聚集体发生解离。
本文展示了用于 SEC 分析的突破性技术 Agilent AdvanceBio SEC, 130Å, 7.8 × 300 mm, 2.7 μm 色谱柱的优势。这款色谱柱采用创新型硅胶填料和特有的亲水键合技术,可使各种样品均获得出色的分离度和体积分离,且无需向流动相中添加有机改性剂。
结论
本应用简报证明了采用 PEG GCSF 作为模型蛋白质进行聚乙二醇化蛋白质分析的几个出色的解决方案。文中开发出了一种采用 Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱,无需在流动相中添加有机改性剂即可监测 PEG GCSF 纯度的简单 SEC HPLC 方法。该方法具有优异的 RT 和峰面积 RSD,并能满足 PEG GCSF 系统适用性要求。PEG GCSF 的 LOD 和 LOQ 分别为 3.125 μg/mL 和 12.5 μg/mL,表明该分析方法具有较高灵敏度。12.5-2000 μg/mL 的 8 个标准偶合物浓度的线性曲线具有极佳的线性相关系数值,表明该方法可实现准确定量分析。此外,治疗性 PEG 蛋白质的应激研究还表明 AdvanceBio SEC 色谱柱可对聚集体进行分离和检测,并能根据峰面积比进行定量分析。将这一简单的重现方法与仪器的生物惰性和耐腐蚀相结合,可使这类解决方案成为生物制药研究中聚乙二醇化蛋白质 QC 分析的可靠适用方法。
下载本篇解决方案:
更多
Agilent Vaya 手持式拉曼光谱仪的 不透明容器分析能力
本研究通过对蓝桶内的一系列常见辅料和活性成分进行测量,展示了 Agilent Vaya 手持式拉曼光谱仪穿透不透明容器的分析能力。空间位移拉曼光谱 (SORS) 是安捷伦特 有的技术,是独特的 Vaya 容器扣除算法的基础。这项技术能够优化扣除光谱中的容器干扰,从而提供清晰的内容物特征。直接穿透塑料桶验证原辅料的能力,提供了在仓库中高效执行原辅料鉴定 (RMID) 的工作流程,且无需专业人员或受控的采样环境。
制药/生物制药
2024/08/20
使用 Agilent 8890 气相色谱和 TCD/FID 系统分析氢气中的氦气、 氩气、氮气和烃类杂质
在本应用简报中,我们采用 Agilent 8890 气相色谱 (GC) 系统,通过气体进样阀进样、毛细管柱分离和火焰离子化/热导检测器 (FID/TCD) 分析了氢气 (H2) 中的氦气(He)、氮气 (N2)、氩气 (Ar) 和烃类 (HC) 杂质,评价了系统重复性、灵敏度和线性。出色的测试结果表明,8890 气相色谱系统能够实现目标分析物的准确、高精度分析。此外,该系统还适用于根据 ISO 14687-2019 和 GB/T 37244-2018 等不同法规对燃料电池汽车用燃料氢气进行质量控制。
能源/新能源
2024/08/16
使用 Agilent InfinityLab 在线液相色谱 系统实现对流动化学反应器中反应过 程的实时监测
本应用简报介绍了 Agilent InfinityLab 在线液相色谱解决方案与流动化学反应器结合使用的能力。高度准确的直接进样和采样模式可实现不同反应参数对整体反应及其特性影响的测量。采样和分析由安捷伦在线液相色谱监测软件全面协调控制,该软件能够以安全、经济的方式实现实验监测的全自动化。
石油/化工
2024/08/12
使用配备氦气节省模块以进行载气 切换的 Agilent 8850 气相色谱系统 分析香草提取物的方法转换
在全球的香料公司中,分析和了解香精与香料物质的成分是质量控制 (QC) 和研发(R&D) 实验室工作的核心。本应用简报重点介绍了 Agilent 8850 单通道气相色谱仪的性能,它成功实施了用于详细分离研发实验室中所用香料的常用但耗时较长的气相色谱方法,以及适用于 QC 分析的快速方法。安捷伦方法转换软件为用户提供了在研发和 QC 等实验室之间转换色谱方法的简单工具。
食品/农产品
2024/07/29