Ribonuclease R(Rnase R) 核酸外切酶

Ribonuclease R(RNase R) 来源于E.coli，通过基因工程重组表达获得。该酶为Mg2+依赖的3’-5’核糖核酸外切酶,其可消化几乎所有线性RNAs底物，但不能消化环状RNA(circular RNA)、套索RNA(lariat RNA)、双链RNA、3’突出端<7nt的双链RNA。Rnase R核酸外切酶可高效的去除不含二级结构的线性RNA，从而纯化获得环状RNA分子，便于后续RNA-sequencing等实验研究。

单位定义

在20 mM Tris-HCl（pH7.5），100 mM KCl，0.5 mM Mg2+条件下, 37°C下水解1 μg的poly-r(A)产物所需酶量为1个活性单位。

应用生物样品中环状RNA的富集

内含子套索序列的分析和鉴定等

环状RNA研究

可变剪接研究

储存

置于-20°C可保存3年，避免反复冻融。

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

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应用实例3：采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2，结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性，而60℃条件下1min内酶活完全释放，恢复100%活性