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采用 LC/MS/MS 法同时定量分析人血清中 20 种抗癫痫药物
2018/08/27 15:38
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方案摘要：
产品配置单：
Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统
型号： 1290 Infinity II
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II Multisampler
型号： 1290 Infinity II Multisampler
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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方案详情：
摘要
由于抗癫痫药物种类繁多，而且这些药物在人血清中的浓度可能差异很大，导致监测抗癫痫药物非常具有挑战性。因此，用于这些药物的高品质分析必须能够在多个数量级内同步监测多种化合物。液相色谱-质谱 (LC/MS/MS)法就特别适用于这种分析。为了定量分析人血清中 20 种抗癫痫药物，开发了一种灵敏度高、特异性好的方法。该方法通过一种简单的蛋白质沉淀/稀释方案配制样品。可在较宽的动态范围内定量分析物，精确度、重现性以及 R2 值都非常出色。
前言
液相色谱-质谱 (LC/MS/MS) 检测方法的主要优势在于其可在一次进样中同时监测多种分析物。本研究使用 LC/MS/MS 分析方法来定量分析人血清中的一组 20 种抗癫痫药物。与此相反，由于相似分析物之间的浓度差异较大，以往的分析通常只能监测少数几种化合物。该组中的化合物包括：乙酰瑞替加滨、卡马西平-10,11-环氧化物、卡马西平、10,11-二氢-10-羟基卡马西平、非氨酯、加巴喷丁、拉科酰胺、拉莫三嗪、左乙拉西坦、奥卡西平、苯巴比妥、苯妥英、普瑞巴林、瑞替加滨、卢非酰胺、噻加宾、托吡酯、丙戊酸、氨己烯酸和唑尼沙胺。分析方法使用 Agilent 6460 三重四极杆质谱仪在宽浓度范围内同时检测这些化合物。各种分析物的校准浓度范围为 12 ng/mL 至 200000 ng/mL。高浓度范围为 1.5 μg/mL 至 200 μg/mL。
通过将药物标准品加标到空白人血清中配制样品。按照简单的蛋白质沉淀方案配制用于分析的样品和对照，然后用水稀释。进样、分离分析物、清洗色谱柱和重新平衡色谱柱在 10 分钟内完成。对 20 个目标化合物中每个化合物（包括丙戊酸）的两个离子对进行监测。使用 15 个同位素标记内标来显示差异抑制，并确保色谱图定量结果的准确性和重现性。另外还对磷脂的离子对进行监测，以验证这类内源性分子的干扰最小。
校准曲线准确度在最低校准浓度下在预期浓度的 20% 内，在较高浓度下在 15% 内。重现性良好，CV 均小于 15%，甚至大部分还小于 10%。所有 R2 值均大于 0.997，其中一些化合物在浓度范围内呈现线性响应，而其他化合物则需要二次拟合。
结论
本研究开发了一种可同时定量分析人血清中 20 种抗癫痫药物的准确、可重现且可靠的 LC/MS/MS 分析方法。但仍需进一步研究来更好地理解基质干扰效应，该效应可能影响该组中任何药物的定量结果。另外，还需要对不同来源的流动相组分和其他来源的样品加以分析。
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