Extreme Thermostable RNase HII(极耐热RNase H2)

Extreme Thermostable RNase HII(极耐热RNase H2)是一种来源于极端耐热的菌株的内源性 核酸内切酶，它识别RNA/DNA 杂交链并切割RNA链，其对单链RNA切割活性极低，且对dsDNA、ssDNA无 切割活性。该RNase HII 酶在DNA/RNA duplex的单核糖核苷酸残基处从5’端进行切割，切割后 产生一个5′ 端磷酸基团和一个 3′ 端羟基。该RNase HII 酶在 70- 75°C 具有最佳活性，在 50°C 到 75°C 间均具有活性，但其在室温下活性非常低。该酶 极度耐热，在95°C加热30min后仍保留全部活性，因此其与大多数的PCR缓冲体系兼容，可用于 RNase H2依赖性PCR（rhPCR）等实验。与RNase HI 相比，RNase HII可识别单个核糖核苷酸并进行切 割，而RNase HI识别四个连续核糖核苷酸的2'-OH；另外，RNase HII可降解冈崎片段，而Rnase HI没有这个活性。

单位定义

一个单位是指在 60°C 下，15分钟切割 1nmol 含有单个RNA的嵌合DNA/RNA杂交双链体底物所需的酶量。

储存

置于-20°C，可保存2年。

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

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应用实例3：采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2，结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性，而60℃条件下1min内酶活完全释放，恢复100%活性