HG TaqMan miRNA反转录试剂盒
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1318-25T | 25T | HG TaqMan miRNA反转录试剂盒 |
P-PR1318-100TX20μl | 100TX20μl | HG TaqMan miRNA反转录试剂盒 |
产品介绍:
描述: TaqMan miRNA 反转录试剂盒采用加 A 法进行反转录,加 A 法的反转录效率远高于茎环法,因 此,采用该方法可极大的提高检测灵敏度(原理见图 1)。 该试剂盒操作简单,仅需要两步即可轻松完成 miRNA 的 cDNA 合成,合成的 cDNA 可用于所有 miRNA 的后续定 量检测。反转录完毕后采用特异性的上游引物和接头引物 进行 PCR 扩增,FAM 标记 TaqMan 探针作为荧光报告基 团进行定量检测(原理见图 1)。 TaqMan miRNA 反转录试剂盒专用于 miRNAs 分子的反转录试验,转录获得的 cDNA 产物用于 TaqMan 定量 PCR 方法检测 miRNAs 分子
储存:请置于-20°C,可保存 2 年;避免反复冻融
操作方法:
1 按以下组分在 0.2 ml EP 管中配制应液
miRNA (5~100 ng/μl) 4 μl
5×TaqMan miRNA RT Solution A 1 μl
注意:不建议使用 Total RNA,Total RNA 试验结果通常差
于 miRNA。
2 在 PCR 仪上按以下条件进行加 A 反应:
37°C 30min
85°C 5min
3 反应完毕后,在上述 5μl 反应体系中加入如下试剂,并
混合均匀。
10×TaqMan miRNA RT Primer 2 μl
10×TaqMan miRNA RT Solution B 2 μl
H2O 11 μl
4 在 PCR 仪上按以下条件进行反转录反应:
30°C 5min
55°C 60min
95°C 5min
获得的 cDNA 产物可用于多个目标 miRNA 的检测。反转录完毕后获得的 miRNA cDNA,可加入 20~80μl ddH20 稀释2~5 倍,通常取 2μl 即可用于 HG TaqMan miRNA 定量 PCR试剂盒检测。 ![1.png 1.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/6c3845b4-40f6-4da9-9255-cd3d60482c38.jpg)
![5.jpg](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/e61abc57-2a7c-4156-9260-f14e6ba63934.jpg)
![6.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/62851bc5-3a8d-40e2-a984-d347a9c64d3e.jpg)
![7.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/1321522b-6687-4131-a7b4-7a74974aa01c.jpg)
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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