多玛克 TSA多重荧光染色试剂盒-四色

产品名称：TSA多重荧光染色系统

产品货号：DK450-50s

产品规格：50μL/100T

产品等级：合格品

主要成分：荧光素酪胺（Fluorescein Tyramide）、Cy系列弱碱性化合物

储存条件：长期-20℃储存，开封后2-8℃储存，需避光保存

生产日期：见外包装

有效期：12个月

用途：用于石蜡组织切片的多重荧光染色

原理介绍: 酪酰胺信号放大(TSA，Tyramide signal amplification)技术是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白进行标记的酶学检测方法，类似常规免疫组化的DAB显色方法   ，TSA技术同样采用HRP标记的二抗，同样有对应的“显色”步骤（HRP催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，产生活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。之后用热修复法洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP复合物，重复下一种一抗-hrp二抗来第二轮孵育，换另一种酪胺荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。

TSA（酪胺信号放大）技术的基本原理是利用酪胺在辣根过氧化物酶（HRP）的催化作用下，在过氧化氢（H₂O₂）介导下产生酶促反应产物。这些产物能够与周围蛋白质中的氨基酸残基（如色氨酸、组氨酸和酪氨酸）结合，导致荧光素在抗原-抗体结合位点的积累，从而增强检测信号，提升10到100倍。

简而言之，这种技术在进行多重免疫荧光实验时，不是直接在二抗上连接荧光素，而是利用HRP来催化体系中加入的非活性荧光素。荧光素在HRP和过氧化氢的协同作用下被激活，与附近的蛋白质酪氨酸残基形成共价键，使得荧光素稳定地结合到蛋白样本上。

经过微波、煮沸或水浴等热处理后，未共价结合的抗体会被洗掉，但荧光素则稳定结合在样本上。然后，可以更换不同的一抗进行下一轮孵育，多次重复此过程。直到所有目标抗体都已孵育并结合完毕，进行结果检测。

染色原理：TSA是高稳定性高表达的新一代酪胺信号放大技术（TyramideSignalAmplification）的简称。 利用基于IHC免疫组化的“<一抗-二抗-HRP＞底物”原理及步骤，TSA荧光化合物在HRP催化下与靶点附近的酪氨酸残基共价结合， 生成稳定荧光化合物。

与普通免疫荧光相比，TSA技术：

l 可将信号放大10-1000倍。

l 荧光化合物具有理想的光、热、PH稳定性。

l 多色荧光标记不受一抗种属限制。

产品介绍：

产品名称：TSA染料组合装试剂盒15μL(30T)

规格：15μL/三色、15μL/四色、15μL/五色、15μL/六色、15μL/七色

货号：DK350-15、DK450-15、DK550-15、DK650-15、DK750-15

产品说明：

DK350-15包含TSA2支和核染料1支(包含520、570、DAPI)、TSA Buffer快速反应缓冲液1瓶。

DK450-15包含TSA 3支和核染料1支(包含520、570、650、DAPI)、TSA Buffer快速反应缓冲液1瓶。

DK550-15包含TSA 4支和核染料1支(包含520、570、650、700、DAPI)、TSA Buffer快速反应缓冲液1瓶。

DK650-15包含TSA 5支和核染料1支(包含440、520、570、650、700、NU470并搭配封片剂2型)、TSA Buffer快速反应缓冲液2瓶。

DK750-15包含TSA 6支和核染料1支(包含440、520、570、650、700、770、NU470并搭配封片剂2型)、TSA Buffer快速反应缓冲液2瓶。

产品名称：TSA染料组合装试剂盒50μL(100T)

规格：50μL/三色、50μL/四色、50μL/五色、50μL/六色、50μL/七色

货号：DK350-50、DK450-50、DK550-50、DK650-50、DK750-50

产品说明：

DK350-50包含TSA2支和核染料1支(包含520、570、DAPI)、TSA Buffer快速反应缓冲液1瓶。

DK450-50包含TSA 3支和核染料1支(包含520、570、650、DAPI)、TSA Buffer快速反应缓冲液1瓶。

DK550-50包含TSA 4支和核染料1支(包含520、570、650、700、DAPI)、TSA Buffer快速反应缓冲液1瓶。

DK650-50包含TSA 5支和核染料1支(包含440、520、570、650、700、NU470并搭配封片剂2型)、TSA Buffer快速反应缓冲液2瓶。

DK750-50包含TSA 6支和核染料1支(包含440、520、570、650、700、770、NU470并搭配封片剂2型)、TSA Buffer快速反应缓冲液2瓶。

产品名称：石蜡切片TSA成套试剂盒15μL(30T)

规格：15μL/三色15μL/四色15μL/五色15μL/六色15μL/七色

货号：DK350-15S、DK450-15S、DK550-15S、DK650-15S、DK750-15S

产品说明：

DK350-15S包含TSA 2支和核染料1支(包含520、570、DAPI)、TSA Buffer快速反应缓冲液1瓶、修复/速除二合一缓冲液1瓶、3%双氧水1瓶、封闭液1瓶、一抗稀释液1瓶、快速封片剂1瓶。

DK450-15S包含TSA 3支和核染料1支(包含520、570、650、DAPI)、TSA Buffer快速反应缓冲液1瓶、修复速除二合一缓冲液1瓶、3%双氧水1瓶、封闭液1瓶、一抗稀释液1瓶、快速封片剂1瓶。

DK550-15S包含TSA4支和核染料1支(包含520、570、650、700、DAPI)、TSA Buffer快速反应缓冲液1瓶、修复/速除二合一缓冲液1瓶、3%双氧水1瓶、封闭液1瓶、一抗稀释液1瓶、快速封片剂1瓶。

包含TSA 5支和核染料1支(包含440、520、570、650、700、DAPI)、TSA Buffer快速反应缓冲液2瓶、修复速除二合一缓冲液2瓶、3%双氧水1瓶、封闭液1瓶、一抗稀释液1瓶、快速封片剂1瓶。

包含TSA 6支和核染料1支(包含440、520、570、650、700、770、NU470并搭配封片剂2型)、TSA Buffer快速反应缓冲液2瓶、修复/速除二合一缓冲液1瓶、3%双氧水1瓶、封闭液1瓶、一抗稀释液1瓶、快速封片剂1瓶。

产品名称：石蜡切片TSA成套试剂盒50μL(100T)

规格：50μL/三色、50μL/四色、50μL/五色、50μL/六色、50μL/七色

货号：DK350-50S、DK450-50S、DK550-50S、DK650-50S、DK750-50S

产品说明：

DK350-50S包含TSA 2支和核染料1支(包含520、570、DAPI)、TSA Buffer快速反应缓冲液1瓶、修复速除二合一缓冲液1瓶、3%双氧水1瓶、封闭液1瓶、一抗稀释液1瓶、快速封片剂1瓶。

DK450-50S包含TSA3支和核染料1支(包含520、570、650、DAPI)、TSA Buffer快速反应缓冲液1瓶、修复速除二合一缓冲液1瓶、3%双氧水1瓶、封闭液1瓶、一抗稀释液1瓶、快速封片剂1瓶。

DK550-50S包含TSA4支和核染料1支(包含520、570、650、700、DAPI)、TSA Buffer快速反应缓冲液1瓶、修复/速除二合一缓冲液1瓶、3%双氧水1瓶、封闭液1瓶、一抗稀释液1瓶、快速封片剂1瓶。

DK650-50S包含TSA 5支和核染料1支(包含440、520、570、650、700、DAPI)、TSA Buffer快速反应缓冲液2瓶、修复速除二合一缓冲液2瓶、3%双氧水1瓶、封闭液1瓶、一抗稀释液1瓶、快速封片剂1瓶。

DK750-50S包含TSA 6支和核染料1支(包含440、520、570、650、700、770、NU470并搭配封片剂2型)、TSA Buffer快速反应缓冲液2瓶、修复/速除二合一缓冲液1瓶、3%双氧水1瓶、封闭液1瓶、一抗稀释液1瓶、快速封片剂1瓶。

抗体速除体系

如何快速、有效地去除上一轮标记的<一抗-二抗-HRP＞复合物是TSA多 色荧光标记成功之关键。 我们定向、精确研发抗体速除体系，显著提高FFPE（石蜡切片）染色成功率和效率，成功扩展TSA多色荧光标记应用领域。

修复/速除二合一缓冲液

传统FFPE多色荧光标记利用枸椽酸盐缓冲液微波加热沸腾10-20 min去除 抗体复合物， 可能存在如下问题： 对于CD3、Keratin 19等高表达的抗原，20 min可能不足以完全去除抗体， 从而造成下一轮染色“串染”。累积多次微波加热（例如20 minX6 = 120 min）可能“过修复”抗原，产生异常抗原表位, 造成假阳性染色，

尤以末一轮染色为甚。 与普通修复液相比：

● 微波加热至沸腾即可关火冷却，去除效果远胜普通方法沸腾20 min!

● 显著杜绝“串染”、“过修复”。

● 大大节省您宝贵的实验时间。

● 详细使用方法请参照“应用Protocol”。

快速反应缓冲液

与普通反应缓冲液相比：

● 反应时间从5~20 min缩短至10 sec~10 min。

● 反应体系不依赖H2O2,有效期更长。

● 1:100-1000加入高能TSA染料（现用现配）。

水晶封片剂与普通封片剂相比

● 抑制气泡配方，吸取式滴瓶，防止封片过程产生泡。

● 增强型防淬灭配方，TSA荧光可保存6个月~2年。

● Type 1适应绝大部分化学荧光染料和内源性荧光蛋白。

● Type 2专为包含核染料TG470SN的多色荧光标记使用。

● 快干可固化配方，RI值1.38-1.41

实验步骤

1.石蜡切片复水：切片置于玻片架放入二甲苯10minX3，乙醇100%>100%>95%>95%>85%>75%各5min。

2.切片置于玻片架放入ddH2O，5min。

3.玻片架放入修复盒，修复液没过切片上沿，微波或高压修复。

请务必根据经验选择修复液及修复条件。

Option：修复/速除二合一缓冲液修复条件：【修复速出缓冲液配置：直接向瓶中加入92ml ddH2O 溶解粉末即可配

置出50X 储液】50X浓缩液用ddH2O稀释至工作液，微波炉高功率至沸腾，维持20 sec, 转低功率维持低沸状态5 min, 关火自然冷却。

注意：修复/速除二合一缓冲液可能不适用于高压修复。

4.PBS 5minX3。

5.用免疫组化疏水笔将组织圈出。

6.加3%双氧水去除内源性过氧化物酶，室温10 min。

7.PBS 5minX3。

8.滴加封闭液，室温30min。

9.一抗稀释液稀释抗体（稀释比例需自行测试或参考官网抗体说明书），滴加样本，湿盒内4°C过夜或恒温箱内37°C孵育1hr（根据经验

及实验安排决定）。

10.PBS 5minX3。

11.根据一抗种属滴加hrp二抗，室温30min。

12.PBS 5minX3。

13.显色反应及信号放大：

TSA染料与快速反应缓冲液稀释染料1:99~199（具体稀释条件参照荧光染料光谱信息）稀释成工作液，视样本类型和样本大小，大约

50-200μL/张样本，混匀并滴加，初始反应室温60 sec。（注：染料为共价结合，微波不可去除，注意染料添加顺序）

PBS 2 min中止反应，科研实验时建议镜检，在显微镜下观察每轮染色效果；多张样本同时实验时为了减少因镜检时间较长造成同批次

间的差异化， 建议进行抽检，染色效果理想情况下，可考虑不全部镜检。镜检过程中如果出现背景荧光较强，可于PBS中静置一段时间

再观察；如果觉得信号强度不够，可以继续滴加1:20-1:50稀释的工作液，室温反应足够长的时间。显色时间根据抗体的种类和稀释的比

例不同，推荐在60sec左右，尽量不要超过20min。

14.抗体复合物的去除：

方法：修复/速除二合一缓冲液：50X浓缩液用ddH2O稀释至工作液，微波炉高功率至修复液沸腾，维持10sec关火，5min后即可将烧

杯置于盆中水浴，降至室温，轻松为您节省至少20min!（用过的缓冲液不建议重复使用）

●Option：切片置于盛满PH6.0柠檬酸盐修复液中或PH9.0 EDTA碱性抗原修复液中，微波炉高火加热至沸腾，2min10sec，在微波炉内

静置5min后取出，将修复盒置于冰水中冷却15min。

15.PBS 5min。

16.避光湿盒内室温孵育5min。核染料PBS洗三次（若使用DAPI则需要PBS清洗，若使用NU47则不需要PBS清洗 ，具体稀释条件参照

荧光染料光谱信息）。

17.防荧光淬灭封片剂滴加1-2滴，盖玻片封片。

18.置于37°C恒温箱固化干片30min~1hr（切勿放入湿盒）。

19.拍照。

20.切片保存：放置于片盒，于-20°C冰箱长期保存（可防止核染料扩散）。如果保存于室温，请避光并于1个月之内完成拍照

备注：实验步骤中蓝色字体步骤进入多轮循环染色步骤，重复多轮染色直至完成。