Super ECL Substrate

Super ECL Substrate

商品属性：

 产品介绍：

描述：

超敏 ECL 显色液用于 Western、Northern 和 Southernblot 分子杂交的化学发光检测，比传统化学显色法灵敏度高，可达 pg 水平。原理是采用新型发光底物（Luminol），其与辣根过氧化物酶反应时产生很强的发光信号，在暗室中对X-光片感光，以此检测微量蛋白而获得理想的实验结果。海基增强型 ECL 显色液具有灵敏度高，持续时间长等特点。

应用
在 Western 印迹分析，核酸杂交以及 EMSA 实验中，HRP标记的二抗或探针与靶分子结合再与底物反应产生可见光。
储存：2-8°C，Super ECL A 要求避光保存。   

操作方法：

1．按每平方厘米膜面积用 0.1-0.2 ml 配置显色液：根据显色液的需要量，取等体积 A 液和 B 液，混匀后避光保存备用；该显色液必须现配现用。
2．2. 取出膜，平放在干净的保鲜膜上，膜的正面（蛋白质面）朝上，在膜的中央加适量的配置好的显色液（6×8 cm 的膜加 2 ml 显色液），溶液向四周迅速扩散，覆盖所有膜面。室温保温 5 分钟左右，在此过程中请仔细观察信号的出现。注意：如果信号强，在暗室中能很快看到阳性信号出现。
3．3. 待信号出现且稳定后，用镊子夹起膜，除去多余的显色液，平放在干净的保鲜膜上，膜的正面（蛋白质面）朝上，在转移膜的上面再覆盖一层保鲜膜，除去保鲜膜与转移膜之间的空气泡，请务必保证保鲜膜是干净的，不被其他杂物或液体污染。
4．4. 在暗室中，将膜的正面对着 X-光片，放入暗盒。第一次曝光时间在 1 分钟左右(有经验的操作者可以根据信号的强弱自行决定)，立即按要求对 X-光片进行显影和定影，确定最佳曝光时间。曝光时间从数秒到数小时不等；特别弱的过夜曝光也可。

注意事项：

1.PVDF 膜较硝酸纤维膜能更好的结合蛋白，因此呈现较强的信号。选高质量的 PVDF 膜；尽可能不用 Nylon 膜。
2.2.与抗体结合以后，要保证膜处于湿润状态，否则会导致背景较高。
3.3.没有信号的原因：有些抗体不识别变性抗原，有时需要考虑电泳过程对蛋白质结构的影响；样品中无待测蛋白质或含量过低；一抗效价低，用量少，可适当增加一抗的用量；
4.4.背景过高原因：转移膜封闭不充分；与抗体孵育后洗涤不彻底；膜在处理过程中过干；二抗用量过多等。
5.5.注意及时更换显影液、定影液。

pcr相关试剂实验结果分析：

PCR实验结果的分析涉及多个方面，‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等，‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：‌

循环次数过多：‌增加模板量减少循环次数，‌缩短退火时间及延伸时间，‌或改用两种温度的PCR循环，‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低：‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增，‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题：‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题，‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题：‌运输储存不当可能引起试剂盒失效，‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板：‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果：‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果，‌需要注意以下几点：‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染，‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析，‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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