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采用 Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 对单克隆抗体进行三个不同层次的糖基化分析
2018/06/15 16:57
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方案摘要：
产品配置单：
Agilent AssayMAP Bravo 蛋白质样品前处理平台
型号： AssayMAP Bravo
产地： 美国
品牌： 安捷伦
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Agilent 6545XT Q-TOF 液质联用系统
型号： 6545XT
产地： 新加坡
品牌： 安捷伦
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Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统
型号： 1290 Infinity II
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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方案详情：
前言
单克隆抗体 (mAb) 及其衍生物代表一类非常重要的生物分子，它们具有广泛的应用。随着 mAb 产品越来越多地被批准上市及其近年来销售量的不断增长，对其进行全面分析表征的需求也逐渐增加。mAb 本质上是异质性分子，其中包括多种类型的序列、修饰和结构异构体。蛋白糖基化是 mAb 中一种主要的翻译后修饰 (PTM)，在多个生物学过程中起到重要的作用。与 mAb 分子连接的糖链的分布和组成可影响疗效和免疫原性；治疗性 mAb 中与糖基化有关的一致性质量控制已成为药物生物处理中的首要环节。
四极杆飞行时间 (Q-TOF) 液相色谱/质谱 (LC/MS) 系统因其在高质量范围内仍具有极高的质量数准确度和分辨率，已广泛用于分析完整 mAb 和 mAb 亚基，进行 mAb 肽序列谱分析，以及表征 PTM。
结论
我们开发了一套完整的抗体糖型表征工作流程解决方案，方案中整合了 Agilent AssayMAP Bravo 液体处理平台、UHPLC 技术、Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 和 Agilent MassHunter BioConfirm 软件。该方法为用户提供了灵活的工作流程，可在四个不同分析水平
进行糖链的相对定量分析：
• 完整 mAb 工作流程实现了对完整mAb 中主要糖型的快速评估，可轻松监测和比较同一样品不同时间点或不同批次样品的同一糖型；
• mAb 亚基工作流程可为 G0F、G1F和 G2F 等单个糖链提供详细定量信息。该工作流程整体通量高，是实现多数 mAb 及其异构体（包括双特异性 mAb）准确质量数测定的理想方法；
• 采用肽谱分析工作流程进行的糖肽分析不仅可以实现糖链相对定量，还可获得 N-糖基化位点的信息。Agilent AdvanceBio 糖谱分析 (HILIC) 色谱柱显示出对亲水性糖肽的强保留性和高
分离度；
• 释放糖链工作流程采用荧光和质谱检测，为糖链分析提供高分析灵敏度和最佳定量分析。出色的糖链（G1F 异构体）分离以及 BioConfirm B.09.00 中提供的糖链数据库，均有利于实现准确的糖谱分析，包括鉴定与相对定量；
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