M-MLV One-Setp qRT-PCR(Probe) Kit (探针法qRT-PCR反转录荧光定量Mix一步法试剂盒)
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1143-20μl×100 rnxs | 20μl×100 rnxs | M-MLV One-Setp qRT-PCR(Probe) Kit (探针法qRT-PCR反转录荧光定量Mix一步法试剂盒) |
产品介绍:
【贮藏及有效期】 试剂盒-20℃以下冷冻避光保存,有效期为 12 个月
【产品简介】
采用了探针法 (TaqMan) 一步RT-qPCR 方案。反转录与qPCR 反应在同一反应体系中连续进行,反应中不需添加任何试剂,操作简 单,并能有效防止污染。RT Enzyme Mix含有反转录酶与RNA酶抑制剂,Taq HS(5U/μl)为抗体修饰的Taq酶,具有热启动,检测精确度更高,灵敏度更高的特点。本制品可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对多种丰度的靶基因进行准确定量检测,重复性好,可信度高。
操作方法:
*1 通常引物终浓度为 0.2 μM 可以得到较好结果。反应性能较差时,可以在 0. 1~1.0 μM 范围内调整引物浓度。
*2 探针浓度与使用的 Real Time PCR 扩增仪、探针种类、荧光标记物质种类有关,实际使用时请参照仪器说明书,或各荧光探针 的具体使用要求进行。
*3 模板使用量依据具体实验而定,建议RNA 使用量在10 pg- 100 ng。
【产品特点】
1.RT Enzyme Mix含有反转录酶与RNA酶抑制剂,可对微量RNA进行反转录。
2.qPCR使用了Taq HS(5U/μl),可以进行热启动法PCR反应,与产品Buffer系统结合,具有扩增效率高,灵敏度高的特点。
3.只能使用特异引物,不能使用Oligo(dT)和Random Primer。
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![6.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/62851bc5-3a8d-40e2-a984-d347a9c64d3e.jpg)
![7.png](https://img1.17img.cn/17img/images/202408/uepic/1321522b-6687-4131-a7b4-7a74974aa01c.jpg)
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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