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重组蛋白表征——电荷异构体分析
2018/08/02 16:03
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方案摘要：
产品配置单：
Agilent 7100 毛细管电泳系统
型号： 7100
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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Agilent 1260 Infinity II 液相色谱系统
型号： 1260 Infinity II
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II Multisampler
型号： 1290 Infinity II Multisampler
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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方案详情：
在生产和纯化过程中，蛋白质能表现出多种电荷异质性改变。这些变化不仅影响稳药物的定性，也影响活性，而且还可能导致有害的免疫反应。所以，开发和生产过程中蛋白药物的电荷异构体分析非常关键。电荷变异体的表征通常是用等电聚焦或离子交换色谱进行的。
等电聚焦(IEF) 通过等电点(PI) 进行蛋白质的分离，常规用于重组蛋白电荷异构体的指纹图分析。与传统的平板凝胶等电聚焦电泳相比，毛细管等电聚焦电泳 (cIEF)具有更高的分离度、分析速度，定量能力和自动化性能（图1）。
基于游离胶的溶液内等电聚焦技术利用固定化的pH 梯度实现蛋白质混合物的分级分离。相对于传统的凝胶电泳，溶液中的样品更容易被回收，便于后续应用，如粒度分析或液质分析。安捷伦的OFFGEL 系统可以进行基于等电点(PI) 的多肽和变性以及未变性蛋白质的分级分离，分辨率高达0.1 pH 单位。该技术能使约80% 的组分进入溶液中，20%留在胶条上，所以它是一个定性技术，而不是定量技术。
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