叶绿体蛋白提取试剂盒（蛋白组实验、质谱适用）-非酶法

产品名称：叶绿体蛋白提取试剂盒（蛋白组实验、质谱适用）-非酶法

产品规格：50T

蛋白提取试剂盒（蛋白质组学实验适用）适用于从各种原代或传代动物细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取总蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份，不含SDS、Triton X-100、chaps等可能影响质谱实验的组份，最后得到的蛋白质样品经过透析或者脱盐处理后将不含有去垢剂、高浓度盐等影响，基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。 本产品的蛋白酶抑制剂混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF导致的质谱峰漂移，因此使用本产品提取的蛋白样品可以用于质谱(Mass Spectrometry, MS)检测和分析，蛋白质组学(proteomics)等相关研究。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

叶绿体蛋白提取试剂盒（蛋白组实验、质谱适用）-非酶法,使用方法

1. 提取液制备：
将试剂A1和试剂A2混合，配成蛋白提取液A，充分混匀备用。
每500 μl蛋白提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用

2. 取5-10×106个以上细胞，在4℃，500×g条件下离心3-5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4. 细胞样品中加入200μl-400μl冷的试剂 A，充分混匀。

5. 在2-8℃条件下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解，细胞沉淀明显减少。

6. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。

7. 将上清吸入另一干净离心管，在37℃水浴5-10分钟。

8. 在37℃，1000×g力离心5分钟，此时溶液分为两层，下层是膜蛋白约为30-50μl。

9. 小心移除上层液体，收集上层部分留作备用分析。

10. 用150-200μl冰冷的试剂B充分溶解下层膜蛋白部分，混匀后冰浴2分钟，37℃水浴5-10分钟，37℃，1000×g力离心5分钟，此时溶液分为两层，下层是膜蛋白约为30-50μl。小心移除上层液体，保留下层。

11. 按以上步骤再次抽提下层膜蛋白(此步骤可以选做，一般不需要做)。

12. 用50-200μl冷的试剂C膜蛋白溶解液溶解下层膜蛋白部分，即得膜蛋白。

13. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

使用注意事项：

1旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

4 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

5 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

6 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

7下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

叶绿体蛋白提取试剂盒（蛋白组实验、质谱适用）-非酶法，注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

保存温度2-8℃

保质期1年

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