终点PCR(End Point PCR)是一种传统的PCR方法,其特点是在PCR反应完成后进行分析和检测。通常,终点PCR用于定性分析,即判断是否存在特定的目标序列。完成PCR反应后,需要通过凝胶电泳或其他分子生物学技术来验证扩增是否成功,经常在检测样品中的特定DNA或致病基因等情况下使用。传统琼脂糖凝胶电泳技术中终点PCR的反应时长通常为1-2 小时,从制备琼脂糖凝胶到获得结果大约需要3 小时甚至更长时间。
岛津微芯片电泳装置MultiNA是一款可以全自动执行与琼脂糖凝胶电泳相同分析的分析装置。无需制备凝胶,只需将专用试剂盒和分析样品装入设备即可进行分析。使用岛津微芯片电泳装置MultiNA仅需10-15 分钟即可以完成从试剂制备到样本收集等的分析前准备工作。
应用案例
岛津微芯片电泳装置MultiNA的终点PCR高速分析
本文介绍采用Promega公司的GoTaq Rapid PCR Master Mix和Eppendorf公司的Mastercycler X50s Thermal cylcer扩增PCR产物,利用岛津微芯片电泳装置MultiNA进行的终点PCR分析。
1样品配置及分析条件
PCR材料使用了50 ng的Human genomic DNA,PCR扩增目标是Human Beta-2-microglobin。试剂使用了Promega公司的GoTaq Rapid PCR Master Mix (图1A) ,PCR反应中使用了Eppendorf公司的Mastercycler X50s Thermal cycler (图1B) ,PCR的Cycling setting(表1)所示。PCR反应在n=3下进行。
2通过MultiNA测定PCR产物
利用岛津微芯片电泳装置MultiNA对PCR产物进行了分析。分析荧光色素使用SYBR Gold, MultiNA专用试剂盒和DNA-1000试剂盒 (表2) 。
3分析结果
通过微芯片电泳结果,我们能够确认从Human genomic DNA靶向的HumanBeta-2-microglobin区域的扩增为200 bp, 600 bp, 1000 bp和更高的1400 bp (图2) 。其中200 bp、600 bp和1000 bp,可以清楚地确认扩增DNA,1400 bp的扩增产物相比较少,主要可能是由于PCR扩增效率较低。但与琼脂糖凝胶电泳+溴化乙锭染色相比,MultiNA的荧光检测灵敏度高出一个数量级。因此我们也认为本次检测成功地检测出了1400 bp的扩增产物。
4总结
本次,通过使用Promega公司的GoTaq Rapid PCR Master Mix作为PCR的反应试剂,使用Eppendorf公司的Mastercycler X50s进行终点PCR, PCR的反应仅用了13 分钟30 秒就完成。此外,PCR产物通过岛津微芯片电泳装置MultiNA进行全自动分析,无需制备凝胶。无论样本数量多少,MultiNA在大约10 分钟到15 分钟内即可完成从试剂制备到样本收集的分析前准备工作,并开始电泳,并且分析开始后,用户只需等待结果无需人工操作。
通过结合使用GoTaq Rapid PCR Master Mix、Mastercycler X50s和岛津微芯片电泳装置MultiNA,可以大大缩短终点PCR所需的时间,并减少人工操作环节。
关联仪器:岛津微芯片电泳装置MultiNA
①. 高速分析:最多108 个样品的高速自动分析操作
②. 高灵敏度:灵敏度约高于使用溴化乙锭染色法电泳胶片的10 倍
③. 高分辨率:可以解决琼脂糖凝胶电泳难以分离的碎片
④. 高重现性:通过内标的自动混合与共迁移,实现高重现性
⑤. 成本低廉:每次分析完成后,所有管线及微芯片自动清洗,微芯片可重复利用
本文内容非商业广告,仅供专业人士参考。
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