核酸外切酶I(E.coli)

核酸外切酶I(E.coli)

商品属性：

 产品介绍：

描述：该酶具有从 3’-5’ 方向降解单链 DNA 的外切酶活性，能够逐步释放脱氧核糖核酸 5'单磷酸，并留下完整的 5'端二核苷酸。该酶来源于携带有 E. coli exo I 基因的质粒，经重组表达纯化而得。该酶多用于 PCR 扩增后降解消化引物，该酶对于双链 DNA 和磷酰或乙酰基团封闭的 3’OH 末端 DNA 链无活性。

应用：

从 PCR 混合物中去除引物PCR 产物测序之前用于在单管中使用大引物进行的PCR 诱变反应从核酸混合物中去除含有 3'羟基末端的单链 DNA检测含有 3'羟基末端的单链 DNA 的存在
储存：-20℃可保存 3 年。
活性定义：1 单位指在 37°C 条件下，30 分钟内催化释放10 nmol 的酸溶性核苷释放所需要的酶量。

注意事项：

（1）1×ExoI Buffer：67mM Glycine-KOH pH 9.5，6.7mMMgCl2，10mM 2-巯基乙醇。该酶在常规 PCR Buffer 中也具有活性。
（2）该酶的最佳反应温度为 37°C，80°C 20min 可失活。
（3）该酶不能切割双链 DNA，因此含有二级结构的单链DNA 需要变性后才能完全消化。  

pcr相关试剂实验结果分析：

PCR实验结果的分析涉及多个方面，‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等，‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：‌

循环次数过多：‌增加模板量减少循环次数，‌缩短退火时间及延伸时间，‌或改用两种温度的PCR循环，‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低：‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增，‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题：‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题，‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题：‌运输储存不当可能引起试剂盒失效，‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板：‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果：‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果，‌需要注意以下几点：‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染，‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析，‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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