内质网提取试剂盒（低速离心法）

产品名称：内质网提取试剂盒（低速离心法）

产品规格：50T

高尔基体（Golgi apparatus, Golgi bodies）是由许多扁平的囊泡构成的以分泌为主要功能的细胞器。又称高尔基器或高尔基复合体；高尔基体是由数个扁平囊泡堆在一起形成的高度有极性的细胞器。常分布于内质网与细胞膜之间，呈弓形或半球形，凸出的一面对着内质网称为形成面（forming face）或顺面（cis face）。凹进的一面对着质膜称为成熟面（mature face）或反面（trans face）。顺面和反面都有一些或大或小的运输小泡，在具有极性的细胞中，高尔基体常大量分布于分泌端的细胞质中。因其看上极像滑面内质网，因此有科学家认为它是由滑面内质网进化而来的。 高尔基体中的酶主要有糖基转移酶、磺基-糖基转移酶、氧化还原酶、磷酸酶、蛋白激酶、甘露糖苷酶、转移酶和磷脂酶等不同的类型。高尔基体的主要功能将内质网合成的蛋白质进行加工、对比分类、与包装，然后分门别类地送到细胞特定的部位或分泌到细胞外。

内质网提取试剂盒（低速离心法）,使用方法

1. 提取液制备：
将试剂A1和试剂A2混合，配成蛋白提取液A，充分混匀备用。
每500 μl蛋白提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用

2. 取5-10×106个以上细胞，在4℃，500×g条件下离心3-5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4. 细胞样品中加入200μl-400μl冷的试剂 A，充分混匀。

5. 在2-8℃条件下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解，细胞沉淀明显减少。

6. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。

7. 将上清吸入另一干净离心管，在37℃水浴5-10分钟。

8. 在37℃，1000×g力离心5分钟，此时溶液分为两层，下层是膜蛋白约为30-50μl。

9. 小心移除上层液体，收集上层部分留作备用分析。

10. 用150-200μl冰冷的试剂B充分溶解下层膜蛋白部分，混匀后冰浴2分钟，37℃水浴5-10分钟，37℃，1000×g力离心5分钟，此时溶液分为两层，下层是膜蛋白约为30-50μl。小心移除上层液体，保留下层。

11. 按以上步骤再次抽提下层膜蛋白(此步骤可以选做，一般不需要做)。

12. 用50-200μl冷的试剂C膜蛋白溶解液溶解下层膜蛋白部分，即得膜蛋白。

13. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

使用注意事项：

1旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

4 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

5 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

6 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

7下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

内质网提取试剂盒（低速离心法），注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

保存温度2-8℃

保质期1年

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