奶制品中复原乳的鉴定方法： 使用超高效液相色谱法分析奶制品中的糠氨酸

摘要

本文采用 Agilent 1290-II 四元梯度液相色谱系统，结合具有表面多孔填料的 Agilent Poroshell 120 SB-C18 色谱柱，在农业部行业标准《巴氏杀菌乳和 UHT 灭菌乳中复原乳的鉴定》(NY/T 939-2016) 的基础上建立了快速、高灵敏度分析奶制品中糠氨酸 (Furosine) 的超高效液相色谱 (UHPLC) 方法。该方法可分析不同基质奶制品中的糠氨酸，分析速度快、分离效果好，且杂质对分析的影响小。

前言

糠氨酸的含量测定是奶制品的评测方法之一。大量文献表明，奶制品经高温处理后品质会受到不同程度的影响，而糠氨酸正是奶制品经高温处理后发生美拉德反应的产物，因此测定奶制品中糠氨酸的含量是衡量其经高温处理后变化程度的手段之一。通常情况下，采用巴氏灭菌法消毒的奶制品因处理温度不高且处理时间不长等因素，而与未经处理的原奶相似，其中的糠氨酸含量较低，而成品奶粉因处理方式不同等原因，糠氨酸含量高很多。因此在农业部行业标准中，将糠氨酸的含量测定作为区分巴氏杀菌乳和 UHT 灭菌乳中复原乳的手段之一。

糠氨酸的极性很强，在普通反相 C18 色谱柱上的保留不好，不容易与经强酸处理后产生的大量极性杂质分离。因此所用色谱条件比较特殊，需要使用离子对试剂或极低比例的有机相才能勉强分离极性杂质。而使用离子对试剂又会对色谱柱造成很大伤害，导致色谱柱变性并降低方法的一致性。而有机相比例低的色谱条件则需要特殊的耐水性色谱柱及高性能色谱仪器配合。这给糠氨酸的测定带来了困难。

安捷伦标志性的 SB-C18 是业界非常广泛使用的耐酸色谱填料，而采用表面多孔填料技术的 Poroshell 120 硅胶基质是一种先进的超高效色谱基质，可在压力升高不多的同时实现柱效的极大提升。相比离子对试剂，在采用超高效液相色谱法分析糠氨酸时使用 Poroshell 120 SB-C18 色谱柱，将对行业标准的推广带来巨大利益。

结论

本实验使用 Poroshell 120 SB-C18 色谱柱，在农业部行业标准的基础上建立了准确、快速、重现性好的奶制品中糠氨酸分析的超高效液相色谱方法。该方法使用性能优异的 1290 Infinity II 四元梯度泵，或全新的 1260 Infinity II Prime 泵，在 0%-5% 的低比例有机相梯度条件下仍能保持很好的重现性。相比行业标准在超高效液相色谱方法中施行的等度条件，该方法具有更高的灵敏度，每次进样均采用高比例有机相冲洗杂质并进行平衡，可有效除去干扰杂质、避免杂质对分析的干扰，从而延长色谱柱的寿命，并使总分析时间缩短。使用流通式自动进样器后，无需用强有机溶剂清洗针内部，因此可以采用纯水作为针外壁及针座的清洗溶液，有效避免了样品中的高浓度盐酸对进样器针座的腐蚀。