荧光抗体细胞染色有哪些步骤?

古朵生物

2022/10/26 10:46

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　　标签：流式抗体古朵生物荧光抗体

　　荧光抗体细胞染色有哪些步骤?

　　染色缓冲液(BSA)的配制：

　　PBS含有1% FBS和0.09% NaN3，置于冰上或4度冰箱备用。

　　准备单细胞悬液：淋巴组织、骨髓、血液或培养的细胞。

　　用冰染色缓冲液洗细胞2次，离心细胞，用冰染色缓冲液重悬细胞，使终浓度为2×107细胞/ml。

　　各取50ul(106细胞)细胞悬液到2个圆底的Ep管中。

　　根据抗体说明书在其中1个Ep管中加入合适的抗体量，另外1个加入同型对照抗体，冰上避光孵育20分钟(建议每5分钟轻轻混匀，以免细胞沉积)。根据荧光抗体的亲和力适当延长染色时间。

　　用1ml染色缓冲液洗2次去除未结合的抗体，300×g离心5分钟，每次离心后小心吸取上清。

　　用适量染色缓冲液(如500ul)重悬细胞。

　　流式细胞仪分析染色结果(不超过4小时)。如果暂时无法检测，也可以将染色后的细胞用4%多聚甲醛固定后，避光储存在4度。固定后的细胞可以保存zui多一个星期。

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