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提高 PTM 分析中肽谱分离的质量
2018/08/28 15:42
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方案摘要：
产品配置单：
Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统
型号： 1290 Infinity II
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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Agilent 6545XT Q-TOF 液质联用系统
型号： 6545XT
产地： 新加坡
品牌： 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II Multisampler
型号： 1290 Infinity II Multisampler
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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方案详情：
前言
单克隆抗体 (mAb) 等蛋白质的翻译后修饰 (PTM) 是确定药品有效性和安全性的关键质量属性 (CQA)。分析技术的进步加快了 PTM 表征这项艰巨任务的速度。在生物制药行业，肽谱分析是蛋白质鉴定的常用方法。其中包括通过酶解生成肽片段，然后进行液相色谱 (LC) 分离、检测和肽段鉴定。肽谱分析与质谱 (MS) 检测联用，可鉴定单个氨基酸变化和 PTM。LC/MS 是 PTM 分析的首选技术。但由于蛋白质酶解物较为复杂，肽谱分离始终是一项具有挑战性的工作。高分离度和可靠的肽谱分离是可靠鉴定 PTM 的关键。目前的 LC/MS 方法中，采用质谱兼容的甲酸 (FA) 离子对试剂法，信号强度要优于其他改性剂。但 FA 的缺点是，与多种 C18 固定相配合使用时峰形较宽并会出现拖尾峰，从而导致肽对发生共洗脱。表征 PTM 时，需要对复杂的胰蛋白酶酶解物中经过修饰和未经修饰的肽进行高分离度液相色谱分离。肽保留和 MS 信号分别会受到所选反相液相色谱柱和流动相离子对试剂的影响。因此，选择正确的液相色谱柱对于提高含 PTM 肽的分离度至关重要。
我们之前的研究证明，使用 Agilent AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱可提高肽的分离度。这款色谱柱的特点是表面带正电荷以及采用 C18 固定相，能够高效分离肽，获得较窄的峰形。在本研究中，我们评估了 AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱对含 PTM 肽的分离效果。将这款新型电荷杂化/C18 杂化表面多孔色谱柱与 Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 系统联用，可对治疗性 mAb 进行肽谱分析。AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱性能卓越，可实现高效肽谱分离，而且质量准确度高，能够生成序列覆盖率高的 mAb 肽谱。
结论
• 本应用简报展示了使用 Agilent AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱能够实现稳定可靠的肽谱分析
• 在高分离度且高效分离 mAb 肽谱的同时，序列覆盖率 > 99%
• AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱能够很好地分离出肽峰，从而显著提升肽谱分离效果
• 使用 AdvanceBio Peptide Plus 色谱柱配合安捷伦精确质量数 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF，可实现对 PTM 的精确表征
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