HG TaqMan miRNA反转录试剂盒

HG TaqMan miRNA反转录试剂盒

商品属性：

 产品介绍：

描述： TaqMan miRNA 反转录试剂盒采用加 A 法进行反转录，加 A 法的反转录效率远高于茎环法，因 此，采用该方法可极大的提高检测灵敏度（原理见图 1）。 该试剂盒操作简单，仅需要两步即可轻松完成 miRNA 的 cDNA 合成，合成的 cDNA 可用于所有 miRNA 的后续定 量检测。反转录完毕后采用特异性的上游引物和接头引物 进行 PCR 扩增，FAM 标记 TaqMan 探针作为荧光报告基 团进行定量检测（原理见图 1）。  TaqMan miRNA 反转录试剂盒专用于 miRNAs 分子的反转录试验，转录获得的 cDNA 产物用于 TaqMan 定量 PCR 方法检测 miRNAs 分子

储存：请置于-20°C，可保存 2 年；避免反复冻融

操作方法：

1 按以下组分在 0.2 ml EP 管中配制应液
miRNA （5～100 ng/μl） 4 μl
5×TaqMan miRNA RT Solution A 1 μl
注意：不建议使用 Total RNA，Total RNA 试验结果通常差
于 miRNA。
2 在 PCR 仪上按以下条件进行加 A 反应:
 37°C 30min
 85°C 5min
3 反应完毕后，在上述 5μl 反应体系中加入如下试剂，并
混合均匀。
10×TaqMan miRNA RT Primer 2 μl
10×TaqMan miRNA RT Solution B 2 μl
H2O 11 μl
4 在 PCR 仪上按以下条件进行反转录反应:
 30°C 5min
55°C 60min
 95°C 5min
获得的 cDNA 产物可用于多个目标 miRNA 的检测。反转录完毕后获得的 miRNA cDNA，可加入 20~80μl ddH20 稀释2~5 倍，通常取 2μl 即可用于 HG TaqMan miRNA 定量 PCR试剂盒检测。 

pcr相关试剂实验结果分析：

PCR实验结果的分析涉及多个方面，‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等，‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：‌

循环次数过多：‌增加模板量减少循环次数，‌缩短退火时间及延伸时间，‌或改用两种温度的PCR循环，‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低：‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增，‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题：‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题，‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题：‌运输储存不当可能引起试剂盒失效，‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板：‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果：‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果，‌需要注意以下几点：‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染，‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析，‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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