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用于 2D-LC/MS mAb 分析中在线脱盐的 Agilent AdvanceBio 脱盐反相小柱
2018/09/04 17:04
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方案摘要：
产品配置单：
Agilent 1290 Infinity II 二维液相色谱解决方案
型号： 1290 2D-LC
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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OpenLAB 软件
型号： OpenLAB
产地： 美国
品牌： 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II Multisampler
型号： 1290 Infinity II Multisampler
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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方案详情：
摘要
本应用简报介绍了在第二维中使用脱盐小柱并利用 2D-LC/MS 配置进行单克隆抗体 (mAb) 的脱盐和表征。第一维分离中使用了离子交换 (IEX) 和亲和色谱（主要是基于盐的洗脱条件）。在第二维中，在进行质谱分析之前使用 Agilent AdvanceBio 脱盐反相小柱对馏分脱盐。结果表明脱盐小柱具有出色的性能，可提供高质量的质谱数据。
前言
单克隆抗体 (mAb) 治疗性药物是制药行业中一个不断发展的领域。这些分子的性质十分复杂，且在开发过程和整个生命周期中经历了各种酶或化学修饰。这些修饰会造成异质性，包括裂解、翻译后修饰 (PTM)、降解、聚集和序列变异。因此，必须通过全面的理化表征确保产品的安全性、质量和药效。多维液相色谱 (2D-LC) 与质谱 (MS) 的联用技术是表征不同 mAb 异构体的最佳分析技术。亲和、离子交换 (IEX) 和体积排阻色谱 (SEC) 等技术常用于第一维分离。这些液相色谱技术中采用的典型流动相为水相，并含有与质谱检测不兼容的非挥发性盐分。为了鉴定这些通过质谱实现分离的色谱峰，在第二维中采用了在线脱盐方法。
本应用简报介绍了使用 AdvanceBio 脱盐反相小柱作为在线脱盐柱在第二维中对 mAb 进行分析。第一维液相色谱使用 IEX 表征电荷异构体，此外，使用 Protein A 色谱柱的亲和捕获功能对不同 mAb 样品（包括创新药物和生物仿制药）进行分析。结果表明 Agilent AdvanceBio 脱盐反相小柱具有出色的性能，可提供高质量的质谱数据。
结论
本研究展示了安捷伦二维液相色谱系统与安捷伦生物色谱柱联用进行 mAb 表征的工作流程解决方案。这一目的可通过在第一维中应用电荷异构体或蛋白质亲和捕获，然后在第二维中的质谱分析之前使用 Agilent AdvanceBio 脱盐反相小柱实现。结果表明，使用 AdvanceBio 脱盐反相小柱可实现高效的在线脱盐。
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